附件4
肠道病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请肠道病毒核酸检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门审评注册申报资料提供参考
指导原针肠道病毒核酸检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原供申请审查员指导性文件涉注册审批等行政事项作法规强制执行够满足法规求方法采应提供详细研究资料验证资料应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
（）肠道病毒简介
肠道病毒属RNA病毒科肠道病毒属引起类致病肠道病毒种包括肠道病毒ABCD组100血清型类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒柯萨奇病毒A组（Coxsackievirus ACA）柯萨奇病毒B组（Coxsackievirus BCB）肠道致细胞病变孤病毒（简称埃病毒）（Echovirus ECHO）新肠道病毒等新肠道病毒1969年陆续分离例新型肠道病毒71型（EV71）等年鼻病毒（Rhinovirus）划入肠道病毒属鼻病毒包括ABC组已先分离140血清型
肠道病毒球形直径28～30nm核衣壳二十面体立体称包膜病毒衣壳60相壳粒组成排列12五聚体壳粒VP1VP2VP3VP4四种蛋白组成
肠道病毒基组单股正链RNA全长约72～84kb基组分三部分两端保守非编码区肠道病毒中源性非常显著中5’端非编码区常作肠道病毒通检测试剂检测靶基中间连续开放读码框包含结构蛋白编码区非结构蛋白编码区结构蛋白编码区次编码VP4VP2VP3VP1４衣壳蛋白衣壳蛋白仅含抗原决定位点决定病毒组织嗜性受体识位点介导病毒细胞吸附进入非结构蛋白编码区负责编码病毒基组复制病毒颗粒包装等关蛋白酶RNA复制细胞器修饰细胞裂解形态形成中发挥功
（二）肠道病毒致病性
肠道病毒肠道中增殖通常引起肠道疾病90肠道病毒感染隐性感染仅出现轻微呼吸道感染流感样症状肠道病毒引起相床症状种病毒引起种床疾病
肠道病毒传染源患者症状病毒携带者传播途径粪口途径通呼吸道传播夏秋季年中流行期肠道病毒呼吸道咽喉肠道侵入门户先局部黏膜咽扁桃体等淋巴组织肠道集合淋巴结中初步增殖然释放入血形成第次病毒血症扩散带受体靶组织次增殖引起第二次病毒血症床症状脊髓灰质炎病毒识受体免疫球蛋白超家族细胞黏附分子少组织表达种受体脊髓前角质细胞根神节细胞运动神元骨骼肌细胞淋巴细胞等柯萨奇病毒埃病毒识受体组织细胞中分布广泛包括中枢神系统心肺胰黏膜皮肤系统等引起疾病谱复杂数肠道病毒杀细胞病毒直接靶细胞产生裂解性感染年龄段群均感染肠道病毒
肠道病毒致疾病：
1手足口病：肠道病毒感染引起发热咽喉痛全身适手足口腔等部位皮疹疱疹特征常见传染病数手足口病患者症状轻微具限性相部分患者致死性心肺功疾病神系统发症重症患者病情进展迅速甚导致死亡国手足口病疫情尤严峻已成严重影响国居民生命健康公卫生问题
手足口病致病病原体传染源患者隐性感染者传播途径粪口传播接触患者疱疹液传播接触病携带者粪便唾液疱疹液污染日常生活品均传播病原体年报道显示该病原体垂直传播导致新生重症感染肠道病毒普遍易感年龄组均感染发病5岁童尤3岁童发病率高该病流行明显区性全年均发生般5—7月发病高峰该病潜伏期般2—10天均潜伏期3—5天感染者发病前数天咽拭子样粪便样中检出病毒病程7天左右咽部排毒持续发病1—2周粪便排毒持续发病3—5周
引起手足口病肠道病毒包括柯萨奇病毒A组2456791016型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等中EV71CA16型较常见
2菌性脑膜炎：肠道病毒感染引起种疾病常表现短暂发热头痛等偶尔肌肉酸痛伴皮疹重者出现颈项强直嗜睡昏迷意识障碍脑膜刺激征等症状目前发现肠道病毒中60血清型引起菌性脑膜炎包括脊髓灰质炎病毒型柯萨奇病毒A组中数型柯萨奇病毒B组1—6型埃病毒数型肠道病毒71型等
3脊髓灰质炎：脊髓灰质炎病毒感染引起疾病中85Ⅰ型脊髓灰质炎病毒引起国ⅡⅢ型病毒感染发病病例病毒侵犯脊髓前角运动神细胞导致弛缓性肢体麻痹见童称麻痹症
4疱疹性咽峡炎：柯萨奇病毒A组某血清型引起典型症状软腭悬雍垂周围出现水泡性溃疡损伤
5流行性胸痛：常柯萨奇病毒B组引起症状突发性发热单侧胸痛
6心肌炎心包炎：柯萨奇病毒B组引起婴室引起暴发性流行死亡率高散发流行成童
7眼病：柯萨奇病毒A组24v型引起急性结膜炎EVD70型引起急性出血性结膜炎
外肠道病毒感染病毒感染疲劳综合征糖尿病相关
（三）指导原适范围
1指导原适利荧光探针聚合酶链式反应（Realtime PCR）类分子生物学方法特定肠道病毒基序列检测目标源体样中肠道病毒核酸进行体外定性检测床辅助诊断手足口病等肠道病毒感染相关性疾病涉床途肠道病毒核酸检测试剂参考指导原手足口病致病病原体中未包含鼻病毒鼻病毒指南讨范围
2床检测手足口病致病病原体检测试剂适样类型应鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液（仅限出现神系统症状病例）血液等
3指导原适肠道病毒通核酸检测试剂单病毒种检测试剂单病毒血清型检测试剂通检测试剂检病毒型应少包括柯萨奇病毒A组245679101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等针柯萨奇病毒核酸检测试剂检病毒型应少包括述A组B组中血清型针柯萨奇A组B组核酸检测试剂检病毒型应少包括述该组列血清型针埃病毒核酸检测试剂检病毒型应少涵盖埃病毒36111416192530等血清型
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明关产品研究结果总结评价等容中预期途相关床适应症应重点描述申报产品检测肠道病毒型床适应症相关性相关肠道病毒国流行特征产品描述应明确申报产品检出肠道病毒型尚未验证肠道病毒型类产品国外批准市情况应着重检病毒型型检测低检测限型间交叉反应等方面写明拟申报产品目前市场已获批准类产品间区综述资料撰写应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）相关求
（二）原材料研究资料
类产品原材料包括引物探针DNA聚合酶dNTP逆转录酶尿嘧啶DNA糖基化酶（适）核酸分离纯化组分（）试剂盒质控品企业参考品等应提供原材料选择源制备质量标准等研究资料质控品确认试验资料生产企业应提供企业参考品原材料选择源质量指标参考品制备阴阳性确认程等
