附件3
型半胱氨酸测定试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请型半胱氨酸测定试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原型半胱氨酸测定试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原供申请审查员指导文件涉注册审批等行政事项作法规强制执行够满足法规求方法采应提供详细研究资料验证资料应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准体系断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
型半胱氨酸测定试剂体外定量测定血清血浆中型半胱氨酸浓度方法学考虑指导原指基分光光度法原理利全动半动生化分析仪分光光度计医学实验室采酶循环法进行型半胱氨酸定量检验床化学体外诊断试剂根测定方法分速率法终点法两种
指导原适干式型半胱氨酸测定试剂体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）食品药品监总局关印发体外诊断试剂分类子目录通知（食药监械〔2013〕242号）型半胱氨酸测定试剂理类二类分类代码6840
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性方面说明研究结果总结评价类产品市情况介绍等容应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）相关求面着重介绍型半胱氨酸测定试剂预期途关床背景情况
体型半胱氨酸（HCY）源蛋氨酸蛋氨酸源食物蛋氨酸分子含甲基ATP作生成S腺苷蛋氨酸通种转甲基作体已知50种具重生理活性物质提供甲基血浆中型半胱氨酸分结合型游离型两种四种分子形式存通常测定血浆中总型半胱氨酸国外1995年Bouskey等汇集分析27研究单位总数4666例床研究结果发现10冠心病患者高型半胱氨酸血症致血浆HCY增加5mmolL相血清胆固醇增加05molL（20mgdL）血造成危害项587例血造影确诊冠心病患者进行46年访研究64例死亡四年时间里型半胱氨酸水<9mmolL者死亡率38相型半胱氨酸水≥15mmolL者死亡率247分析中影响素（年龄性吸烟史高胆固醇血症等）型半胱氨酸水9—149mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者19倍（p<005）型半胱氨酸水15—199mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者28倍（p<005）型半胱氨酸水>20mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者45倍（p<002）述研究表明高型半胱氨酸血症冠心病力危险预测子
（二）原材料研究资料（需提供）
原材料（例酶原料）选择制备质量标准试验验证研究资料质控品校准品原料选择制备定值程试验资料校准品溯源性文件包括具体溯源链试验方法数统计分析等详细资料
（三）生产工艺反应体系研究资料（需提供）
1生产工艺介绍流程图方式表示简说明生产工艺确定企业应采验证够保证产品质量生产工艺
2反应体系研究资料包括：样采集处理样求确定反应校准品样试剂量缓液时间波长等条件确认资料试验数校准方法质控方法等
（四）分析性评估资料
申请应提交试剂进行性验证研究资料项分析性评价应包括具体研究项目试验设计研究方法接受标准试验数统计方法（）研究结等详细资料性评估时应试剂选校准品质控品作整体进行评价评估整系统性否符合求关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括试验点适仪器试剂规格批号选校准品质控品床样源等
试剂建议着重分析性进行研究：
1准确度
测量准确度评价次包括：国家标准品（国际标准品）相偏差回收试验方法学等方法申请根实际情况选择方法项项进行研究
（1）国家（国际）标准品相偏差
果研究项目相应国家（国际）标准品国家（国际）标准品进行验证重点观察相应标准品检测结果偏差情况
（2）回收试验
评估定量检测方法准确测定加入纯品（标准溶液）力结果回收率表示通常样进行3—5次回收试验取均值均回收率
回收试验注意事项：
①加入纯品（标准溶液）体积源样体积应会产生基质变化
②量加入标准液样中测物浓度接医学决定水（10~20μmolL）
③纯品（标准溶液）浓度应该足够高浓度回收样
（3）方法学
采参考方法国国际普遍认质量较已市类试剂作方法拟申报试剂时检测批床样品（少40例样）测定结果间差异解拟申报试剂参方法间偏倚偏倚允许误差范围说明两检测系统病标测定结果基相符份床样医学解释拟申报试剂方法相会产生差异结果
实施方法学前应分拟申报试剂试剂进行初步评估确认两者分符合相关质量标准方进行方法学方法学时应注意质量控制样类型浓度分布范围结果进行合理统计学分析
2空白吸光度
试剂说明书规定参数测试指定空白样记录测试反应完成吸光度值（A）测试结果试剂空白吸光度测定值
注：空白样纯水生理盐水零校准液等
3空白吸光度变化率（适）
试剂测试指定空白样记录试剂规定参数吸光度差值空白吸光度变化率（ΔAmin）应企业规定值
4分析灵敏度
试剂测试型半胱氨酸已知浓度（5—15）μmolL样记录试剂规定参数吸光度差值
（1）终点法测试试剂100μmolL样吸光度变化（ΔA）应002
（2）速率法测试试剂100μmolL样吸光度变化率（ΔAmin）应001
5重复性
测量批精密度评估应包括两浓度水样进行两浓度应试剂盒测量范围通常选该检测指标参考区间附异常样建议采源样源样基质接样进行试验选择重复测试浓度（100±20）μmolL样结果变异系数（CV）应5（200±40）μmolL样结果变异系数（CV）应3
