附件2
CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
药物代谢酶药物体代谢程中起着重作活性强弱药物代谢速率重影响素直接决定药物作强度持久性体药物代谢酶细胞色素P450（CYP450）工酶N乙酰转移酶（NAT）等CYP2C19酶种重CYP450工酶床CYP2C19酶代谢酶药物包括抗血板药物（：氯吡格雷）质子泵抑制剂等氯吡格雷种抗血板药物广泛：急性冠脉综合征（ACS）患者包括非ST段抬高性ACS（稳定性心绞痛UA非Q波心肌梗死）ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者中非ST段抬高性ACS包括皮冠状动脉介入术置入支架患者外周动脉性疾病患者期心肌梗死期缺血性卒中患者氯吡格雷作种前体药物身药理活性CYP2C19酶代谢活化产生活性代谢产物者血板表面P2Y12受体逆结合抑制血板聚集干扰ADP介导血板活化发挥抗血板效应
CYP2C19酶编码基CYP2C19基位类10号染色体CYP2C19基含42等位基CYP2C19*1野生型等位基编码酶具正常活性CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）编码CYP2C19酶活性降低中国群中存2种等位基中国群发生频率分231～352～7CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）编码CYP2C19酶活性增强中国群发生频率约05～4CYP2C19*2*3*17外影响CYP2C19酶活性CYP2C19等位基包括CYP2C19*4～CYP2C19*8等等位基中国群发生频率低功床意义进步研究
CYP2C19基遗传变异导致CYP2C19酶活性体差异群出现超快代谢者（UM）快代谢者（EM）中间代谢者（IM）慢代谢者（PM）4种表型CYP2C19 UM患者应常规剂量氯吡格雷体生成活性代谢产物增血板抑制作升高抗血板功增强出血风险增CYP2C19 PM患者应常规剂量氯吡格雷体生成活性代谢产物减少血板抑制作降抗血板功减弱血栓风险增UM体基型CYP2C19*17*17纯合型CYP2C19*1*17杂合型EM体基型CYP2C19*1*1纯合型IM体基型CYP2C19*1*2CYP2C19*1*3CYP2C19*2*17CYP2C19*3*17杂合型PM体基型CYP2C19*2*3CYP2C19*2*2CYP2C19*3*3杂合型纯合型
通CYP2C19药物代谢酶基态性检测服药群分述4类氯吡格雷代谢患者氯吡格雷药指导美国FDA氯吡格雷药物说明书中建议：CYP2C19 PM患者考虑血板P2Y12抑制剂遗传药理学知识库床遗传药理学实施联盟（CPIC）发布CYP2C19基型氯吡格雷药指导文件建议：CYP2C19 PM患者IM患者选抗血板药物（：普拉格雷格瑞洛）进行治疗2015年原国家卫生计生委发布药物代谢酶药物作靶点基检测技术指南（试行）建议：CYP2C19 PM患者抗血板治疗增加氯吡格雷剂量选CYP2C19代谢抗血板药物（格瑞洛）等
然氯吡格雷服药群需进行CYP2C19基型检测国外尚统意见2013年发布抗血板治疗中国专家识建议：CYP2C19基型检测床应价值限推荐常规进行CPIC发布CYP2C19基型氯吡格雷药指导文件中建议：基CYP2C19基型氯吡格雷抗血板治疗进行皮冠状动脉介入治疗急性冠脉综合征患者（简称ACSPCI患者）尚证表明CYP2C19基型指导氯吡格雷患者中抗血板治疗2014年发布抗血板药物治疗反应样性床检测处理中国专家建议建议：推荐常规进行CYP2C19基型检测仅PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者推荐进行血板功检测CYP2C19基型检测2017年发布基态性抗栓药物床应专家建议建议：CYP2C19基型检测缺血高风险出血高风险患者选P2Y12抑制剂参考价值综合考虑述意见结合中国实际情况建议指导原预期适群限定：
正服服氯吡格雷进行抗血板治疗冠心病患者急性冠脉综合征（ACS）进行皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者（ACSPCI患者）PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者缺血高风险出血高风险患者等中PCI术血栓高危患者缺血高风险出血高风险患者群限定参考相关指南
指导原述CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂指：利分子生物学检测技术聚合酶链反应（PCR）等CYP2C19基特定序列检测靶标接受氯吡格雷治疗患者外周静脉全血口腔拭子等样基组DNA中CYP2C19基态性进行体外定性检测试剂氯吡格雷药指导
指导原技术求基荧光探针PCR方法建立分子生物学检测技术部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性
指导原仅氯吡格雷药指导CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂相关求进行说明CYP2C19参种药物代谢药物药指导CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学检验原理低检测限测靶标（基态性位点）等方面详细说明申报产品目前市场已获批准类产品间区外应说明测靶标纯合型杂合型中国群发生频率
测靶标新态性位点申请应提交支持资料证明：1携带新位点等位基编码CYP2C19酶氯吡格雷具预期代谢活性2携带新位点等位基患者血板功具预期差异3接受氯吡格雷治疗携带新位点等位基患者表现出预期良心血事件4根基型调整抗血板治疗方案携带新位点等位基患者预获改善述资料应体床试验数：预期适群体进行酶速率研究试验基型预期适群良心血事件关联试验基型导抗血板治疗试验等述资料必须包括基中国群充分床数新位点氯吡格雷药指导结已获行业认应时提交证明获行业认支持资料