1引物探针：包括申报产品检测靶序列引物探针引物探针应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况针检测靶序列引物探针建议设计两套套引物探针供筛选针预期适肠道病毒型进行检出准确性特异性（交叉反应）评价采扩增靶序列型肠道病毒基组研究方法终确认佳组合提交筛选研究数引物探针质量标准应少包括序列准确性纯度检查浓度检查功性实验等
2酶：需酶包括逆转录酶DNA聚合酶质量标准：
21逆转录酶应包括核酸逆转录活性核酸切酶活性等
22 DNA聚合酶应包括DNA聚合酶活性核酸切酶活性热启动力热稳定性等
23申报产品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶应酶活性热稳定性等质量控制标准进行规定
3dNTP：质量标准应少包括纯度检查功性实验等
4核酸分离纯化组分（）原理介绍组成原材料质量控制标准相关验证资料
5试剂盒质控品
试剂盒质控体系通设置种试剂盒质控品实现针阳性质控品阴性质控品申请应明确质控品源质量标准质控品阴阳性确认方法相关验证资料申报产品质控体系应考虑方面：
51阳性质控品中应含天然工合成包含试剂盒检测靶序列RNA少应包含床较常见血清型质控品应参样处理检测全程核酸行提取等步骤企业应质控品检测结果（Ct值）做出明确范围求
52阴性质控品应含试剂盒检测靶序列RNA质控品应参样处理检测全程核酸行提取等步骤存交叉污染产生假阳性结果进行质量控制
53（标）抑制导致假阴性结果进行质量控制申请应（标）引物探针设计模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线量降低靶基检测造成抑制检测结果（Ct值）应做出明确范围求
6企业参考品：应详细说明关企业参考品原料选择制备阴阳性确认等试验
企业参考品核酸性质应产品预期检测靶物质致鉴肠道病毒RNA病毒企业参考品采灭活病毒含肠道病毒基组装甲病毒（假病毒）工克隆合成肠道病毒基组RNA具体求：
61阳性参考品阴性参考品
阳性参考品应包含指南范围中规定申报产品少应检出肠道病毒血清型例肠道病毒通型检测试剂阳性参考品应少包含柯萨奇病毒A组245679101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等单病毒种单病毒血清型检测试剂阳性参考品应包含该类产品少应检出血清型阴性参考品应考虑检测特异性评价应纳入试剂盒检测范围肠道病毒血清型样品（）病原体样品
62检测限参考品
申请应明确检测限参考品中病毒核酸浓度确定方法明确检测限参考品中病毒核酸浓度确定检测限参考品中肠道病毒核酸浓度应申报产品检测限浓度略高检测限浓度检测限参考品应包含申报产品少应检出肠道病毒血清型
63精密度参考品
包含涉肠道病毒血清型应选择床较常见型针选型应分少设置弱阳性水
原材料企业生产生产工艺必须相稳定提交生产工艺验证报告原材料购供应商需针供应商选择提供评价数提供供应商出具质量标准出厂检定报告申请该原材料进行质量检验资料
（三）生产工艺反应体系研究资料
1介绍产品生产工艺图表方式表示说明生产工艺确定
2反应原理介绍
3详述样采集样处理方式选择设置提供相关研究资料
4确定佳反应体系研究资料包括样量种酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度反应阶段温度时间循环数等
5适机型反应条件果差异应分详述提交验证资料
6申报产品包含核酸分离纯化试剂应提交核酸分离纯化程进行工艺优化研究资料
（四）分析性评估资料
申请应提交产品研制阶段试剂盒进行性评价研究资料项分析性评价应包括具体研究目试验方法接受标准试验数统计方法等详细资料关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括实验点适仪器试剂规格批号床样源等
针样类型申请应分完成性评估包括阴阳性符合率低检测限精密度分析特异性等
分析性评价试验方法参考国际国关体外诊断试剂性评估指导原进行类产品性评估中样品（非特说明）参考述企业参考品制备求项性评价应符合求
1核酸分离纯化性
进行靶核酸检测前应适核酸分离纯化步骤该步骤目量分离出目核酸外应相应纯化作PCR抑制物检测试剂否含核酸分离纯化组分企业应结合检测试剂特性配合核酸分离纯化试剂提取效率提取核酸纯度等做充分验证提供详细验证资料
2申请应明确申报产品检出肠道病毒血清型检出血清型建议申请采申报产品目前已知肠道病毒血清型样进行检测验证申报产品检血清型范围验证样床收集样病毒基组工构建假病毒
3阳性阴性参考品符合率
阳性参考品检测旨验证试剂盒检测范围肠道病毒血清型均适浓度检测阳性参考品检测结果应阳性阴性参考品旨评价试剂特异性阴性参考品检测结果应阴性
4低检测限
申报产品低检测限性评估资料应包含低检测限确定验证程
41应针申报产品检出CA16CA6EV71等常见肠道病毒血清型分进行确定建议采培养病毒原液进行梯度稀释配制系列稀释样品进行低检测限评价系列稀释度应够覆盖部分检出概率区间（0～100）通概率计算适方法进行测算选取适检出率水浓度作低检测限确定标准95（n≥20）阳性检出率水病毒原液浓度测定建议采空斑试验浓度水采空斑形成单位（PFU）计量单位
42应选择申报产品低检测限接低检测限病毒水申报产品低检测限进行验证验证低检测限样应少包含申报产品检出CA16CA6EV71等常见肠道病毒血清型应少选择病毒株进行验证企业应够提供低检测限验证病毒株源型浓度水（PFU）确认试验等信息
43申请应明确申报产品低检出肠道病毒基拷贝数水时提供确定程相关实验数项研究应针血清型分确认样血清型应包括申报产品低检测限参考品设置血清型
44申报产品检测企业低检测限参考品检测结果应满足相应求
5分析特异性
51交叉反应
申请应针出现检测样中病原体进行交叉反应验证交叉反应验证样品肠道病毒外病原体应量采灭活病原体培养物床样建议病毒细菌感染医学相关水进行交叉反应验证申请应详细说明交叉反应样源病原体鉴定滴度确定方法结果病原体种类考虑方面：试剂盒检测范围外肠道病毒血清型样中出现病原体建议病原体进行交叉反应验证：诺病毒单纯疱疹病毒12型肠道腺病毒水痘带状疱疹病毒轮状病毒甲型肝炎病毒星状病毒EB病毒风疹病毒麻疹病毒甲型流感病毒副流感病毒乙型流感病毒巨细胞病毒呼吸道合胞病毒流行性腮腺炎病毒戊肝病毒B族链球菌肺炎克雷伯菌肠杆菌脑膜炎奈瑟菌肺炎链球菌金黄色葡萄球菌沙门氏菌志贺菌弧菌流感嗜血杆菌卡莫拉菌草绿色链球菌奈瑟菌属黏液罗氏菌变形杆菌等
52干扰试验
应根采集样类型针存干扰情况进行验证建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价针代表性肠道病毒血清型少病毒界阳性水进行干扰试验验证干扰物质选取应少包括：血红蛋白黄疸（仅限血液样）脂血（仅限血液样）白细胞粘蛋白常见病毒治疗药物抗生素微生态制剂粪便中未消化食物纤维等
6精密度
企业应申报产品精密度指标标准差变异系数等评价标准做出合理求模拟样体现床样带变异素精密度评价中样应少包含精密度参考品干床样精密度评价试验应包含核酸分离纯化步骤针类产品精密度评价包括求：