6批间差
3批号试剂分测试（100±20）μmolL样批号测试3次分计算批3次测定均值计算相极差
7线性
建立试剂线性范围样基质应床实际检测样相似理想样分析物浓度达预期测定限混合血清（源样）制备低浓度样时应充分考虑稀释样基质影响建议稀释液量采阴性血清建立线性范围时需预期测定范围选择7—11浓度水例预期测定范围加宽130范围选择更浓度水然试验结果逐渐减少数点（终少7水）直表现出线性关系发现宽线性范围验证线性范围时选择5—7浓度水
超出线性范围样需稀释测定应做相关研究明确稀释液类型稀释倍数研究程应注意基质效应影响必时应提供基质效应研究关资料
8干扰试验
考察样中常见干扰物质检测结果影响胆红素血红蛋白甘油三酯时根检验原理选择特异性干扰物质（血氨S腺苷蛋氨酸抗坏血酸谷胱甘肽等）进行检测干扰物浓度分布应覆盖体生理病理状态出现物质浓度方法模拟添加干扰物样分进行验证样量选择应体现定统计学意义说明样制备方法干扰试验评价标准确定接受干扰物质极限浓度评价型半胱氨酸样浓度应少包含医学决定水（正常参考区间限）
药物干扰研究根需申请选择否进行选择种药物浓度进行
9校准品质控品赋值（适）
（1）应参GBT 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性求提供企业（工作）校准品试剂盒配套校准品赋值确定度计算记录提供质控品定值靶值范围确定记录
（2）均性
取批号定数量包装单元校准品质控品包装单元测试1次面公式计算测试结果均值（）标准差S1述校准品包装单元连续测试相次数计算测试结果均值（）标准差S2列公式计算瓶间重复性CV参数瓶间重复性结果均应符合求
公式 1
公式 2
公式 3
公式 4
S1式中：
均值
S标准差
n测量次数
xi指定参数第i次测量值
10需注意问题
适机型产品应提供产品说明书适机型项中列型号仪器性评估资料
包装规格需包装规格间差异进行分析验证包装规格产品间存性差异需提交采包装规格产品分析性评估包装规格间存性差异需提交包装规格间存性差异详细说明具体说明包装规格间差产生影响
试剂盒样类型包括血清血浆样应二者进行相关性研究确认二者检测结果否完全致存某种相关性（系数关系）血浆样申请应抗凝剂进行研究确认适抗凝条件否会干扰检测结果
（五）参考区间确定资料
应提交验证参考区间采样源详细试验资料统计方法等
应明确参考群纳入排标准研究表明型半胱氨酸性年龄具定相关性建议厂家根床需必时性年龄（选择特定年龄段）进行考察研究例数均应符合统计学求
引针中国群参考区间研究相关文献应明确说明出处进行验证研究结果应说明书参考区间项中进行相应说明
（六）稳定性研究资料
稳定性研究包括效期稳定性热稳定性运输稳定性开瓶（复溶）稳定性等申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体方法程效期稳定性研究应提供少3批样品实际储存条件保存成品效期研究资料产品包含校准品质控品应提供相应稳定性试验研究资料
应样储存条件稳定性期限进行研究说明书中样求处明示（注：相关文献中已明确说明作）
（七）床评价资料
床试验资料应符合关发布体外诊断试剂床试验技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求时研究资料形式应符合关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）床研究资料关规定面仅床试验中基问题进行阐述
1研究方法
选择境已批准市性低拟申报产品类产品作试剂采试验体外诊断试剂（称考核试剂）进行较研究试验证明品已市产品等效
2床研究单位选择
应少两家国家食品药品监督理总局备案床试验机构开展床试验床研究单位试验操作员应足够时间熟悉检测系统环节（试剂质控操作程序等）熟悉评价方案整试验中考核试剂试剂应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
3伦理求
床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样血清血浆等获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见受试者知情意书例外情况客观获受试者知情意该床试验受试者没风险伦理委员会审查批准免受试者知情意
4床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床试验研究方案床研究机构方案设置应保持致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉试验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究单位选试剂应保持致机型应进行适性验证便进行合理统计学分析外考核试剂样类型应产品说明书致应超越试剂样类型检测求果选择试剂适样类型外样应额外样类型进行验证
5研究象选择
床试验应选择具特定症状体征群作研究象申请建立病例纳入标准时应考虑群差异量覆盖类适群参考区间分组产品进行结果统计分析时应类群分进行数统计分析
研究总体样数少200例覆盖线性范围应充分考虑病理值样验证异常值样数建议少80例参考区间年龄性分段建议组段样数量应符合统计学求
样应明确抗凝剂求存贮条件否冻融等避免样试验中新鲜样避免贮存法避免贮存样品时注明贮存条件时间数分析时应考虑影响
果声称时适血清血浆样血清（血浆）试验例数参述求采考核试剂时验证中少100例受试者身血清血浆样测试结果间致性采取试剂进行试验验证血浆（血清）样测试结果间致性中浓度样分布情况总例数中分布情况应致
产品发生涉检测条件优化增加原样类型具性样类型等变更事项床样总数少100例少两家床试验机构开展床试验变更原材料供应商参考区间变化增加床适应证等变更事项应根产品具体变更情况酌情增加床试验总样数
