SGPH11




生物制品质量控制分析方法验证技术
审评般原















药品审评中心
2005 年 12 月

目 录

概述 …………………………………………………………2
二生物学测定常方法 ………………………………………3
三方法源（种类） …………………………………………4
四分析方法 ………………………………………………………5
五分析方法验证 ……………………………………………7
（）专属性
（二）准确性
（三）精密度
（四）线性
（五）范围
（六）耐性
（七）检测限度
（八）定量限度
六综合分析 ……………………………………………………13
七名词解释 ……………………………………………………13
八参考文献 …………………………………………………… 14
九附录（推荐验证方案） ………………………………… 15
十起草说明 …………………………………………………… 16
十著者 …………………………………………………… 21
1概述
质控分析方法验证证明采方法适合相应检测求
具相准确性性进达控制产品质量目
验证分析方法控制产品质量方法验证制定
质量标准基础
般情况需验证分析项目：鉴试验杂质检查原
液制剂中效成分含量测定生物活性测定质控方法
必时应加验证
生物制品质控中采方法包括理化分析方法生物学测定方
法生物制品理化分析方法验证原化学药品基相参
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原进行时需结合
生物制品特点考虑技术审评般原针生物学测定方法
验证进行讨生物学测定方法广泛种检测目包括鉴
生物活性杂质检测等中生物活性（效价效
力）测定
相理化分析方法言生物学测定具更变性
般动物细胞生物分子生物学测定判断标准
适灵活掌握定量测定方法应减少方法变异验
证结果应证明该方法具相准确性性应够
效控制产品质量基标准未必质控分析方法验证
拟定质控分析方法构成制造检定规程难控制产品质量
申报品种质量控性法评价文某关键参数提出
2原性建议求拟作技术审评般原时供申
报单位进行相关研究工作时参考
生物制品具样性复杂性特点质控分析方法会
特色技术审评般原适生物制品里
提出基原具体验证方案根原制定进
行相关研究工作原（包括推荐验证设计方案）符应
提供相应理
生物制品质控分析方法验证工作应起始研发工作初
贯穿研发程（包括床前床研究）始终
二 生物学测定常方法
生物学测定系指采生物学方法反映测物生物学特性
目测定方法生物学测定常方法根具体情况
产品常规质控时采中种种鉴种测定方法仅
反映制品某方面特性方法变异般较更控制产品
质量必时需时采种方法进行测定
（）酶反应试验
指体外促进酶分子活化身具备酶活性通底
物变化检测酶活性酶辅酶激酶激活剂抑制剂等
活性测定类方法变异相较结果较准确
（二）结合试验
基产品某种物质结合特性设计试验免疫结合
试验目前生物制品鉴结合试验中测定分子
3定具生物活性般作制品活性（效力）测定
类方法变异相较
（三）细胞测定试验
指产品诱导细胞产生测定应答细胞增殖聚集
分化死亡迁移产生特定化学物质等细胞测定试验般较
反映制品生物学活性常种生物制品活性（效力）测
定述两类方法相类方法变异较传代细胞相
原代细胞方法变异更
（四）动物试验
指整体动物试验材料检测制品生物学活性（效力）
试验方法动物保护力试验般疫苗效力测定动物
实验成高周期长变异般仅成品检定某
治疗制品作机理身化学性质原难建立
体外测活方法采动物试验方法测定类方法
变异般相较进步研究中应体外法代
三方法源（种类）
根质控分析方法源方法分两类标准方法
非标准方法原类方法均需进行验证方法源
验证求
（）标准方法（正式方法法定方法）
般指已国家标准质控方法WHO 推荐质控方法
作重参考类方法确定标准方法前已适验
4证申报者应说明方法源附具体方法研制单位首次采
类方法前应该方法进行适验证进行专属性精密度
验证便证明实际条件该方法适
（二）非标准方法
1标准方法代方法
类方法系指申报者提出取代标准方法代方法申
报者决定采类方法时应持慎重态度需提供表明新方法等
优原方法全面验证资料包括两种方法较
性资料
2参考文献方法
指专业杂志著作发表介绍方法般认真
类方法需进行全面验证应说明参考文献出处附原文
译文
3建立方法
某产品尤创新性产品讲缺少参考方
法通常需建立种新分析方法类方法需进行全面
严格验证
四分析方法
生物制品质控分析方法准确性性技术方法身（包
括方法原理方法技术特点等）密切相关应首先详述分析
方法包括：
（）分析方法原理
5阐明分析方法原理
（二）供试品
应说明取样包括次测定时取样数量取（单
支支混合）等
（三）测试仪器参数
列出测试仪器仪器相关参数
（四）测试试剂
列出测试试剂规格说明源果某试剂
制采购试剂进行加工处理应详述制备处理程
（五）标准品参考品配备
详述标准品参考品源配备程标准品参考品
源应符合国家关规定
（六）供试品配备
详述测样品配备程
（七）测试程
实验步骤详述整实验程说明关键步骤实验条件
（八）计算
表格形式显示获取数说明数处理方法
提供计算公式说明计算方法出处采
（九）结果报告
说明结果报告形式
（十）判定标准
6提供判定标准说明判定标准制定
五分析方法验证
质控分析方法验证根方法需测定该方法专属
性准确性精密度线性范围检测限度定量限度耐性等
指标中检测目试验方法需进行
参数测定表种检测方法通常需测定参数：