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（原国家食品药品监督理总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（原国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）简称44号公告求
（二）原材料研究资料
CYP2C19基态性检测试剂原材料研究资料包括反应成分质控品企业参考品研究资料
1 类产品反应成分般包括基组核酸提取纯化试剂检测需引物探针酶dNTP反应缓液等申请应提交相关原材料选择制备质量标准研究资料申请制应提交详细工艺稳定性研究资料外购应提交供应商筛选资料供应商提供原材料质量检定报告
11 核酸提取纯化试剂（）组成原理介绍相关验证资料
12 引物探针
文述CYP2C19基态性检测般针等位基CYP2C19*1CYP2C19*2CYP2C19*3CYP2C19*17申请应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况建议设计两套套引物探针供筛选针测位点检测灵敏度特异性等进行评价选择佳设计提交详细筛选研究数时应针引物探针核酸序列检测靶序列进行源性源序列应着重评价否会交叉反应
申请应针选定引物探针原材料进行质量评价般包括：分子量纯度（HPLC等）浓度探针荧光标记基团激发波长发射波长功性试验等评价结果建立合理质量标准
13酶
CYP2C19基态性检测试剂涉酶包括DNA聚合酶尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）申请应针种酶活性进行验证提交功性试验资料确定酶质量标准
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性UDGUNG应具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性
14脱氧三磷酸核苷（dNTP）
包括dATPdCTPdGTPdTTPdUTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料功性试验资料确定质量标准
2质控品
试剂盒质控体系通设置种试剂盒质控品实现
CYP2C19基态性检测试剂质控品分设置野生型杂合型纯合突变型DNA样品（少包含常见态性位点）时设置含测靶序列空白质控品交叉污染质控直接采常见态性位点杂合型样品空白质控品进行质量控制
类产品般情况反应体系中野生型序列突变型序列均阳性反应抑制导致假阴性结果进行质量控制试剂盒中外设置标否应外设置标
质控体系应够检测全程进行效质量控制包括试剂仪器性扩增反应抑制物（抑制）交叉污染等素造成假阴性假阳性结果质控品采质粒床样核酸提取液等空白质控品应参样核酸行提取申请应针质控品原料选择制备定值程等提供详细研究数质控品检测结果做出明确范围求
3企业参考品
企业参考品包括阳性参考品阴性参考品检测限参考品精密度参考品等申请应提交关企业参考品原料选择制备方法基序列确认检验标准研究资料包括参考方法等
31阳性参考品：采床样核酸提取液样类型测样致应少包含野生型态性位点杂合型样时量纳入纯合突变型样某稀基型需时采细胞系代
32阴性参考品：应考虑检测特异性评价纳入源序列交叉反应样干扰样等
33检测限参考品选择低检测限浓度（例：95检出率水）接低检测限浓度（例100检出率水）床样核酸提取液少包含态性位点杂合型样
34精密度参考品应少包括态性位点低浓度杂合突变型床样核酸提取液
CYP2C19基态性检测试剂已国家参考品企业参考品求应低国家参考品求
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺研究资料包括工作液配制（引物探针浓度酶浓度dNTP浓度缓液离子浓度等）分装冻干（）荧光标记等工艺程描述确定生产程应关键参数进行效控制采流程图方式描述生产工艺标明关键工艺质控步骤详细说明该步骤质控方法质控标准
反应体系研究指佳反应条件选择确定程包括样采集预处理样保存样量试剂量核酸提取纯化步骤（）PCR反应条件阈值循环数（Ct值）等确定
适机型反应条件果差异应分详述
（四）分析性评估资料
申请应针述项分析性提交详细评估资料包括试验方法试验样（类型源数量处理方法基型浓度确认）试验接受标准统计方法试验数结等关背景信息应资料中体现包括实验点适仪器试剂规格批号等分析性评估实验方法参考相关国国外关体外诊断产品性评估指导原进行
项性评估应量采适样类型致床样某稀基型采细胞系等
产品适样类型止种申请应针样类型分完成性评估
1 核酸提取纯化性（）
进行靶核酸检测前应适核酸提取纯化步骤该步骤量分离出目核酸外应相应纯化作PCR抑制物检测试剂否含核酸提取纯化组分企业应结合检测试剂特性配合核酸提取纯化方法提取效率提取核酸纯度等做充分验证评价该方法否满足CYP2C19基态性检测试剂求提供详细评价资料
2 检测准确性
建议采干份床样验证CYP2C19基态性试剂检测准确性样类型产品适范围致样应涵盖野生型态性位点杂合突变纯合突变情况包含基组DNA浓度某基型样较稀情况采细胞系代
3 检测限报告范围
CYP2C19基态性检测试剂低检测限定义：满足定检测准确性精密度条件够检出目标基低基组DNA浓度检测限评价建议采床样细胞系少包含态性位点杂合突变型
采梯度浓度基组DNA样进行次重复检测确定适检出率水（：95）低基组DNA浓度低检测限系列稀释度应够覆盖部分检出概率区间（0～100）根浓度梯度检测结果直接判定通概率计算适方法进行测算