61影响检测精密度变量进行验证检测试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应分析仪操作者试验点检测批次等素进行相关验证
62设定合理精密度评价周期例：期少20天检测天少2完成少2次完整检测批批间日日间操作者间精密度进行综合评价
63精密度评价床样均应少包含3水：阴性样品界阳性样品（中强）阳性样品根产品特性设定适精密度求床样精密度评价中次检测均应核酸提取开始
（五）阳性判断值确定资料
类试剂阳性判断值够获理想床灵敏度床特异性界值（Cutoff）荧光探针PCR方法Ct值确定资料建议采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行相关研究申请选取适床样进行试验确定阳性判断值
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉两部分容申报试剂稳定性适样稳定性研究前者包括实时稳定性（效期）开瓶稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
考虑病毒RNA极易降解特性企业应样稳定性进行研究包括冷藏冷冻两种条件效期验证合理温度范围间隔定时间段储存样进行全性分析验证确认类型样效期稳定性适冷冻保存样应冻融次数进行评价
样提取立进行检测应明确核酸储存条件储存时间等时应提供相应核酸稳定性研究资料
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床试验
床试验开展方案制定报告撰写等均应符合相关法规体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求
1研究方法
已类产品市试剂床研究选择境已批准市床普遍认质量较类产品作参试剂采拟申报产品（称考核试剂）进行试验研究证明品已市产品等效优已市产品外申请应选择少30例核酸检测阳性新鲜采集样进行考核试剂肠道病毒感染检测金标准方法—病毒分离培养鉴定方法证明肠道病毒感染方法进行较研究医院病毒培养条件该医院委托具相应条件机构进行
法选择参试剂新型肠道病毒核酸检测试剂床研究应选择病毒分离培养鉴定病毒核酸序列测定方法作参方法核酸序列测定引物序列应考核试剂中检测目基引物序列
床试验中涉核酸序列测定方法建议扩增子进行双测序应床研究报告中选测序方法做详细介绍提供关测序试验详细信息资料：
11测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
12测序方法引物相关信息基区段选择分子量纯度功性试验等资料
13选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法拟申报产品相关性进行适分析
14测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
15提交代表性样测序图谱结果分析资料
2床试验病例数
申报产品床试验总病例数应低500例入组样血清型应满足求肠道病毒通型检测试剂阳性样应少包含柯萨奇病毒A组2456101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等单病毒种单病毒血清型检测试剂阳性样应包含该类产品少应检出血清型述血清型中常见血清型应包括该型中基型常见血清型阳性病例数单独统计应满足统计学求单病毒血清型检测试剂床试验中检测血清型应包括该型中基型阳性病例数应满足统计学求
外已批准市肠道病毒核酸（通型）检测试剂果注册证效期出现新型肠道病毒暴发流行需生产企业应迅速针新型肠道病毒开展床研究采病毒检测金标准方法时卫生行政部门认针该新型肠道病毒血清型诊断标准作参方法进行床研究分采集新型肠道病毒感染（阳性病例少30例）常见肠道病毒非肠道病毒感染具相应症状患者新鲜样进行实验研究总例数少200例床试验研究结果证明新型肠道病毒检测力申请应考虑产品预期途发生改变时提出变更申请相关法规求提交分析性评估床试验研究等资料
3床研究单位选择
应选择少3家（含3家）床试验机构相关法规指导原求开展床试验床试验机构选择应量考虑拟申报产品特点预期途综合流行病学背景受试者选择具定域代表性床试验机构应具分子生物学方法检测优势实验操作员应足够时间熟悉检测系统环节熟悉评价方案
4病例选择样类型
床试验应选择具相应肠道病毒感染症状体征密切接触史群作研究象申请建立病例纳入标准时应考虑试剂适年龄段群差异床试验入组病例应产品预期途中适群致
床试验中涉样类型应实际床检测中常样类型申报产品适样类型时包含鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液血液等样类型应针样类型分进行床试验
5伦理学求
床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见
6床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究单位选参试剂机型应致便进行合理统计学分析外考核试剂样类型应超越参试剂样类型检测求果选择参试剂适样类型外样应选择病毒分离培养鉴定合理方法额外样类型进行验证
7统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法检测结果致性分析阴性阳性符合率等类产品实验等效性研究常选择交叉四格表形式总结两种试剂定性检测结果定性结果进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂定性结果致性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设评价考核试剂参试剂否等效标准
数收集程中两种试剂检测结果致样应采金标准方法床普遍认质量较第三种类试剂进行复核时结合患者床病情差异原结果进行分析
8质量控制
床试验开始前应进行床试验预试验熟悉掌握相关试验方法操作仪器技术性等限度控制试验误差整试验程应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
9床试验总结报告撰写
根体外诊断试剂床试验技术指导原求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
91床试验总体设计方案描述
911床试验整体理情况床研究单位选择床研究员简介等基情况介绍
912病例纳入排标准年龄段群预期选择例数标准样编盲揭盲操作流程等
913样类型样收集处理保存等
914统计学方法统计软件评价统计结果标准
92具体床试验情况
921床试验体外诊断试剂仪器名称批号机型等信息
922研究单位病例数年龄分布情况血清型分布情况进行综合建议列表图示方式列出年龄组种血清型样例数