6统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法结合床试验数正偏态分布等情况建议统计学负责选择合理统计学方法进行分析统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异相关分析线性回绝偏倚偏差相偏倚偏差分析配t检验等考核试剂试剂两组检测结果相关线性回分析应重点观察相关系数（r值）判定系数（R2）回拟合方程（斜率y轴截距）等指标床研究方案中应明确统计检验水准检验假设评价考核试剂试剂否等效标准
试剂盒时适血清血浆样采相关分析线性回配t检验等统计学方法评价血浆血清样测试结果间致性
7床试验总结报告撰写
根关发布体外诊断试剂床试验技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
（1）床试验总体设计方案描述
①床试验整体理情况床研究单位选择床研究员简介等基情况介绍
②病例纳入排标准群预期选择例数标准
③样类型样收集处理保存等
④统计学方法统计软件评价统计结果标准
（2）具体床试验情况
①考核试剂试剂名称批号效期机型等信息
②研究单位病例数群分布情况进行总合建议列表图示方式出具体例数百分
③质量控制试验员培训仪器日常维护仪器校准质控品运行情况检测精密度质控品回收（测量值）抽查结果评估
④具体试验程样检测数收集样长期保存等
（3）统计学分析
①数预处理异常值离群值处理研究程中否涉方案修改
②定量值相关性致性分析
回分析验证两种试剂结果相关性ya+bxrR2形式出回分析拟合方程中：y考核试剂结果x试剂结果b方程斜率ay轴截距r相关系数（求r＞0975）r＜0975应适扩样量扩数范围R2判定系数（通常求R2≥095）计算回系数截距95信区间
分计算医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚偏差95置信区间医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚应允许误差（建议参12CLIA’8812室间质评接受范围12源生物变异总允许误差卫生行业标准等相关求设定允许误差）
应出考核试剂试剂间差值（绝偏倚偏差）值（相偏倚偏差）散点图观察分析点偏倚分布情况
通相关性分析配t检验等统计分析方法综合评价考核试剂试剂等效性
（4）讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品风险分析资料
申请应考虑产品寿命周期环节预期途错误安全性关特征已知预见危害等方面判定患者风险估计进行风险分析应符合YYT 0316—2016医疗器械风险理医疗器械应求
（九）产品技术求
产品技术求应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关发布医疗器械产品技术求编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定
表1 产品适相关标准
GBT 191—2008
包装储运图示标志
GBT 21415—2008
体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性
YYT 0316—2016
医疗器械 风险理医疗器械应
YYT 04661—2009
医疗器械 医疗器械标签标记提供信息符号 第1部分：通求
YYT 1258—2015
型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）
作定量检测试剂应包括性指标：外观装量试剂空白分析灵敏度线性精密度准确性稳定性等性指标应低YYT 1258—2015型半胱氨酸检测试剂（盒）（酶循环法）求相应国家行业标准发布更新产品技术求低相关求外根实际情况增加列检验项目：
（1）试剂空白吸光度变化率（适）
试剂测试空白样记录试剂参数规定读数点吸光度差值（ΔA）计算空白样吸光度变化率（ΔAmin）应企业规定值
（2）准确度（方法学）
测试剂盒申请选定分析系统（参考方法国国际普遍认质量较已市类试剂）分检测少40检测范围源样品回分析验证两种试剂结果相关性计算相关系数r应等0975医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚应企业规定值
（3）复溶稳定性（干粉冻干试剂适）：干粉试剂开瓶（复溶）规定贮存条件保存效期末产品性应少符合线性范围准确度重复性
（4）校准品质控品（适）
①溯源赋值说明：型半胱氨酸尚国家标准物质已国际标准物质试剂盒配套校准品质控品应参GBT 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性求溯源国家国际标准物质提供校准品溯源性说明质控品赋值说明国家标准物质发布应国家标准物质进行验证
②性求：外观装量均性（瓶间差）冻干品包括：含水量复溶稳定性液体剂型应包含开瓶稳定性校准品定值质控品单独注册单元应考察赋值准确性
（5）附录
注册单元中包含校准品质控品应附录中明确校准品质控品赋值程序
（十）产品注册检验报告
根体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）求首次申请注册第二类产品应该国家食品药品监督理部门认具相应承检范围医疗器械检测机构进行样品注册检验已国家标准品检测项目注册检验时应采相应国家标准品进行目前尚国家标准品项目申请应建立质控体系提供相应校准品质控品注册申报资料中应包括相应注册检验报告产品技术求预评价意见