时申请应评价CYP2C19基态性试剂准确检出基组DNA浓度限适检出率水高基组DNA浓度
4 分析特异性
41 应针源性序列（例CYP2C19突变序列CYP2C9基序列等）进行交叉反应验证说明交叉反应样制备方法核酸序列确认方法提交详细验证资料
42 应针源外源性干扰物进行干扰试验研究干扰物选择样类型关例：全血样源干扰物涉血脂胆红素血红蛋白白蛋白等外源干扰物包括血液样采集抗凝剂常药物等口腔拭子样干扰物需考虑全血口腔定植菌口腔接触抗菌漱口液牙膏食物药物烟草等
干扰试验通床样中工添加干扰物质方式评价干扰物质目标基检测影响直接采集暴露干扰素受试者样进行干扰试验评价建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价干扰应确定产生干扰高浓度
5 精密度
精密度评价应采床样进行试验试验操作完全说明书执行包含核酸提取纯化等样处理步骤样应少涵盖态性位点杂合突变型
精密度评价需满足求：
51影响检测精密度素进行验证检测试剂（包括核酸提取纯化组分）身外包括分析仪操作者点时间检测轮次试剂批次等
52设定合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间重复性进行评价
53精密度评价床样应根报告范围基组DNA浓度少设置低浓度中高浓度水
54精密度指标设置检测成功率等申请应精密度指标评价标准做出合理求
精密度评价资料应详述试验设计试验数统计分析试验结果列出关试剂仪器实验室员样相关信息
（五）阳性判断值确定资料
类试剂阳性判断值够获理想检测准确性界值（Cutoff）建议纳入定数量床样涵盖野生型态性位点突变型采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行研究相关资料中应详述试验方案样源样量样入组标准试验结果等
应针样类型（）分进行阳性判断值研究明确否差异
果试剂判读存灰区应解释说明灰区范围确定方法
某检测方法学阳性判断值研究适申请应说明理
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料包括申报产品稳定性研究适样稳定性研究两部分前者包括申报产品实时稳定性开瓶稳定性复溶稳定性运输稳定性冻融次数限制研究等者指适样保存条件保存时间等方面研究果包括种样类型需分完成相关研究
申报产品实时稳定性研究中应采少三批样品实际储存条件保存成品效期选取时间点进行产品性评价确定产品保存条件效期
样稳定性研究中核酸提取液定立进行检测需核酸提取液保存条件稳定性进行研究
申请应提交关稳定性研究方案确定具体试验方法详细研究数结
（七）床试验
应满足体外诊断试剂床试验技术指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求面仅说明类试剂床试验中应关注重点问题
1 床试验机构
申请应选定少3家（含3家）床试验机构相关规定开展床试验申请应根产品特点预期途综合区种流行病学背景等素选择床试验机构
2 床试验群
正服服氯吡格雷进行抗血板治疗冠心病患者急性冠脉综合征（ACS）进行皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者（ACSPCI患者）PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者缺血高风险出血高风险患者等中PCI术血栓高危患者缺血高风险出血高风险患者群限定参考相关指南
3 床样
应床原始样静脉抗凝全血等应直接采提取基组DNA进行试验床样采集处理保存提取等应时满足申报产品说明书试剂说明书（适）相关求
4 床试验样量
申报产品时适静脉全血口腔拭子等基质样类型种样类型例数应分满足法规求
5 床检测准确性验证
51 试剂
511已类产品市申报产品
已批准CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）态性位点选择已市类试剂作试剂
512 类产品市申报产品
新态性位点选择基测序作方法
513基测序
应提交床试验机构测序机构签章委托测序协议应选测序方法做详细介绍应提供关测序详细试验资料该部分资料需床试验机构签章
5131测序原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
5132测序方法引物信息核酸序列分子量纯度功性实验等资料引物设计应涵盖申报产品扩增测靶标
5133 测序方法性验证尤低检测限确认建议选测序方法申报产品性进行分析
5134 测序方法应建立合理阳性阴性质控床样检测结果进行质量控制
5135 提交代表性样测序图谱结果分析资料
6 氯吡格雷指导药床效性验证
61 已类产品市申报产品
已批准CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）态性位点需进行该部分验证
62 类产品市申报产品
621新态性位点氯吡格雷药指导已获行业认（包括：CPIC国相关指南专家识相关药物说明书床应等认）充分中国群体床数需进行该部分验证
622新态性位点氯吡格雷药指导未获行业认应提交基中国群充分体床数包括限：
6221新态性位点等位基编码CYP2C19酶氯吡格雷代谢动力学验证资料
6222血板功检测较基型患者血板功差异
6223基型良心血事件关联性体床试验
6224基型指导氯吡格雷药效性证
623 需强调62述申报产品（包括621622）申请应床试验资料部分提交声称新态性位点已获行业认相关资料基中国群充分体床数等证明申报产品指导氯吡格雷药
7 床试验方法数统计分析
71应床试验方案报告中描述申报产品试剂方法试验方法
72床试验原始数应列表方式表示包括申报产品结果试剂方法结果床诊断年龄性否进行PCI等