923质量控制试验员培训仪器日常维护仪器校准质控品运行情况
924具体试验程样收集样保存样检测结果处理结果致样确认等
93统计学分析
931数预处理差异数重新检测第三方验证否纳入终数统计异常值缺失值处理研究程中否涉方案修改
932结果致性分析
计算阳性符合率阴性符合率总体符合率采适统计学方法四格表卡方检验kappa检验验证两种试剂定性结果致性
94讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品技术求
申请应原材料质量生产工艺稳定前提根申请产品研制床评价等结果国家标准行业标准关文献医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）关求编写产品技术求
肠道病毒核酸检测试剂产品性指标应包括：物理性状阴阳性参考品符合率精密度低检测限等阳性参考品考察试剂盒适范围血清型肠道病毒检测力阴性参考品重点申报试剂分析特异性进行验证
果申报试剂已适国家标准品参考品发布申请应产品技术求中提出检测求
办法规定类产品第三类体外诊断试剂申请应医疗器械产品技术求编写指导原求附录形式明确原材料生产工艺半成品求附录编制应符合相关编写规范求
（九）产品注册检验报告
根办法求首次申请注册第三类体外诊断试剂产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品注册检验已国家标准品参考品检测项目注册检验时应采相应国家标准品参考品进行注册检验目前尚国家标准品参考品项目生产企业应建立参考品体系提供相应企业参考品
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书体外诊断试剂注册申报重文件产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明文献相关信息
结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面肠道病毒核酸检测试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申报员更合理完成说明书编制
1预期途
11试剂盒定性检测鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液样肠道病毒核酸适样类型应结合实际床研究完成情况进行确认
12明确肠道病毒核酸试剂床意义肠道病毒感染引起手足口病等辅助诊断便床医生结合病检查结果进行更加准确疾病判断科学患者理应肠道病毒感染引起相应床症状进行描述
13简单介绍测目标特征病毒种系渊源生物学性状宿特性致病性感染床表现测靶基特征等
14测群特征介绍：具肠道病毒感染症状患者相关密切接触者域求年龄限制（）等测群应申报产品床试验中入组群致
15应明确申报产品检测病毒血清型床验证血清型
16应强调实验操作员应接受基扩增分子生物学方法检测专业培训具备相关实验操作资格实验室应具备合理生物安全防备设施防护程序
2检验原理
详细说明试剂盒技术原理核酸分离纯化方法原理说明检测靶基座位序列长度等介绍引物探针设计样品反应体系（）组合品（质控品）设置荧光信号标记等添加相关防污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶UDGUNG等）应作机理作适介绍
3组成成分
详细说明试剂盒组分名称数量成分浓度等信息含生物源性物质应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
试剂盒中包含该项检测必须组分应列出相关试剂生产企业产品名称货号医疗器械注册证号备案号（）等详细信息试剂盒中包含核酸分离纯化试剂组分时应注明验证推荐配合商品化核酸分离纯化试剂盒信息
4储存条件效期
试剂盒效期稳定性开瓶稳定性复溶稳定性冻融次数求等应相应稳定性研究结致
5适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
明确适样类型详细描述样采集预处理求运输求保存条件期限等特样采集需设备保存液需特明确供应商货号注册证号备案号（）关描述均应建立相关性评价稳定性研究基础
样取材处理方式等通技术规范指南应遵循处引
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71试剂配制方法注意事项
72核酸分离纯化条件步骤注意事项品（质控品）参样核酸行提取求等
73扩增反应前准备：组分加样体积序相关注意事项等
74逆转录程温度时间设置PCR阶段温度时间设置循环数设置相关注意事项
75仪器设置：特殊参数测基标荧光通道选择等
76质量控制：说明品（质控品）检测求
8阳性判断值
简总结阳性判断值研究方法结
9检验结果解释
结合品（质控品）样中靶基标检测结果出现结果组合相应解释进行详述检验结果解释应阳性判断值研究结适床诊疗筛查指南应项引相应检验结果解释应符合相关指南求
10检验方法局限性
应少包括描述：
101试剂检测结果应结合患者床症状相关医学检查结果进行综合分析单独作患者理
102针肠道病毒通型检测试剂未包含申报产品检测型范围肠道病毒血清型
103合理样采集转运处理实验操作实验环境均导致假阴性假阳性结果
104针肠道病毒通型核酸检测试剂应明确申报产品检病毒血清型中床验证型明确余型未床验证
105申报产品应明确病程阶段样阳性率致
106取标期间接种减毒活疫苗患者会导致检测试剂检测结果呈阳性
11产品性指标
详述性指标：
111相应国家标准品参考品（）检测符合情况
112低检测限：分析性评估资料说明产品低检限简单介绍低检测限确定方法
113企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
114精密度：建议详细描述针肠道病毒基型采源样（工模拟样床样）浓度水进行精密度评价结果采列表形式描述
115分析特异性：建议列表方式说明验证肠道病毒血清型相关病原体等交叉反应性验证浓度水总结潜干扰物质评价浓度水干扰情况
116简描述床试验基信息试验方法结
12注意事项
应少包括容：
121该产品含源动物源性物质应出生物安全性警告
122床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
123强调产品性仅针声称适样类型样求项说明样采集处理方法（包括样采集液等）进行验证样类型样采集处理方法保证产品性
三名词解释
1PCR荧光探针法
PCR程中利荧光标记特异性探针PCR产物进行标记踪释放荧光量变化直接反映出PCR扩增产物量变化通荧光采集分析达原始模板量进行分析PCR
四起草单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