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途试验原理试验方法检测结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书体外诊断试剂注册申报重文件产品说明书格式应符合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）医疗器械说明书标签理规定（国家食品药品监督理总局令第6号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明参考文献相关信息
结合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求面型半胱氨酸测定试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申报员更合理完成说明书编制
产品说明书容原应全部中文进行表述含国际通行业普遍认英文缩写括号中文标明确实适中文表述词语相应英文缩写
1预期途应包括部分容：
（1）说明试剂体外定量测定血清血浆中型半胱氨酸浓度
（2）预期途相关床适应证背景情况说明相关床实验室诊断方法等
2．检验原理
指导原适酶循环法血清血浆中型半胱氨酸进行定量测定试剂面介绍该产品2种反应原理：
（1）氧化型HCY原成游离HCY游离HCYHCY甲基转移酶催化S腺苷甲硫氨酸（SAM）反应生成甲硫氨酸S腺苷型半胱氨酸（SAH）SAHSAH水解酶水解生成腺苷HCY生成HCY进入HCY甲基转移酶催化转化反应进行循环反应生成腺苷立脱氨转化次黄嘌呤氨氨进步谷氨酸脱氢酶催化NADH反应NADH转变NAD+样中HCY浓度NADH转化速率（量）成正
（2）氧化型HCY原成游离HCY游离HCY胱硫醚β合成酶（CBS）催化丝氨酸反应生成L胱硫醚L胱硫醚胱硫醚β分解酶（CBL）催化生成HCY丙酮酸NH3生成HCY继续进行循环反应丙酮酸乳酸脱氢酶（LDH）催化NADH转变NAD+样中HCY浓度NADH转化速率（量）成正
3组成成分
（1）说明试剂包含组分名称数量例浓度等信息果正确操作重应提供生物学源浓度特性明确说明批号试剂盒中组分否互换
（2）试剂包含校准品质控品应说明组成成分生物学源校准品应注明定值溯源性溯源性少应写明溯源高级包括：标准物质发布单位编号质控品应合适靶值范围靶值范围批特异性注明批特异性附单独靶值单
4储存条件效期
（1）试剂效期稳定性复溶稳定性开瓶稳定性等信息作详细介绍包括环境温湿度避光条件等
（2）组分保存条件效期时应分说明产品总效期中效期短准
注：保存条件应模糊表述室温应明确贮存温度2℃—8℃效期12月稳定期限应月日时单位
5适仪器
（1）说明适仪器提供仪器关必信息便户够做出选择
（2）应写明具体适仪器型号泛指某系列仪器
6样求
重点明确容：
（1）样采集：说明采集方法样类型血浆样应注明抗凝剂求
血清存脂浊严重黄疸溶血时方法干扰应避免类样
（2）样处理保存：样处理方法保存条件期限运输条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数储存样添加剂求等
红细胞合成释放型半胱氨酸作导致血浆血清中型半胱氨酸浓度升高建议采血置冰浴中（冷藏运输）应时分离出血浆（血清）样
（3）样浓度超出线性范围限稀释测定需明确稀释倍数稀释溶液等信息
7检验方法
详细说明试验操作步骤包括：
（1）试验具体操作步骤
（2）试剂配制方法注意事项
（3）试验条件：温度时间仪器波长等试验程中注意事项
（4）校准：校准品方法注意事项校准曲线绘制应注明推荐校准周期
（5）质量控制：质控品方法质控结果必解释推荐质控周期等质控合格应提供相关解决方案
8参考区间
（1）应注明常样类型参考区间简说明参考区间确定方法
（2）简单介绍设定该参考区间选健康群区域特征建议注明字样理种性年龄等差异建议实验室建立参考区间
9检验结果解释
（1）说明试验结果产生影响素
（2）说明种情况需进行确认试验
10检验方法局限性
（1）说明检测结果仅供床参考单独作确诊排病例
（2）说明该检验方法原会测量结果产生偏离测量结果完全满足床需：干扰（胆红素血红蛋白甘油三酯等）等
11产品性指标
说明该产品性指标应少包括：外观装量试剂空白吸光度试剂空白吸光度变化率（适）分析灵敏度线性范围重复性批间差准确度等性评估结果进行简总结
12注意事项
应少包括容：
（1）试剂盒检测结果仅供床参考患者床诊治应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
（2）样反应废弃物应视传染源提示操作者采取必防护措施
（3）否受床症状药情况等素影响S腺苷甲硫氨酸甲氨蝶呤等
三审查关注点
（）产品技术求中性指标设定检验方法否符合相关行业标准求技术求格式否符合关发布医疗器械产品技术求编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定
（二）产品说明书编写容格式否符合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求相关容否符合医疗器械说明书标签理规定（国家食品药品监督理总局令第6号）中说明书求
（三）分析性评估指标结果否支持产品技术求确定否满足指导原中指标验证求
（四）参考区间确定方法否合理数统计否符合统计学相关求结否说明书声称致
（五）试剂稳定性研究方法否合理稳定性结否说明书声称致
（六）床试验采样类型病例否满足试剂盒声称预期途样量床研究单位选择试剂选择统计方法研究结果床方案报告撰写格式等否符合关发布体外诊断试剂床研究技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）相关容规定
（七）产品风险分析资料撰写否符合YYT 0316—2016医疗器械风险理医疗器械应求
四编写单位