杂质检查 分析方法

参数
鉴试验
定量 限度
生物活性
（效价）测
定
含量测定
准确性 － ＋ － ＋ ＋
精密度 － ＋ － ＋ ＋
耐性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
线性 － ＋ － ＋ ＋
范围 － ＋ － ＋ ＋
专属性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
检测限度 － － ＋ － －
定量限度 － ＋ － － －
注：－表示通常需测定参数
＋表示通常需测定参数

检测方法进行验证时根检测目方法原理
方法技术特点检物成分等设计具体验证方案般
性技术求建议
（）专属性
生物学测定方法专属性测定方法产品组成密切相关
应首先测试原理测试材料供试品组成等方面分析方法专
7属性进进行必验证
生物制品性质组成样检定方法相难提
出统专属性验证求面生物技术产品常种检定方法
例进行具体分析说明
1采免疫印迹试验进行生物制品鉴应首先
抗体特异性进行分析供试品中存组分应进步验
证检测物中物质否引起非特异性免疫反应
2采细胞测定方法检测生物活性应首先说明测物质
特定细胞应答间相关性二者相关性较般认该
方法特异性较表明细胞测定方法特异性进行相关试验
进行验证加入抗体特异抑制剂封闭实验等果成品中加入
影响活性测定辅料应进行相关验证排种影响
3采ELISA 法检测重组产品残余宿蛋白含量采
表达体系相宿细胞蛋白作免疫原制备抗体采产
品相似工艺进行处理免疫动物获抗体特异性更
外产品中存量目蛋白影响残余宿蛋白测定应进
行相关验证排种影响
（二）准确性
化学药品般采填加回收实验测定已知量
供试品进行测定较测定值真实值间差异生物制
品言没纯标准物质难获确切准确性数
般需准确测出该参数
8然问题生物活性测定方法准确性密切相关
值研究者注意
生物制品生物学活性相活性般时进行测定标
准品参考品进行较应单位适定义适
标准品参考品作计算准确测定结果
应注意点：
1必须时测定供试品标准品参考品剂量反应曲线
两条曲线必须具行性供试品标准品参考品活性成分
仅量没质区果两条曲线具备行性说明
供试品标准品参考品中活性成分者该测试系统具
适性种情况难准确计算出相活性结果
2应供试品机分布保证测试系统衡性需
引起系统偏差某素进行分析排试验板板
位置（边缘效应）检测次序动物实验中笼子效应等
（三）精密度
理化测定方法相种生物学测定方法变异均较
类制品生物学测定方法变异精密度求根
产品性质途测定方法特点区测定方法生物
活性药理作效力相关性较情况应采变异较
测定方法
生物活性（效价）测定生物制品质控中指标
该方法性会直接影响产品控性生物活性测定方法
9精密度验证工作应非常重视果成品检定项目中生物活性指标
唯测定效成分含量水指标必须采定量测定方
法减少方法变异
测定方法精密度较般情况酶
法： 20结合试验 20细胞试验 30动物试验
50尚成熟试验方法某特殊方法（噬斑试验）
方法变异会更
然方法精密度接受标准应方面进行考虑
药物床效应（包括疗效良反应）药剂量变化
非常敏感时需生物活性测定方法精密度提出更高求
（四）线性
应分析方法范围评价检测结果供试品中分析物浓度
（含量）线性关系
建议方法直接标准品供试品进行测定应信
号分析物浓度作图根图形否呈线性进行评价果线
性关系适统计方法估算试验结果某情况分析
指标供试品浓度呈线性关系回分析前测试数进行数学
转换应提供相关系数Y 轴截距回线斜率等数
分析实测值回线偏差（离散性）助线性作出评价
某生物学测定方法转换均证明呈线性
呈线性关系范围较种情况分析响应值供试品中
分析物浓度（含量）适函数表示采曲线拟合方法
10通测定全范围曲线标准品参考品矫正 ED50 IC50
值计算活性单位应提供拟合曲线方程参数提供相关系数
（五）范围
具体范围般根检测目设定通常线性研究中