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肠道病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请肠道病毒核酸检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门审评注册申报资料提供参考
指导原针肠道病毒核酸检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原供申请审查员指导性文件涉注册审批等行政事项作法规强制执行够满足法规求方法采应提供详细研究资料验证资料应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
（）肠道病毒简介
肠道病毒属RNA病毒科肠道病毒属引起类致病肠道病毒种包括肠道病毒ABCD组100血清型类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒柯萨奇病毒A组（Coxsackievirus ACA）柯萨奇病毒B组（Coxsackievirus BCB）肠道致细胞病变孤病毒（简称埃病毒）（Echovirus ECHO）新肠道病毒等新肠道病毒1969年陆续分离例新型肠道病毒71型（EV71）等年鼻病毒（Rhinovirus）划入肠道病毒属鼻病毒包括ABC组已先分离140血清型
肠道病毒球形直径28～30nm核衣壳二十面体立体称包膜病毒衣壳60相壳粒组成排列12五聚体壳粒VP1VP2VP3VP4四种蛋白组成
肠道病毒基组单股正链RNA全长约72～84kb基组分三部分两端保守非编码区肠道病毒中源性非常显著中5’端非编码区常作肠道病毒通检测试剂检测靶基中间连续开放读码框包含结构蛋白编码区非结构蛋白编码区结构蛋白编码区次编码VP4VP2VP3VP1４衣壳蛋白衣壳蛋白仅含抗原决定位点决定病毒组织嗜性受体识位点介导病毒细胞吸附进入非结构蛋白编码区负责编码病毒基组复制病毒颗粒包装等关蛋白酶RNA复制细胞器修饰细胞裂解形态形成中发挥功
（二）肠道病毒致病性
肠道病毒肠道中增殖通常引起肠道疾病90肠道病毒感染隐性感染仅出现轻微呼吸道感染流感样症状肠道病毒引起相床症状种病毒引起种床疾病
肠道病毒传染源患者症状病毒携带者传播途径粪口途径通呼吸道传播夏秋季年中流行期肠道病毒呼吸道咽喉肠道侵入门户先局部黏膜咽扁桃体等淋巴组织肠道集合淋巴结中初步增殖然释放入血形成第次病毒血症扩散带受体靶组织次增殖引起第二次病毒血症床症状脊髓灰质炎病毒识受体免疫球蛋白超家族细胞黏附分子少组织表达种受体脊髓前角质细胞根神节细胞运动神元骨骼肌细胞淋巴细胞等柯萨奇病毒埃病毒识受体组织细胞中分布广泛包括中枢神系统心肺胰黏膜皮肤系统等引起疾病谱复杂数肠道病毒杀细胞病毒直接靶细胞产生裂解性感染年龄段群均感染肠道病毒
肠道病毒致疾病：
1手足口病：肠道病毒感染引起发热咽喉痛全身适手足口腔等部位皮疹疱疹特征常见传染病数手足口病患者症状轻微具限性相部分患者致死性心肺功疾病神系统发症重症患者病情进展迅速甚导致死亡国手足口病疫情尤严峻已成严重影响国居民生命健康公卫生问题
手足口病致病病原体传染源患者隐性感染者传播途径粪口传播接触患者疱疹液传播接触病携带者粪便唾液疱疹液污染日常生活品均传播病原体年报道显示该病原体垂直传播导致新生重症感染肠道病毒普遍易感年龄组均感染发病5岁童尤3岁童发病率高该病流行明显区性全年均发生般5—7月发病高峰该病潜伏期般2—10天均潜伏期3—5天感染者发病前数天咽拭子样粪便样中检出病毒病程7天左右咽部排毒持续发病1—2周粪便排毒持续发病3—5周
引起手足口病肠道病毒包括柯萨奇病毒A组2456791016型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等中EV71CA16型较常见
2菌性脑膜炎：肠道病毒感染引起种疾病常表现短暂发热头痛等偶尔肌肉酸痛伴皮疹重者出现颈项强直嗜睡昏迷意识障碍脑膜刺激征等症状目前发现肠道病毒中60血清型引起菌性脑膜炎包括脊髓灰质炎病毒型柯萨奇病毒A组中数型柯萨奇病毒B组1—6型埃病毒数型肠道病毒71型等
3脊髓灰质炎：脊髓灰质炎病毒感染引起疾病中85Ⅰ型脊髓灰质炎病毒引起国ⅡⅢ型病毒感染发病病例病毒侵犯脊髓前角运动神细胞导致弛缓性肢体麻痹见童称麻痹症
4疱疹性咽峡炎：柯萨奇病毒A组某血清型引起典型症状软腭悬雍垂周围出现水泡性溃疡损伤
5流行性胸痛：常柯萨奇病毒B组引起症状突发性发热单侧胸痛
6心肌炎心包炎：柯萨奇病毒B组引起婴室引起暴发性流行死亡率高散发流行成童
7眼病：柯萨奇病毒A组24v型引起急性结膜炎EVD70型引起急性出血性结膜炎
外肠道病毒感染病毒感染疲劳综合征糖尿病相关
（三）指导原适范围
1指导原适利荧光探针聚合酶链式反应（Realtime PCR）类分子生物学方法特定肠道病毒基序列检测目标源体样中肠道病毒核酸进行体外定性检测床辅助诊断手足口病等肠道病毒感染相关性疾病涉床途肠道病毒核酸检测试剂参考指导原手足口病致病病原体中未包含鼻病毒鼻病毒指南讨范围
2床检测手足口病致病病原体检测试剂适样类型应鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液（仅限出现神系统症状病例）血液等
3指导原适肠道病毒通核酸检测试剂单病毒种检测试剂单病毒血清型检测试剂通检测试剂检病毒型应少包括柯萨奇病毒A组245679101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等针柯萨奇病毒核酸检测试剂检病毒型应少包括述A组B组中血清型针柯萨奇A组B组核酸检测试剂检病毒型应少包括述该组列血清型针埃病毒核酸检测试剂检病毒型应少涵盖埃病毒36111416192530等血清型
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明关产品研究结果总结评价等容中预期途相关床适应症应重点描述申报产品检测肠道病毒型床适应症相关性相关肠道病毒国流行特征产品描述应明确申报产品检出肠道病毒型尚未验证肠道病毒型类产品国外批准市情况应着重检病毒型型检测低检测限型间交叉反应等方面写明拟申报产品目前市场已获批准类产品间区综述资料撰写应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）相关求
（二）原材料研究资料
类产品原材料包括引物探针DNA聚合酶dNTP逆转录酶尿嘧啶DNA糖基化酶（适）核酸分离纯化组分（）试剂盒质控品企业参考品等应提供原材料选择源制备质量标准等研究资料质控品确认试验资料生产企业应提供企业参考品原材料选择源质量指标参考品制备阴阳性确认程等