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型半胱氨酸测定试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请型半胱氨酸测定试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原型半胱氨酸测定试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原供申请审查员指导文件涉注册审批等行政事项作法规强制执行够满足法规求方法采应提供详细研究资料验证资料应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准体系断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
型半胱氨酸测定试剂体外定量测定血清血浆中型半胱氨酸浓度方法学考虑指导原指基分光光度法原理利全动半动生化分析仪分光光度计医学实验室采酶循环法进行型半胱氨酸定量检验床化学体外诊断试剂根测定方法分速率法终点法两种
指导原适干式型半胱氨酸测定试剂体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）食品药品监总局关印发体外诊断试剂分类子目录通知（食药监械〔2013〕242号）型半胱氨酸测定试剂理类二类分类代码6840
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性方面说明研究结果总结评价类产品市情况介绍等容应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）相关求面着重介绍型半胱氨酸测定试剂预期途关床背景情况
体型半胱氨酸（HCY）源蛋氨酸蛋氨酸源食物蛋氨酸分子含甲基ATP作生成S腺苷蛋氨酸通种转甲基作体已知50种具重生理活性物质提供甲基血浆中型半胱氨酸分结合型游离型两种四种分子形式存通常测定血浆中总型半胱氨酸国外1995年Bouskey等汇集分析27研究单位总数4666例床研究结果发现10冠心病患者高型半胱氨酸血症致血浆HCY增加5mmolL相血清胆固醇增加05molL（20mgdL）血造成危害项587例血造影确诊冠心病患者进行46年访研究64例死亡四年时间里型半胱氨酸水<9mmolL者死亡率38相型半胱氨酸水≥15mmolL者死亡率247分析中影响素（年龄性吸烟史高胆固醇血症等）型半胱氨酸水9—149mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者19倍（p<005）型半胱氨酸水15—199mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者28倍（p<005）型半胱氨酸水>20mmolL患者病死率血清水<9mmolL患者45倍（p<002）述研究表明高型半胱氨酸血症冠心病力危险预测子
（二）原材料研究资料（需提供）
原材料（例酶原料）选择制备质量标准试验验证研究资料质控品校准品原料选择制备定值程试验资料校准品溯源性文件包括具体溯源链试验方法数统计分析等详细资料
（三）生产工艺反应体系研究资料（需提供）
1生产工艺介绍流程图方式表示简说明生产工艺确定企业应采验证够保证产品质量生产工艺
2反应体系研究资料包括：样采集处理样求确定反应校准品样试剂量缓液时间波长等条件确认资料试验数校准方法质控方法等
（四）分析性评估资料
申请应提交试剂进行性验证研究资料项分析性评价应包括具体研究项目试验设计研究方法接受标准试验数统计方法（）研究结等详细资料性评估时应试剂选校准品质控品作整体进行评价评估整系统性否符合求关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括试验点适仪器试剂规格批号选校准品质控品床样源等
试剂建议着重分析性进行研究：
1准确度
测量准确度评价次包括：国家标准品（国际标准品）相偏差回收试验方法学等方法申请根实际情况选择方法项项进行研究
（1）国家（国际）标准品相偏差
果研究项目相应国家（国际）标准品国家（国际）标准品进行验证重点观察相应标准品检测结果偏差情况
（2）回收试验
评估定量检测方法准确测定加入纯品（标准溶液）力结果回收率表示通常样进行3—5次回收试验取均值均回收率
回收试验注意事项：
①加入纯品（标准溶液）体积源样体积应会产生基质变化
②量加入标准液样中测物浓度接医学决定水（10~20μmolL）
③纯品（标准溶液）浓度应该足够高浓度回收样
（3）方法学
采参考方法国国际普遍认质量较已市类试剂作方法拟申报试剂时检测批床样品（少40例样）测定结果间差异解拟申报试剂参方法间偏倚偏倚允许误差范围说明两检测系统病标测定结果基相符份床样医学解释拟申报试剂方法相会产生差异结果
实施方法学前应分拟申报试剂试剂进行初步评估确认两者分符合相关质量标准方进行方法学方法学时应注意质量控制样类型浓度分布范围结果进行合理统计学分析
2空白吸光度
试剂说明书规定参数测试指定空白样记录测试反应完成吸光度值（A）测试结果试剂空白吸光度测定值
注：空白样纯水生理盐水零校准液等
3空白吸光度变化率（适）
试剂测试指定空白样记录试剂规定参数吸光度差值空白吸光度变化率（ΔAmin）应企业规定值
4分析灵敏度
试剂测试型半胱氨酸已知浓度（5—15）μmolL样记录试剂规定参数吸光度差值
（1）终点法测试试剂100μmolL样吸光度变化（ΔA）应002
（2）速率法测试试剂100μmolL样吸光度变化率（ΔAmin）应001
5重复性
测量批精密度评估应包括两浓度水样进行两浓度应试剂盒测量范围通常选该检测指标参考区间附异常样建议采源样源样基质接样进行试验选择重复测试浓度（100±20）μmolL样结果变异系数（CV）应5（200±40）μmolL样结果变异系数（CV）应3