验证时设定范围应少包括检定标准中规定范围
标准中规定成品生物活性应标示量 80％～120％验证范围
设定标示量 70～130％
确定范围方法：供试品浓度（含量）范围末端范围
时均获满意线性精密度准确性
生物制品生物活性测定言精密度线性范围非
常重验证参数减少验证工作繁杂性范围研究精密
度线性研究合进行（参见推荐验证设计方案）
（六）耐性
研制阶段应进行耐性评估应表明方法参数
微改变时该分析方法然
参数改变温度湿度培养时间试剂 pH 等进行
适调整根具体情况针关键参数进行验证
种试验条件均需准确性精密度参数进行测定生
物学测定结果分析条件较敏感耐性研究结果建立
系列系统适性参数确保次实际测定中该方法效

11（七）检测限度
检测限度测定通直观法信噪法等测定
直观法：系列已知浓度分析物供试品进行分析
测分析物量建立
信噪法：已知低浓度试样测出信号空白样品测出信
号进行较算出检测出低量般接受信噪
3：12：1
（八）定量限度
定量限度测定通直观法信噪法等测定
直观法：系列已知浓度分析物供试品进行分析准
确性精密度符合求情况确定分析物定量
量
信噪法：已知低浓度试样测出信号空白样品测出信
号进行较算出检测出低量般接受信噪
10：1
六综合分析
根方法源测试原理方法技术特点具体验证
结果等质控分析方法准确性性进行综合分析评价
拟定质控分析方法构成制检规程否基控制产品质量
七名词解释
准确性（Accuracy）：分析方法准确性指测定值真实值
认参考值致性接程度
12精密度（Precision）：分析方法精密度指规定条件
均质供试品次取样进行系列检测结果接程度般表示变
异系数（CV％）变异系数测定值标准差测定值均数值
精密度三层面考虑重复性中间精密度重现性
重复性（Repeatability）：指样操作条件较短
时间间隔精密度
中间精密度（Intermediate precision）：指试验室部条
件改变日期分析者仪器批号源实
验材料等情况精密度
重现性（Reproducibility）：指实验室间精密度需
通实验室间协作研究分析方法法定标准采
时应进行重现性试验
线性（Linearity）：分析方法线性指定范围检测
结果供试品中分析物成例关系
范围（Range）：分析方法范围达定准确性精密
度线性时分析物较高较低浓度（量）区间
专属性（Specificity）：分析方法专属性指制品中含
组分杂质降解物添加物（缓液赋形剂稳定剂）等
存时准确测定供试品力
耐性（Robustness）：分析方法耐性指试验参数意
进行微改变时测量结果受影响力说明通常条件
该分析方法性
13检测限度（Detection limit）：分析方法检测限度指供试
品中分析物够检测低量定准确定量
定量限度（Quantitation limit）：分析方法定量限度指准
确性精密度达求时够定量测定供试品中分析物
低量
八参考文献
1 ICH Q2a Test on Validation of Analytical Procedures
2 ICH Q2b Validation of Analytical Procedures ：
Methodology
3 FDA Analytical Procedures and Methods Validation
Chemistry Manufacturing and Controls Documentation
4 WHO WHO Guide to Good Manufacturing Practice
RequirementsPart2：Validition
5 Heath ABStatistical Validity of BioassaysDev Biol
Stand199997：151～156
6 Lansky DValidition of Bioassays for Quality Control
Dev Biol Stand199997：157～168
7 中国生物制品标准化委员会办公室2000 国外生物制品
理标准（续Ⅲ）
8 王军志生物技术药物研究开发质量控制北京：科学出
版社2002 年第 128 页～第 136 页

14九附录：推荐验证设计方案
部分参数验证设计方案供研究者参考：
（）精密度
1 重复性
目：确定试验供试品测量范围
浓度时测定精密度
步骤：配制 3 稀释度供试品（测量范围高中低浓
度）
稀释度重复测定 10 次
计算浓度测定结果均值 SD
计算浓度 CV 值
2 中间精密度
目：确定试验间测量范围供试品浓
度时测定精密性
步骤：配制 3 稀释度供试品（测量范围高中低浓
度）
3 试验中稀释度重复测定 3 次
测定工作日间变化
测定批号试验材料间变化
测定实验员间变化等等
计算试验中浓度测定结果均值 SD
计算试验间浓度 CV 值
15（二）线性范围
目：测定观测值响应关系拟合度
步骤：测量范围配制 68 稀释度
稀释度测定 3 次次重复测定 3 份
进行回分析计算试验相关系数 r