73应总结野生型态性位点杂合型纯合突变型例数交叉四格表分总结两种试剂态性位点定性检测结果分计算态性位点基型阳性符合率阴性符合率总体符合率95置信区间定性结果分进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂检测结果致性
74 结果差异样验证
数收集程中两种试剂检测结果致样应采合理方法进行复核差异原进行分析需复核应说明理
8 床试验方案
床试验机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案意改动整试验程应床试验机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程
试验方案应确定严格入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原试验操作程结果判定时应采盲法保证试验结果客观性床试验机构选试剂方法应保持致便进行合理统计学分析外申报产品样类型应超越试剂方法样类型求
9 床试验报告
应试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必数统计分析方法
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法44号公告医疗器械产品技术求编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关求该类产品作三类体外诊断试剂应原材料生产工艺半成品求等容作附录附技术求正文
果申报产品已相应国家行业标准发布企业标准求低述标准求
（九）产品检验报告
根办法求第三类体外诊断试剂申请注册时应提交连续三生产批次样品检验报告国家标准品参考品检验项目应产品检验时采
（十）产品说明书
产品说明书应满足体外诊断试剂说明书编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致面CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂说明书重点容进行阐述
1预期途 应少包括部分容：
11产品体外定性检测体xx样中yy基态性检测态性类型包括aa产品氯吡格雷药指导产品预测患者氯吡格雷应答情况仅辅助医生确定氯吡格雷治疗策略产品检测结果仅供床参考应作患者否药唯床医生应结合患者病情疗效实验室检测指标等产品检测结果进行综合判断
12介绍测靶标（基态性位点）明确态性杂合型纯合型床发生频率明确进行氯吡格雷药指导适群明确基型氯吡格雷关系
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量例浓度等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分企业应列出相关试剂耗材名称货号相关信息
23果试剂盒中包含核酸提取纯化试剂组分应注明验证配合商品化核酸提取纯化试剂盒生产企业产品名称产品货号医疗器械备案号（）等详细信息
3检验原理
31试剂盒测靶标进行详细描述（基位置态性位点相关特征等）试剂盒探针引物态性判定终点等进行详细介绍样反应组合质控品设置荧光信号检测原理等进行介绍
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明反应体系中添加相关防污染组分（UNG酶）应作机理进行适介绍
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性等应明确具体储存条件效期等信息
5样求
样采集处理运送保存：明确样采集核酸提取纯化前处理（离心洗涤等）保存条件期限（短期长期）运送条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数限制等
6适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71实验条件：实验室分区实验环境温度湿度空调气流方控制等注意事项
72试剂配制方法注意事项
73详述核酸提取纯化条件步骤注意事项（适）核酸提取纯化环节进行合理质量控制明确提取核酸浓度纯度等质量求
74扩增反应前准备：加样体积序等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相应动化检测程序相关注意事项
76仪器设置（适）：特殊参数探针荧光素标记情况测态性质控品荧光通道选择等
8检验结果解释
结合质控品样检测结果态性类型氯吡格雷表型间关系列表形式详述出现结果相应解释存检测灰区应详述灰区结果处理方式
9检验方法局限性
91申报产品仅述态性类型xx进行验证
92关假阴性结果性分析
921合理样采集运送处理核酸度降解均导致假阴性结果
922未验证干扰PCR抑制子等会导致假阴性结果（）
10产品性指标简述性指标：
101低检测限：简单介绍低检测限确定方法明确低检测限结果
102阳性阴性参考品符合率
103精密度：简单介绍精密度确定方法明确精密度结果
104分析特异性
1041交叉反应验证：源性序列等交叉反应验证
1042干扰物质验证：样中常见干扰物质检测结果影响
105试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
11注意事项应少包括容：
111该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
112床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
三起草单位
国家药品监督理局医疗器械技术审评中心