6批间差
3批号试剂分测试（100±20）μmolL样批号测试3次分计算批3次测定均值计算相极差
7线性
建立试剂线性范围样基质应床实际检测样相似理想样分析物浓度达预期测定限混合血清（源样）制备低浓度样时应充分考虑稀释样基质影响建议稀释液量采阴性血清建立线性范围时需预期测定范围选择7—11浓度水例预期测定范围加宽130范围选择更浓度水然试验结果逐渐减少数点（终少7水）直表现出线性关系发现宽线性范围验证线性范围时选择5—7浓度水
超出线性范围样需稀释测定应做相关研究明确稀释液类型稀释倍数研究程应注意基质效应影响必时应提供基质效应研究关资料
8干扰试验
考察样中常见干扰物质检测结果影响胆红素血红蛋白甘油三酯时根检验原理选择特异性干扰物质（血氨S腺苷蛋氨酸抗坏血酸谷胱甘肽等）进行检测干扰物浓度分布应覆盖体生理病理状态出现物质浓度方法模拟添加干扰物样分进行验证样量选择应体现定统计学意义说明样制备方法干扰试验评价标准确定接受干扰物质极限浓度评价型半胱氨酸样浓度应少包含医学决定水（正常参考区间限）
药物干扰研究根需申请选择否进行选择种药物浓度进行
9校准品质控品赋值（适）
（1）应参GBT 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性求提供企业（工作）校准品试剂盒配套校准品赋值确定度计算记录提供质控品定值靶值范围确定记录
（2）均性
取批号定数量包装单元校准品质控品包装单元测试1次面公式计算测试结果均值（）标准差S1述校准品包装单元连续测试相次数计算测试结果均值（）标准差S2列公式计算瓶间重复性CV参数瓶间重复性结果均应符合求
公式 1
公式 2
公式 3
公式 4
S1
均值
S标准差
n测量次数
xi指定参数第i次测量值
10需注意问题
适机型产品应提供产品说明书适机型项中列型号仪器性评估资料
包装规格需包装规格间差异进行分析验证包装规格产品间存性差异需提交采包装规格产品分析性评估包装规格间存性差异需提交包装规格间存性差异详细说明具体说明包装规格间差产生影响
试剂盒样类型包括血清血浆样应二者进行相关性研究确认二者检测结果否完全致存某种相关性（系数关系）血浆样申请应抗凝剂进行研究确认适抗凝条件否会干扰检测结果
（五）参考区间确定资料
应提交验证参考区间采样源详细试验资料统计方法等
应明确参考群纳入排标准研究表明型半胱氨酸性年龄具定相关性建议厂家根床需必时性年龄（选择特定年龄段）进行考察研究例数均应符合统计学求
引针中国群参考区间研究相关文献应明确说明出处进行验证研究结果应说明书参考区间项中进行相应说明
（六）稳定性研究资料
稳定性研究包括效期稳定性热稳定性运输稳定性开瓶（复溶）稳定性等申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体方法程效期稳定性研究应提供少3批样品实际储存条件保存成品效期研究资料产品包含校准品质控品应提供相应稳定性试验研究资料
应样储存条件稳定性期限进行研究说明书中样求处明示（注：相关文献中已明确说明作）
（七）床评价资料
床试验资料应符合关发布体外诊断试剂床试验技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求时研究资料形式应符合关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）床研究资料关规定面仅床试验中基问题进行阐述
1研究方法
选择境已批准市性低拟申报产品类产品作试剂采试验体外诊断试剂（称考核试剂）进行较研究试验证明品已市产品等效
2床研究单位选择
应少两家国家食品药品监督理总局备案床试验机构开展床试验床研究单位试验操作员应足够时间熟悉检测系统环节（试剂质控操作程序等）熟悉评价方案整试验中考核试剂试剂应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
3伦理求
床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样血清血浆等获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见受试者知情意书例外情况客观获受试者知情意该床试验受试者没风险伦理委员会审查批准免受试者知情意
4床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床试验研究方案床研究机构方案设置应保持致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉试验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究单位选试剂应保持致机型应进行适性验证便进行合理统计学分析外考核试剂样类型应产品说明书致应超越试剂样类型检测求果选择试剂适样类型外样应额外样类型进行验证
5研究象选择
床试验应选择具特定症状体征群作研究象申请建立病例纳入标准时应考虑群差异量覆盖类适群参考区间分组产品进行结果统计分析时应类群分进行数统计分析
研究总体样数少200例覆盖线性范围应充分考虑病理值样验证异常值样数建议少80例参考区间年龄性分段建议组段样数量应符合统计学求
样应明确抗凝剂求存贮条件否冻融等避免样试验中新鲜样避免贮存法避免贮存样品时注明贮存条件时间数分析时应考虑影响
果声称时适血清血浆样血清（血浆）试验例数参述求采考核试剂时验证中少100例受试者身血清血浆样测试结果间致性采取试剂进行试验验证血浆（血清）样测试结果间致性中浓度样分布情况总例数中分布情况应致
产品发生涉检测条件优化增加原样类型具性样类型等变更事项床样总数少100例少两家床试验机构开展床试验变更原材料供应商参考区间变化增加床适应证等变更事项应根产品具体变更情况酌情增加床试验总样数