十起草说明
（）起草背景
国生物药物研究起步阶段方面条件限制
质控方法验证工作够重视申报品种较成熟
生物制品国外已市产品质量标准作参考检定
方法验证工作未加强调然着国生物技术研究水
提高生物药物研发工作进步开展质控分析方法验证工作
已日益凸现重性必性
2002 年颁布施行药品注册理办法中增加关检定
方法验证资料项目求进行质控方法验证工作尚
明确规定进步强调项工作重性明确关技术
规范审评工作务急
（二）起草指导思想般原
鉴目前国相关研究基础较薄弱起草技术审评般
原时关注重点难点问题提求适量适度
原解决初步解决目前质控中存问题目力
16求具实性操作性
生物制品质控中采方法包括理化分析方法生物学测定方
法（bioassay）中理化分析方法验证原化学药品基相
参化学药物质量控制分析方法验证技术指导原进
行然进行具体验证时需结合生物制品特点考虑生物
制品生物学测定验证工作方面具定特殊性突出重
点避免重复技术审评般原仅生物学测定方法验证工作
进行讨尤生物活性测定方面目前存问题较
原生物活性测定验证工作作重点进行阐述
生物制品具样性复杂性特点质控分析方法会
特色起草技术审评般原时求适生物制
品方面提出基原举典型例子进
行分析说明研制单位根原结合身产品测定方法
特点确定具体验证方案进行相关研究工作原（
包括推荐验证设计方案）符提供较充分理
审评时接受
（三）关数资料源说明
关质控分析方法验证ICHFDA 等均出台相关指导原
中国药典已收载药品质量标准分析方法验证容
述指导原针化学药品言容求完全适生
物制品尤太适生物学测定方法WHO 相关文件针
生物学测定方法缺少具体方法容验证原化学
17药基致
原参考国外相关文献基础根生物学测定方
法身特点目前国生物制品质控分析方法中存问题
国研究水实际等阐述关方法验证中关注点
验证参数提出般性建议求
（四）容设置说明
生物学测定方法准确性性方法源方法身
密切相关作验证工作前提应首先提供方法源具体
测定方法外分析方法验证工作终保证产品质量
控目种质控分析方法间存着定联系
评价验证工作时需种方法验证结果进行综合分析评
价基种考虑原基容中分析方法验证外
列出方法源分析方法综合分析等容
生物活性测定言精密度线性范围非常重验证
参数原提出般性验证求附推荐
验证设计方案（参 WHO 建议）供研制单位参考
（五）关验证参数说明
1精密度
种生物活性测定方法变异均较精密度太
理想新建立活性测定方法言测定结果稳定难
进行定量法准确标示等问题已成质控中问题针述
情况技术审评般原拟强调作测定效成分含量水生
18物活性指标需采定量测定方法减少方法变异参
国外关标准种测定方法提出般变异范围
课题研究组讨认原中提出变异范围般情况
均做难做结合制品特性床效应
等进行综合评估广泛征求企业界意见认部分创新性
产品讲活性测定方法建立难度研究初方法变异
较会超出原中 CV 范围鼓励创新角度考虑
予适灵活考虑应基影响产品安全效控性评
价
鉴生物学测定方法样性复杂性原正文中未精
密度测定重复次数作明确求理考虑测定次数取决
方法学误差变异方法应增加测定次数操作性角度考
虑复杂成高周期长方法重复次数太试验难度
关验证次数设计需综合考虑应基达验证
目准验证设计方案中重复次数供参考
2线性
线性关系般指检测结果样品含量直线相关性
般情况线性关系定量测定基础应摸索出存较
线性关系测定方法进行线性验证某生物活性测定方法
言线性范围较（细胞测定中呈 S 曲线）时采曲线拟
合方法应更合理鉴目前曲线拟合方法生物活性测定中广
泛采原中线性验证包括关曲线拟合容
193专属性准确性
专属性准确性生物学测定方法需测定参数
样重品种方法应考虑
两参数进行较详细说明列举具体情况提请研制
单位建立方法进行方法验证程中考虑
4耐性
生物学测定结果分析条件较敏感方法耐
性验证非常重保证测定结果稳定研究者应项工作
予充分重视考虑目前国相关研究现状项研究工作
起步阶段致验证工作量暂提出：根具体情况
针关键参数进行验证视国相关研究进
展逐步提高项验证求
5检测限度定量限度
两项杂质检查中需测定参数根目前国实际状况
部分生物制品尚未建立杂质检查项目已建立杂质检测方
法应参原进行验证
（六）需说明问题
文包括相关研究工作申报资料建议般性求拟
作技术审评中般性原生物制品具复杂性样性
特点技术审评般原求面面俱许具体问题会出
现原未包括类问题研制单位参原
精神般求采取具体问题具体分析方法确定适宜该品种
20质控分析方法验证方案原定局限性关求必
着国生物制品研发水提高审评验积累断提
高更趋完善希原促进生物制品研发者审评者相
关技术问题交流沟通

十著者
21

《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档