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CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
药物代谢酶药物体代谢程中起着重作活性强弱药物代谢速率重影响素直接决定药物作强度持久性体药物代谢酶细胞色素P450（CYP450）工酶N乙酰转移酶（NAT）等CYP2C19酶种重CYP450工酶床CYP2C19酶代谢酶药物包括抗血板药物（：氯吡格雷）质子泵抑制剂等氯吡格雷种抗血板药物广泛：急性冠脉综合征（ACS）患者包括非ST段抬高性ACS（稳定性心绞痛UA非Q波心肌梗死）ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者中非ST段抬高性ACS包括皮冠状动脉介入术置入支架患者外周动脉性疾病患者期心肌梗死期缺血性卒中患者氯吡格雷作种前体药物身药理活性CYP2C19酶代谢活化产生活性代谢产物者血板表面P2Y12受体逆结合抑制血板聚集干扰ADP介导血板活化发挥抗血板效应
CYP2C19酶编码基CYP2C19基位类10号染色体CYP2C19基含42等位基CYP2C19*1野生型等位基编码酶具正常活性CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）编码CYP2C19酶活性降低中国群中存2种等位基中国群发生频率分231～352～7CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）编码CYP2C19酶活性增强中国群发生频率约05～4CYP2C19*2*3*17外影响CYP2C19酶活性CYP2C19等位基包括CYP2C19*4～CYP2C19*8等等位基中国群发生频率低功床意义进步研究
CYP2C19基遗传变异导致CYP2C19酶活性体差异群出现超快代谢者（UM）快代谢者（EM）中间代谢者（IM）慢代谢者（PM）4种表型CYP2C19 UM患者应常规剂量氯吡格雷体生成活性代谢产物增血板抑制作升高抗血板功增强出血风险增CYP2C19 PM患者应常规剂量氯吡格雷体生成活性代谢产物减少血板抑制作降抗血板功减弱血栓风险增UM体基型CYP2C19*17*17纯合型CYP2C19*1*17杂合型EM体基型CYP2C19*1*1纯合型IM体基型CYP2C19*1*2CYP2C19*1*3CYP2C19*2*17CYP2C19*3*17杂合型PM体基型CYP2C19*2*3CYP2C19*2*2CYP2C19*3*3杂合型纯合型
通CYP2C19药物代谢酶基态性检测服药群分述4类氯吡格雷代谢患者氯吡格雷药指导美国FDA氯吡格雷药物说明书中建议：CYP2C19 PM患者考虑血板P2Y12抑制剂遗传药理学知识库床遗传药理学实施联盟（CPIC）发布CYP2C19基型氯吡格雷药指导文件建议：CYP2C19 PM患者IM患者选抗血板药物（：普拉格雷格瑞洛）进行治疗2015年原国家卫生计生委发布药物代谢酶药物作靶点基检测技术指南（试行）建议：CYP2C19 PM患者抗血板治疗增加氯吡格雷剂量选CYP2C19代谢抗血板药物（格瑞洛）等
然氯吡格雷服药群需进行CYP2C19基型检测国外尚统意见2013年发布抗血板治疗中国专家识建议：CYP2C19基型检测床应价值限推荐常规进行CPIC发布CYP2C19基型氯吡格雷药指导文件中建议：基CYP2C19基型氯吡格雷抗血板治疗进行皮冠状动脉介入治疗急性冠脉综合征患者（简称ACSPCI患者）尚证表明CYP2C19基型指导氯吡格雷患者中抗血板治疗2014年发布抗血板药物治疗反应样性床检测处理中国专家建议建议：推荐常规进行CYP2C19基型检测仅PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者推荐进行血板功检测CYP2C19基型检测2017年发布基态性抗栓药物床应专家建议建议：CYP2C19基型检测缺血高风险出血高风险患者选P2Y12抑制剂参考价值综合考虑述意见结合中国实际情况建议指导原预期适群限定：
正服服氯吡格雷进行抗血板治疗冠心病患者急性冠脉综合征（ACS）进行皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者（ACSPCI患者）PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者缺血高风险出血高风险患者等中PCI术血栓高危患者缺血高风险出血高风险患者群限定参考相关指南
指导原述CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂指：利分子生物学检测技术聚合酶链反应（PCR）等CYP2C19基特定序列检测靶标接受氯吡格雷治疗患者外周静脉全血口腔拭子等样基组DNA中CYP2C19基态性进行体外定性检测试剂氯吡格雷药指导
指导原技术求基荧光探针PCR方法建立分子生物学检测技术部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性
指导原仅氯吡格雷药指导CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂相关求进行说明CYP2C19参种药物代谢药物药指导CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学检验原理低检测限测靶标（基态性位点）等方面详细说明申报产品目前市场已获批准类产品间区外应说明测靶标纯合型杂合型中国群发生频率