1引物探针：包括申报产品检测靶序列引物探针引物探针应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况针检测靶序列引物探针建议设计两套套引物探针供筛选针预期适肠道病毒型进行检出准确性特异性（交叉反应）评价采扩增靶序列型肠道病毒基组研究方法终确认佳组合提交筛选研究数引物探针质量标准应少包括序列准确性纯度检查浓度检查功性实验等
2酶：需酶包括逆转录酶DNA聚合酶质量标准：
21逆转录酶应包括核酸逆转录活性核酸切酶活性等
22 DNA聚合酶应包括DNA聚合酶活性核酸切酶活性热启动力热稳定性等
23申报产品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶应酶活性热稳定性等质量控制标准进行规定
3dNTP：质量标准应少包括纯度检查功性实验等
4核酸分离纯化组分（）原理介绍组成原材料质量控制标准相关验证资料
5试剂盒质控品
试剂盒质控体系通设置种试剂盒质控品实现针阳性质控品阴性质控品申请应明确质控品源质量标准质控品阴阳性确认方法相关验证资料申报产品质控体系应考虑方面：
51阳性质控品中应含天然工合成包含试剂盒检测靶序列RNA少应包含床较常见血清型质控品应参样处理检测全程核酸行提取等步骤企业应质控品检测结果（Ct值）做出明确范围求
52阴性质控品应含试剂盒检测靶序列RNA质控品应参样处理检测全程核酸行提取等步骤存交叉污染产生假阳性结果进行质量控制
53（标）抑制导致假阴性结果进行质量控制申请应（标）引物探针设计模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线量降低靶基检测造成抑制检测结果（Ct值）应做出明确范围求
6企业参考品：应详细说明关企业参考品原料选择制备阴阳性确认等试验
企业参考品核酸性质应产品预期检测靶物质致鉴肠道病毒RNA病毒企业参考品采灭活病毒含肠道病毒基组装甲病毒（假病毒）工克隆合成肠道病毒基组RNA具体求：
61阳性参考品阴性参考品
阳性参考品应包含指南范围中规定申报产品少应检出肠道病毒血清型例肠道病毒通型检测试剂阳性参考品应少包含柯萨奇病毒A组245679101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等单病毒种单病毒血清型检测试剂阳性参考品应包含该类产品少应检出血清型阴性参考品应考虑检测特异性评价应纳入试剂盒检测范围肠道病毒血清型样品（）病原体样品
62检测限参考品
申请应明确检测限参考品中病毒核酸浓度确定方法明确检测限参考品中病毒核酸浓度确定检测限参考品中肠道病毒核酸浓度应申报产品检测限浓度略高检测限浓度检测限参考品应包含申报产品少应检出肠道病毒血清型
63精密度参考品
包含涉肠道病毒血清型应选择床较常见型针选型应分少设置弱阳性水
原材料企业生产生产工艺必须相稳定提交生产工艺验证报告原材料购供应商需针供应商选择提供评价数提供供应商出具质量标准出厂检定报告申请该原材料进行质量检验资料
（三）生产工艺反应体系研究资料
1介绍产品生产工艺图表方式表示说明生产工艺确定
2反应原理介绍
3详述样采集样处理方式选择设置提供相关研究资料
4确定佳反应体系研究资料包括样量种酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度反应阶段温度时间循环数等
5适机型反应条件果差异应分详述提交验证资料
6申报产品包含核酸分离纯化试剂应提交核酸分离纯化程进行工艺优化研究资料
（四）分析性评估资料
申请应提交产品研制阶段试剂盒进行性评价研究资料项分析性评价应包括具体研究目试验方法接受标准试验数统计方法等详细资料关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括实验点适仪器试剂规格批号床样源等
针样类型申请应分完成性评估包括阴阳性符合率低检测限精密度分析特异性等
分析性评价试验方法参考国际国关体外诊断试剂性评估指导原进行类产品性评估中样品（非特说明）参考述企业参考品制备求项性评价应符合求
1核酸分离纯化性
进行靶核酸检测前应适核酸分离纯化步骤该步骤目量分离出目核酸外应相应纯化作PCR抑制物检测试剂否含核酸分离纯化组分企业应结合检测试剂特性配合核酸分离纯化试剂提取效率提取核酸纯度等做充分验证提供详细验证资料
2申请应明确申报产品检出肠道病毒血清型检出血清型建议申请采申报产品目前已知肠道病毒血清型样进行检测验证申报产品检血清型范围验证样床收集样病毒基组工构建假病毒
3阳性阴性参考品符合率
阳性参考品检测旨验证试剂盒检测范围肠道病毒血清型均适浓度检测阳性参考品检测结果应阳性阴性参考品旨评价试剂特异性阴性参考品检测结果应阴性
4低检测限
申报产品低检测限性评估资料应包含低检测限确定验证程
41应针申报产品检出CA16CA6EV71等常见肠道病毒血清型分进行确定建议采培养病毒原液进行梯度稀释配制系列稀释样品进行低检测限评价系列稀释度应够覆盖部分检出概率区间（0～100）通概率计算适方法进行测算选取适检出率水浓度作低检测限确定标准95（n≥20）阳性检出率水病毒原液浓度测定建议采空斑试验浓度水采空斑形成单位（PFU）计量单位
42应选择申报产品低检测限接低检测限病毒水申报产品低检测限进行验证验证低检测限样应少包含申报产品检出CA16CA6EV71等常见肠道病毒血清型应少选择病毒株进行验证企业应够提供低检测限验证病毒株源型浓度水（PFU）确认试验等信息
43申请应明确申报产品低检出肠道病毒基拷贝数水时提供确定程相关实验数项研究应针血清型分确认样血清型应包括申报产品低检测限参考品设置血清型
44申报产品检测企业低检测限参考品检测结果应满足相应求
5分析特异性
51交叉反应
申请应针出现检测样中病原体进行交叉反应验证交叉反应验证样品肠道病毒外病原体应量采灭活病原体培养物床样建议病毒细菌感染医学相关水进行交叉反应验证申请应详细说明交叉反应样源病原体鉴定滴度确定方法结果病原体种类考虑方面：试剂盒检测范围外肠道病毒血清型样中出现病原体建议病原体进行交叉反应验证：诺病毒单纯疱疹病毒12型肠道腺病毒水痘带状疱疹病毒轮状病毒甲型肝炎病毒星状病毒EB病毒风疹病毒麻疹病毒甲型流感病毒副流感病毒乙型流感病毒巨细胞病毒呼吸道合胞病毒流行性腮腺炎病毒戊肝病毒B族链球菌肺炎克雷伯菌肠杆菌脑膜炎奈瑟菌肺炎链球菌金黄色葡萄球菌沙门氏菌志贺菌弧菌流感嗜血杆菌卡莫拉菌草绿色链球菌奈瑟菌属黏液罗氏菌变形杆菌等
52干扰试验
应根采集样类型针存干扰情况进行验证建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价针代表性肠道病毒血清型少病毒界阳性水进行干扰试验验证干扰物质选取应少包括：血红蛋白黄疸（仅限血液样）脂血（仅限血液样）白细胞粘蛋白常见病毒治疗药物抗生素微生态制剂粪便中未消化食物纤维等
6精密度