6统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法结合床试验数正偏态分布等情况建议统计学负责选择合理统计学方法进行分析统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异相关分析线性回绝偏倚偏差相偏倚偏差分析配t检验等考核试剂试剂两组检测结果相关线性回分析应重点观察相关系数（r值）判定系数（R2）回拟合方程（斜率y轴截距）等指标床研究方案中应明确统计检验水准检验假设评价考核试剂试剂否等效标准
试剂盒时适血清血浆样采相关分析线性回配t检验等统计学方法评价血浆血清样测试结果间致性
7床试验总结报告撰写
根关发布体外诊断试剂床试验技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
（1）床试验总体设计方案描述
①床试验整体理情况床研究单位选择床研究员简介等基情况介绍
②病例纳入排标准群预期选择例数标准
③样类型样收集处理保存等
④统计学方法统计软件评价统计结果标准
（2）具体床试验情况
①考核试剂试剂名称批号效期机型等信息
②研究单位病例数群分布情况进行总合建议列表图示方式出具体例数百分
③质量控制试验员培训仪器日常维护仪器校准质控品运行情况检测精密度质控品回收（测量值）抽查结果评估
④具体试验程样检测数收集样长期保存等
（3）统计学分析
①数预处理异常值离群值处理研究程中否涉方案修改
②定量值相关性致性分析
回分析验证两种试剂结果相关性ya+bxrR2形式出回分析拟合方程中：y考核试剂结果x试剂结果b方程斜率ay轴截距r相关系数（求r＞0975）r＜0975应适扩样量扩数范围R2判定系数（通常求R2≥095）计算回系数截距95信区间
分计算医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚偏差95置信区间医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚应允许误差（建议参12CLIA’8812室间质评接受范围12源生物变异总允许误差卫生行业标准等相关求设定允许误差）
应出考核试剂试剂间差值（绝偏倚偏差）值（相偏倚偏差）散点图观察分析点偏倚分布情况
通相关性分析配t检验等统计分析方法综合评价考核试剂试剂等效性
（4）讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品风险分析资料
申请应考虑产品寿命周期环节预期途错误安全性关特征已知预见危害等方面判定患者风险估计进行风险分析应符合YYT 0316—2016医疗器械风险理医疗器械应求
（九）产品技术求
产品技术求应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）关发布医疗器械产品技术求编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定
表1 产品适相关标准
GBT 191—2008
包装储运图示标志
GBT 21415—2008
体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性
YYT 0316—2016
医疗器械 风险理医疗器械应
YYT 04661—2009
医疗器械 医疗器械标签标记提供信息符号 第1部分：通求
YYT 1258—2015
型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）
作定量检测试剂应包括性指标：外观装量试剂空白分析灵敏度线性精密度准确性稳定性等性指标应低YYT 1258—2015型半胱氨酸检测试剂（盒）（酶循环法）求相应国家行业标准发布更新产品技术求低相关求外根实际情况增加列检验项目：
（1）试剂空白吸光度变化率（适）
试剂测试空白样记录试剂参数规定读数点吸光度差值（ΔA）计算空白样吸光度变化率（ΔAmin）应企业规定值
（2）准确度（方法学）
测试剂盒申请选定分析系统（参考方法国国际普遍认质量较已市类试剂）分检测少40检测范围源样品回分析验证两种试剂结果相关性计算相关系数r应等0975医学决定水处（正常参考区间限）相偏倚应企业规定值
（3）复溶稳定性（干粉冻干试剂适）：干粉试剂开瓶（复溶）规定贮存条件保存效期末产品性应少符合线性范围准确度重复性
（4）校准品质控品（适）
①溯源赋值说明：型半胱氨酸尚国家标准物质已国际标准物质试剂盒配套校准品质控品应参GBT 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量测量 校准品控制物质赋值计量学溯源性求溯源国家国际标准物质提供校准品溯源性说明质控品赋值说明国家标准物质发布应国家标准物质进行验证
②性求：外观装量均性（瓶间差）冻干品包括：含水量复溶稳定性液体剂型应包含开瓶稳定性校准品定值质控品单独注册单元应考察赋值准确性
（5）附录
注册单元中包含校准品质控品应附录中明确校准品质控品赋值程序
（十）产品注册检验报告
根体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）求首次申请注册第二类产品应该国家食品药品监督理部门认具相应承检范围医疗器械检测机构进行样品注册检验已国家标准品检测项目注册检验时应采相应国家标准品进行目前尚国家标准品项目申请应建立质控体系提供相应校准品质控品注册申报资料中应包括相应注册检验报告产品技术求预评价意见