测靶标新态性位点申请应提交支持资料证明：1携带新位点等位基编码CYP2C19酶氯吡格雷具预期代谢活性2携带新位点等位基患者血板功具预期差异3接受氯吡格雷治疗携带新位点等位基患者表现出预期良心血事件4根基型调整抗血板治疗方案携带新位点等位基患者预获改善述资料应体床试验数：预期适群体进行酶速率研究试验基型预期适群良心血事件关联试验基型导抗血板治疗试验等述资料必须包括基中国群充分床数新位点氯吡格雷药指导结已获行业认应时提交证明获行业认支持资料
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（原国家食品药品监督理总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（原国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）简称44号公告求
（二）原材料研究资料
CYP2C19基态性检测试剂原材料研究资料包括反应成分质控品企业参考品研究资料
1 类产品反应成分般包括基组核酸提取纯化试剂检测需引物探针酶dNTP反应缓液等申请应提交相关原材料选择制备质量标准研究资料申请制应提交详细工艺稳定性研究资料外购应提交供应商筛选资料供应商提供原材料质量检定报告
11 核酸提取纯化试剂（）组成原理介绍相关验证资料
12 引物探针
文述CYP2C19基态性检测般针等位基CYP2C19*1CYP2C19*2CYP2C19*3CYP2C19*17申请应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况建议设计两套套引物探针供筛选针测位点检测灵敏度特异性等进行评价选择佳设计提交详细筛选研究数时应针引物探针核酸序列检测靶序列进行源性源序列应着重评价否会交叉反应
申请应针选定引物探针原材料进行质量评价般包括：分子量纯度（HPLC等）浓度探针荧光标记基团激发波长发射波长功性试验等评价结果建立合理质量标准
13酶
CYP2C19基态性检测试剂涉酶包括DNA聚合酶尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）申请应针种酶活性进行验证提交功性试验资料确定酶质量标准
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性UDGUNG应具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性
14脱氧三磷酸核苷（dNTP）
包括dATPdCTPdGTPdTTPdUTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料功性试验资料确定质量标准
2质控品
试剂盒质控体系通设置种试剂盒质控品实现
CYP2C19基态性检测试剂质控品分设置野生型杂合型纯合突变型DNA样品（少包含常见态性位点）时设置含测靶序列空白质控品交叉污染质控直接采常见态性位点杂合型样品空白质控品进行质量控制
类产品般情况反应体系中野生型序列突变型序列均阳性反应抑制导致假阴性结果进行质量控制试剂盒中外设置标否应外设置标
质控体系应够检测全程进行效质量控制包括试剂仪器性扩增反应抑制物（抑制）交叉污染等素造成假阴性假阳性结果质控品采质粒床样核酸提取液等空白质控品应参样核酸行提取申请应针质控品原料选择制备定值程等提供详细研究数质控品检测结果做出明确范围求
3企业参考品
企业参考品包括阳性参考品阴性参考品检测限参考品精密度参考品等申请应提交关企业参考品原料选择制备方法基序列确认检验标准研究资料包括参考方法等
31阳性参考品：采床样核酸提取液样类型测样致应少包含野生型态性位点杂合型样时量纳入纯合突变型样某稀基型需时采细胞系代
32阴性参考品：应考虑检测特异性评价纳入源序列交叉反应样干扰样等
33检测限参考品选择低检测限浓度（例：95检出率水）接低检测限浓度（例100检出率水）床样核酸提取液少包含态性位点杂合型样
34精密度参考品应少包括态性位点低浓度杂合突变型床样核酸提取液
CYP2C19基态性检测试剂已国家参考品企业参考品求应低国家参考品求
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺研究资料包括工作液配制（引物探针浓度酶浓度dNTP浓度缓液离子浓度等）分装冻干（）荧光标记等工艺程描述确定生产程应关键参数进行效控制采流程图方式描述生产工艺标明关键工艺质控步骤详细说明该步骤质控方法质控标准
反应体系研究指佳反应条件选择确定程包括样采集预处理样保存样量试剂量核酸提取纯化步骤（）PCR反应条件阈值循环数（Ct值）等确定
适机型反应条件果差异应分详述
（四）分析性评估资料
申请应针述项分析性提交详细评估资料包括试验方法试验样（类型源数量处理方法基型浓度确认）试验接受标准统计方法试验数结等关背景信息应资料中体现包括实验点适仪器试剂规格批号等分析性评估实验方法参考相关国国外关体外诊断产品性评估指导原进行
项性评估应量采适样类型致床样某稀基型采细胞系等
产品适样类型止种申请应针样类型分完成性评估
1 核酸提取纯化性（）
进行靶核酸检测前应适核酸提取纯化步骤该步骤量分离出目核酸外应相应纯化作PCR抑制物检测试剂否含核酸提取纯化组分企业应结合检测试剂特性配合核酸提取纯化方法提取效率提取核酸纯度等做充分验证评价该方法否满足CYP2C19基态性检测试剂求提供详细评价资料
2 检测准确性
建议采干份床样验证CYP2C19基态性试剂检测准确性样类型产品适范围致样应涵盖野生型态性位点杂合突变纯合突变情况包含基组DNA浓度某基型样较稀情况采细胞系代
3 检测限报告范围
CYP2C19基态性检测试剂低检测限定义：满足定检测准确性精密度条件够检出目标基低基组DNA浓度检测限评价建议采床样细胞系少包含态性位点杂合突变型
采梯度浓度基组DNA样进行次重复检测确定适检出率水（：95）低基组DNA浓度低检测限系列稀释度应够覆盖部分检出概率区间（0～100）根浓度梯度检测结果直接判定通概率计算适方法进行测算