企业应申报产品精密度指标标准差变异系数等评价标准做出合理求模拟样体现床样带变异素精密度评价中样应少包含精密度参考品干床样精密度评价试验应包含核酸分离纯化步骤针类产品精密度评价包括求：
61影响检测精密度变量进行验证检测试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应分析仪操作者试验点检测批次等素进行相关验证
62设定合理精密度评价周期例：期少20天检测天少2完成少2次完整检测批批间日日间操作者间精密度进行综合评价
63精密度评价床样均应少包含3水：阴性样品界阳性样品（中强）阳性样品根产品特性设定适精密度求床样精密度评价中次检测均应核酸提取开始
（五）阳性判断值确定资料
类试剂阳性判断值够获理想床灵敏度床特异性界值（Cutoff）荧光探针PCR方法Ct值确定资料建议采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行相关研究申请选取适床样进行试验确定阳性判断值
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉两部分容申报试剂稳定性适样稳定性研究前者包括实时稳定性（效期）开瓶稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
考虑病毒RNA极易降解特性企业应样稳定性进行研究包括冷藏冷冻两种条件效期验证合理温度范围间隔定时间段储存样进行全性分析验证确认类型样效期稳定性适冷冻保存样应冻融次数进行评价
样提取立进行检测应明确核酸储存条件储存时间等时应提供相应核酸稳定性研究资料
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床试验
床试验开展方案制定报告撰写等均应符合相关法规体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求
1研究方法
已类产品市试剂床研究选择境已批准市床普遍认质量较类产品作参试剂采拟申报产品（称考核试剂）进行试验研究证明品已市产品等效优已市产品外申请应选择少30例核酸检测阳性新鲜采集样进行考核试剂肠道病毒感染检测金标准方法—病毒分离培养鉴定方法证明肠道病毒感染方法进行较研究医院病毒培养条件该医院委托具相应条件机构进行
法选择参试剂新型肠道病毒核酸检测试剂床研究应选择病毒分离培养鉴定病毒核酸序列测定方法作参方法核酸序列测定引物序列应考核试剂中检测目基引物序列
床试验中涉核酸序列测定方法建议扩增子进行双测序应床研究报告中选测序方法做详细介绍提供关测序试验详细信息资料：
11测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
12测序方法引物相关信息基区段选择分子量纯度功性试验等资料
13选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法拟申报产品相关性进行适分析
14测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
15提交代表性样测序图谱结果分析资料
2床试验病例数
申报产品床试验总病例数应低500例入组样血清型应满足求肠道病毒通型检测试剂阳性样应少包含柯萨奇病毒A组2456101216型等B组12345型等肠道病毒71型埃病毒等单病毒种单病毒血清型检测试剂阳性样应包含该类产品少应检出血清型述血清型中常见血清型应包括该型中基型常见血清型阳性病例数单独统计应满足统计学求单病毒血清型检测试剂床试验中检测血清型应包括该型中基型阳性病例数应满足统计学求
外已批准市肠道病毒核酸（通型）检测试剂果注册证效期出现新型肠道病毒暴发流行需生产企业应迅速针新型肠道病毒开展床研究采病毒检测金标准方法时卫生行政部门认针该新型肠道病毒血清型诊断标准作参方法进行床研究分采集新型肠道病毒感染（阳性病例少30例）常见肠道病毒非肠道病毒感染具相应症状患者新鲜样进行实验研究总例数少200例床试验研究结果证明新型肠道病毒检测力申请应考虑产品预期途发生改变时提出变更申请相关法规求提交分析性评估床试验研究等资料
3床研究单位选择
应选择少3家（含3家）床试验机构相关法规指导原求开展床试验床试验机构选择应量考虑拟申报产品特点预期途综合流行病学背景受试者选择具定域代表性床试验机构应具分子生物学方法检测优势实验操作员应足够时间熟悉检测系统环节熟悉评价方案
4病例选择样类型
床试验应选择具相应肠道病毒感染症状体征密切接触史群作研究象申请建立病例纳入标准时应考虑试剂适年龄段群差异床试验入组病例应产品预期途中适群致
床试验中涉样类型应实际床检测中常样类型申报产品适样类型时包含鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液血液等样类型应针样类型分进行床试验
5伦理学求
床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见
6床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究单位选参试剂机型应致便进行合理统计学分析外考核试剂样类型应超越参试剂样类型检测求果选择参试剂适样类型外样应选择病毒分离培养鉴定合理方法额外样类型进行验证
7统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法检测结果致性分析阴性阳性符合率等类产品实验等效性研究常选择交叉四格表形式总结两种试剂定性检测结果定性结果进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂定性结果致性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设评价考核试剂参试剂否等效标准
数收集程中两种试剂检测结果致样应采金标准方法床普遍认质量较第三种类试剂进行复核时结合患者床病情差异原结果进行分析
8质量控制
床试验开始前应进行床试验预试验熟悉掌握相关试验方法操作仪器技术性等限度控制试验误差整试验程应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
9床试验总结报告撰写
根体外诊断试剂床试验技术指导原求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
91床试验总体设计方案描述
911床试验整体理情况床研究单位选择床研究员简介等基情况介绍
912病例纳入排标准年龄段群预期选择例数标准样编盲揭盲操作流程等
913样类型样收集处理保存等
914统计学方法统计软件评价统计结果标准
92具体床试验情况
921床试验体外诊断试剂仪器名称批号机型等信息
922研究单位病例数年龄分布情况血清型分布情况进行综合建议列表图示方式列出年龄组种血清型样例数