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途试验原理试验方法检测结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书体外诊断试剂注册申报重文件产品说明书格式应符合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）医疗器械说明书标签理规定（国家食品药品监督理总局令第6号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明参考文献相关信息
结合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求面型半胱氨酸测定试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申报员更合理完成说明书编制
产品说明书容原应全部中文进行表述含国际通行业普遍认英文缩写括号中文标明确实适中文表述词语相应英文缩写
1预期途应包括部分容：
（1）说明试剂体外定量测定血清血浆中型半胱氨酸浓度
（2）预期途相关床适应证背景情况说明相关床实验室诊断方法等
2．检验原理
指导原适酶循环法血清血浆中型半胱氨酸进行定量测定试剂面介绍该产品2种反应原理：
（1）氧化型HCY原成游离HCY游离HCYHCY甲基转移酶催化S腺苷甲硫氨酸（SAM）反应生成甲硫氨酸S腺苷型半胱氨酸（SAH）SAHSAH水解酶水解生成腺苷HCY生成HCY进入HCY甲基转移酶催化转化反应进行循环反应生成腺苷立脱氨转化次黄嘌呤氨氨进步谷氨酸脱氢酶催化NADH反应NADH转变NAD+样中HCY浓度NADH转化速率（量）成正
（2）氧化型HCY原成游离HCY游离HCY胱硫醚β合成酶（CBS）催化丝氨酸反应生成L胱硫醚L胱硫醚胱硫醚β分解酶（CBL）催化生成HCY丙酮酸NH3生成HCY继续进行循环反应丙酮酸乳酸脱氢酶（LDH）催化NADH转变NAD+样中HCY浓度NADH转化速率（量）成正
3组成成分
（1）说明试剂包含组分名称数量例浓度等信息果正确操作重应提供生物学源浓度特性明确说明批号试剂盒中组分否互换
（2）试剂包含校准品质控品应说明组成成分生物学源校准品应注明定值溯源性溯源性少应写明溯源高级包括：标准物质发布单位编号质控品应合适靶值范围靶值范围批特异性注明批特异性附单独靶值单
4储存条件效期
（1）试剂效期稳定性复溶稳定性开瓶稳定性等信息作详细介绍包括环境温湿度避光条件等
（2）组分保存条件效期时应分说明产品总效期中效期短准
注：保存条件应模糊表述室温应明确贮存温度2℃—8℃效期12月稳定期限应月日时单位
5适仪器
（1）说明适仪器提供仪器关必信息便户够做出选择
（2）应写明具体适仪器型号泛指某系列仪器
6样求
重点明确容：
（1）样采集：说明采集方法样类型血浆样应注明抗凝剂求
血清存脂浊严重黄疸溶血时方法干扰应避免类样
（2）样处理保存：样处理方法保存条件期限运输条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数储存样添加剂求等
红细胞合成释放型半胱氨酸作导致血浆血清中型半胱氨酸浓度升高建议采血置冰浴中（冷藏运输）应时分离出血浆（血清）样
（3）样浓度超出线性范围限稀释测定需明确稀释倍数稀释溶液等信息
7检验方法
详细说明试验操作步骤包括：
（1）试验具体操作步骤
（2）试剂配制方法注意事项
（3）试验条件：温度时间仪器波长等试验程中注意事项
（4）校准：校准品方法注意事项校准曲线绘制应注明推荐校准周期
（5）质量控制：质控品方法质控结果必解释推荐质控周期等质控合格应提供相关解决方案
8参考区间
（1）应注明常样类型参考区间简说明参考区间确定方法
（2）简单介绍设定该参考区间选健康群区域特征建议注明字样理种性年龄等差异建议实验室建立参考区间
9检验结果解释
（1）说明试验结果产生影响素
（2）说明种情况需进行确认试验
10检验方法局限性
（1）说明检测结果仅供床参考单独作确诊排病例
（2）说明该检验方法原会测量结果产生偏离测量结果完全满足床需：干扰（胆红素血红蛋白甘油三酯等）等
11产品性指标
说明该产品性指标应少包括：外观装量试剂空白吸光度试剂空白吸光度变化率（适）分析灵敏度线性范围重复性批间差准确度等性评估结果进行简总结
12注意事项
应少包括容：
（1）试剂盒检测结果仅供床参考患者床诊治应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
（2）样反应废弃物应视传染源提示操作者采取必防护措施
（3）否受床症状药情况等素影响S腺苷甲硫氨酸甲氨蝶呤等
三审查关注点
（）产品技术求中性指标设定检验方法否符合相关行业标准求技术求格式否符合关发布医疗器械产品技术求编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定
（二）产品说明书编写容格式否符合关发布体外诊断试剂说明书编写指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求相关容否符合医疗器械说明书标签理规定（国家食品药品监督理总局令第6号）中说明书求
（三）分析性评估指标结果否支持产品技术求确定否满足指导原中指标验证求
（四）参考区间确定方法否合理数统计否符合统计学相关求结否说明书声称致
（五）试剂稳定性研究方法否合理稳定性结否说明书声称致
（六）床试验采样类型病例否满足试剂盒声称预期途样量床研究单位选择试剂选择统计方法研究结果床方案报告撰写格式等否符合关发布体外诊断试剂床研究技术指导原通告（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）相关容规定
（七）产品风险分析资料撰写否符合YYT 0316—2016医疗器械风险理医疗器械应求
四编写单位
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