时申请应评价CYP2C19基态性试剂准确检出基组DNA浓度限适检出率水高基组DNA浓度
4 分析特异性
41 应针源性序列（例CYP2C19突变序列CYP2C9基序列等）进行交叉反应验证说明交叉反应样制备方法核酸序列确认方法提交详细验证资料
42 应针源外源性干扰物进行干扰试验研究干扰物选择样类型关例：全血样源干扰物涉血脂胆红素血红蛋白白蛋白等外源干扰物包括血液样采集抗凝剂常药物等口腔拭子样干扰物需考虑全血口腔定植菌口腔接触抗菌漱口液牙膏食物药物烟草等
干扰试验通床样中工添加干扰物质方式评价干扰物质目标基检测影响直接采集暴露干扰素受试者样进行干扰试验评价建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价干扰应确定产生干扰高浓度
5 精密度
精密度评价应采床样进行试验试验操作完全说明书执行包含核酸提取纯化等样处理步骤样应少涵盖态性位点杂合突变型
精密度评价需满足求：
51影响检测精密度素进行验证检测试剂（包括核酸提取纯化组分）身外包括分析仪操作者点时间检测轮次试剂批次等
52设定合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间重复性进行评价
53精密度评价床样应根报告范围基组DNA浓度少设置低浓度中高浓度水
54精密度指标设置检测成功率等申请应精密度指标评价标准做出合理求
精密度评价资料应详述试验设计试验数统计分析试验结果列出关试剂仪器实验室员样相关信息
（五）阳性判断值确定资料
类试剂阳性判断值够获理想检测准确性界值（Cutoff）建议纳入定数量床样涵盖野生型态性位点突变型采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行研究相关资料中应详述试验方案样源样量样入组标准试验结果等
应针样类型（）分进行阳性判断值研究明确否差异
果试剂判读存灰区应解释说明灰区范围确定方法
某检测方法学阳性判断值研究适申请应说明理
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料包括申报产品稳定性研究适样稳定性研究两部分前者包括申报产品实时稳定性开瓶稳定性复溶稳定性运输稳定性冻融次数限制研究等者指适样保存条件保存时间等方面研究果包括种样类型需分完成相关研究
申报产品实时稳定性研究中应采少三批样品实际储存条件保存成品效期选取时间点进行产品性评价确定产品保存条件效期
样稳定性研究中核酸提取液定立进行检测需核酸提取液保存条件稳定性进行研究
申请应提交关稳定性研究方案确定具体试验方法详细研究数结
（七）床试验
应满足体外诊断试剂床试验技术指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求面仅说明类试剂床试验中应关注重点问题
1 床试验机构
申请应选定少3家（含3家）床试验机构相关规定开展床试验申请应根产品特点预期途综合区种流行病学背景等素选择床试验机构
2 床试验群
正服服氯吡格雷进行抗血板治疗冠心病患者急性冠脉综合征（ACS）进行皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者（ACSPCI患者）PCI术血栓高危计划调整P2Y12抑制剂治疗方案患者缺血高风险出血高风险患者等中PCI术血栓高危患者缺血高风险出血高风险患者群限定参考相关指南
3 床样
应床原始样静脉抗凝全血等应直接采提取基组DNA进行试验床样采集处理保存提取等应时满足申报产品说明书试剂说明书（适）相关求
4 床试验样量
申报产品时适静脉全血口腔拭子等基质样类型种样类型例数应分满足法规求
5 床检测准确性验证
51 试剂
511已类产品市申报产品
已批准CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）态性位点选择已市类试剂作试剂
512 类产品市申报产品
新态性位点选择基测序作方法
513基测序
应提交床试验机构测序机构签章委托测序协议应选测序方法做详细介绍应提供关测序详细试验资料该部分资料需床试验机构签章
5131测序原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
5132测序方法引物信息核酸序列分子量纯度功性实验等资料引物设计应涵盖申报产品扩增测靶标
5133 测序方法性验证尤低检测限确认建议选测序方法申报产品性进行分析
5134 测序方法应建立合理阳性阴性质控床样检测结果进行质量控制
5135 提交代表性样测序图谱结果分析资料
6 氯吡格雷指导药床效性验证
61 已类产品市申报产品
已批准CYP2C19*2（rs4244285c681G>A）CYP2C19*3（rs4986893c636G>A）CYP2C19*17（rs12248560c806C>T）态性位点需进行该部分验证
62 类产品市申报产品
621新态性位点氯吡格雷药指导已获行业认（包括：CPIC国相关指南专家识相关药物说明书床应等认）充分中国群体床数需进行该部分验证
622新态性位点氯吡格雷药指导未获行业认应提交基中国群充分体床数包括限：
6221新态性位点等位基编码CYP2C19酶氯吡格雷代谢动力学验证资料
6222血板功检测较基型患者血板功差异
6223基型良心血事件关联性体床试验
6224基型指导氯吡格雷药效性证
623 需强调62述申报产品（包括621622）申请应床试验资料部分提交声称新态性位点已获行业认相关资料基中国群充分体床数等证明申报产品指导氯吡格雷药
7 床试验方法数统计分析
71应床试验方案报告中描述申报产品试剂方法试验方法