923质量控制试验员培训仪器日常维护仪器校准质控品运行情况
924具体试验程样收集样保存样检测结果处理结果致样确认等
93统计学分析
931数预处理差异数重新检测第三方验证否纳入终数统计异常值缺失值处理研究程中否涉方案修改
932结果致性分析
计算阳性符合率阴性符合率总体符合率采适统计学方法四格表卡方检验kappa检验验证两种试剂定性结果致性
94讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品技术求
申请应原材料质量生产工艺稳定前提根申请产品研制床评价等结果国家标准行业标准关文献医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）关求编写产品技术求
肠道病毒核酸检测试剂产品性指标应包括：物理性状阴阳性参考品符合率精密度低检测限等阳性参考品考察试剂盒适范围血清型肠道病毒检测力阴性参考品重点申报试剂分析特异性进行验证
果申报试剂已适国家标准品参考品发布申请应产品技术求中提出检测求
办法规定类产品第三类体外诊断试剂申请应医疗器械产品技术求编写指导原求附录形式明确原材料生产工艺半成品求附录编制应符合相关编写规范求
（九）产品注册检验报告
根办法求首次申请注册第三类体外诊断试剂产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品注册检验已国家标准品参考品检测项目注册检验时应采相应国家标准品参考品进行注册检验目前尚国家标准品参考品项目生产企业应建立参考品体系提供相应企业参考品
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书体外诊断试剂注册申报重文件产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明文献相关信息
结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面肠道病毒核酸检测试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申报员更合理完成说明书编制
1预期途
11试剂盒定性检测鼻咽拭子咽拭子粪便肛拭子疱疹液脑脊液样肠道病毒核酸适样类型应结合实际床研究完成情况进行确认
12明确肠道病毒核酸试剂床意义肠道病毒感染引起手足口病等辅助诊断便床医生结合病检查结果进行更加准确疾病判断科学患者理应肠道病毒感染引起相应床症状进行描述
13简单介绍测目标特征病毒种系渊源生物学性状宿特性致病性感染床表现测靶基特征等
14测群特征介绍：具肠道病毒感染症状患者相关密切接触者域求年龄限制（）等测群应申报产品床试验中入组群致
15应明确申报产品检测病毒血清型床验证血清型
16应强调实验操作员应接受基扩增分子生物学方法检测专业培训具备相关实验操作资格实验室应具备合理生物安全防备设施防护程序
2检验原理
详细说明试剂盒技术原理核酸分离纯化方法原理说明检测靶基座位序列长度等介绍引物探针设计样品反应体系（）组合品（质控品）设置荧光信号标记等添加相关防污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶UDGUNG等）应作机理作适介绍
3组成成分
详细说明试剂盒组分名称数量成分浓度等信息含生物源性物质应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
试剂盒中包含该项检测必须组分应列出相关试剂生产企业产品名称货号医疗器械注册证号备案号（）等详细信息试剂盒中包含核酸分离纯化试剂组分时应注明验证推荐配合商品化核酸分离纯化试剂盒信息
4储存条件效期
试剂盒效期稳定性开瓶稳定性复溶稳定性冻融次数求等应相应稳定性研究结致
5适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
明确适样类型详细描述样采集预处理求运输求保存条件期限等特样采集需设备保存液需特明确供应商货号注册证号备案号（）关描述均应建立相关性评价稳定性研究基础
样取材处理方式等通技术规范指南应遵循处引
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71试剂配制方法注意事项
72核酸分离纯化条件步骤注意事项品（质控品）参样核酸行提取求等
73扩增反应前准备：组分加样体积序相关注意事项等
74逆转录程温度时间设置PCR阶段温度时间设置循环数设置相关注意事项
75仪器设置：特殊参数测基标荧光通道选择等
76质量控制：说明品（质控品）检测求
8阳性判断值
简总结阳性判断值研究方法结
9检验结果解释
结合品（质控品）样中靶基标检测结果出现结果组合相应解释进行详述检验结果解释应阳性判断值研究结适床诊疗筛查指南应项引相应检验结果解释应符合相关指南求
10检验方法局限性
应少包括描述：
101试剂检测结果应结合患者床症状相关医学检查结果进行综合分析单独作患者理
102针肠道病毒通型检测试剂未包含申报产品检测型范围肠道病毒血清型
103合理样采集转运处理实验操作实验环境均导致假阴性假阳性结果
104针肠道病毒通型核酸检测试剂应明确申报产品检病毒血清型中床验证型明确余型未床验证
105申报产品应明确病程阶段样阳性率致
106取标期间接种减毒活疫苗患者会导致检测试剂检测结果呈阳性
11产品性指标
详述性指标：
111相应国家标准品参考品（）检测符合情况
112低检测限：分析性评估资料说明产品低检限简单介绍低检测限确定方法
113企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
114精密度：建议详细描述针肠道病毒基型采源样（工模拟样床样）浓度水进行精密度评价结果采列表形式描述
115分析特异性：建议列表方式说明验证肠道病毒血清型相关病原体等交叉反应性验证浓度水总结潜干扰物质评价浓度水干扰情况
116简描述床试验基信息试验方法结
12注意事项
应少包括容：
121该产品含源动物源性物质应出生物安全性警告
122床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
123强调产品性仅针声称适样类型样求项说明样采集处理方法（包括样采集液等）进行验证样类型样采集处理方法保证产品性
三名词解释
1PCR荧光探针法
PCR程中利荧光标记特异性探针PCR产物进行标记踪释放荧光量变化直接反映出PCR扩增产物量变化通荧光采集分析达原始模板量进行分析PCR
四起草单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
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