72床试验原始数应列表方式表示包括申报产品结果试剂方法结果床诊断年龄性否进行PCI等
73应总结野生型态性位点杂合型纯合突变型例数交叉四格表分总结两种试剂态性位点定性检测结果分计算态性位点基型阳性符合率阴性符合率总体符合率95置信区间定性结果分进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂检测结果致性
74 结果差异样验证
数收集程中两种试剂检测结果致样应采合理方法进行复核差异原进行分析需复核应说明理
8 床试验方案
床试验机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案意改动整试验程应床试验机构实验室实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程
试验方案应确定严格入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原试验操作程结果判定时应采盲法保证试验结果客观性床试验机构选试剂方法应保持致便进行合理统计学分析外申报产品样类型应超越试剂方法样类型求
9 床试验报告
应试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必数统计分析方法
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法44号公告医疗器械产品技术求编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关求该类产品作三类体外诊断试剂应原材料生产工艺半成品求等容作附录附技术求正文
果申报产品已相应国家行业标准发布企业标准求低述标准求
（九）产品检验报告
根办法求第三类体外诊断试剂申请注册时应提交连续三生产批次样品检验报告国家标准品参考品检验项目应产品检验时采
（十）产品说明书
产品说明书应满足体外诊断试剂说明书编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致面CYP2C19药物代谢酶基态性检测试剂说明书重点容进行阐述
1预期途 应少包括部分容：
11产品体外定性检测体xx样中yy基态性检测态性类型包括aa产品氯吡格雷药指导产品预测患者氯吡格雷应答情况仅辅助医生确定氯吡格雷治疗策略产品检测结果仅供床参考应作患者否药唯床医生应结合患者病情疗效实验室检测指标等产品检测结果进行综合判断
12介绍测靶标（基态性位点）明确态性杂合型纯合型床发生频率明确进行氯吡格雷药指导适群明确基型氯吡格雷关系
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量例浓度等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分企业应列出相关试剂耗材名称货号相关信息
23果试剂盒中包含核酸提取纯化试剂组分应注明验证配合商品化核酸提取纯化试剂盒生产企业产品名称产品货号医疗器械备案号（）等详细信息
3检验原理
31试剂盒测靶标进行详细描述（基位置态性位点相关特征等）试剂盒探针引物态性判定终点等进行详细介绍样反应组合质控品设置荧光信号检测原理等进行介绍
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明反应体系中添加相关防污染组分（UNG酶）应作机理进行适介绍
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性等应明确具体储存条件效期等信息
5样求
样采集处理运送保存：明确样采集核酸提取纯化前处理（离心洗涤等）保存条件期限（短期长期）运送条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数限制等
6适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71实验条件：实验室分区实验环境温度湿度空调气流方控制等注意事项
72试剂配制方法注意事项
73详述核酸提取纯化条件步骤注意事项（适）核酸提取纯化环节进行合理质量控制明确提取核酸浓度纯度等质量求
74扩增反应前准备：加样体积序等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相应动化检测程序相关注意事项
76仪器设置（适）：特殊参数探针荧光素标记情况测态性质控品荧光通道选择等
8检验结果解释
结合质控品样检测结果态性类型氯吡格雷表型间关系列表形式详述出现结果相应解释存检测灰区应详述灰区结果处理方式
9检验方法局限性
91申报产品仅述态性类型xx进行验证
92关假阴性结果性分析
921合理样采集运送处理核酸度降解均导致假阴性结果
922未验证干扰PCR抑制子等会导致假阴性结果（）
10产品性指标简述性指标：
101低检测限：简单介绍低检测限确定方法明确低检测限结果
102阳性阴性参考品符合率
103精密度：简单介绍精密度确定方法明确精密度结果
104分析特异性
1041交叉反应验证：源性序列等交叉反应验证
1042干扰物质验证：样中常见干扰物质检测结果影响
105试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
11注意事项应少包括容：
111该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
112床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
三起草单位
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