动物细胞工程
动物细胞工程常技术：动物细胞培养
细胞核移植
动物细胞融合
单克隆抗体制备
中动物细胞培养动物细胞工程基础
动物细胞培养细胞核移植动物细胞培养单克隆抗体制备基础
动物细胞培养
1 概念：动物机体中取出相关组织分散成单细胞然放适宜培养基中细胞生长增殖
2 原理：细胞增殖
3 动物细胞培养程
动物组织块 剪碎组织 胰蛋白酶处理 分散成单细胞 制成细胞悬液
原代培养 原代培养
4
细胞贴壁：悬液中分散细胞快贴附瓶壁（单层）
求：培养瓶（皿）表面光滑毒易贴附
接触抑制：细胞贴壁生长程中着丝分裂数量断增贴壁细胞分裂生长表面相互接触时细胞会停止分裂增殖种现象称细胞接触抑制
原代培养：动物组织消化初次培养称原代培养
特点：10代保持正常二倍体核型
目前冷冻保存正常细胞通常10代保持细胞正常二倍体核型
传代培养：原代培养接触抑制时胰蛋白酶处理分瓶培养称传代培养
细胞株：1050代遗传物质没发生改变
细胞系：50代遗传物质发生改变
5 细胞培养条件
（1） 菌毒
菌：添加抗生素
毒定期更换培养便清代谢产物防止细胞代谢产物积累细胞身造成危害
（2） 营养
糖促生长子机盐氨基酸血清血浆微量元素
加入血清血浆目：血清血浆补充培养基中缺乏物质
（3） 温度pH
温度：365+05 pH：7274
（4） 气体环境
95空气加5CO2
O2细胞代谢必须
CO2作维持培养液pH
6 动物细胞培养植物组织培养培养基相特点：
动物细胞培养：液体培养基含血清血浆
植物细胞培养：固体培养基含植物激素
动物细胞核移植技术克隆动物
1概念：动物细胞细胞核移入已掉细胞核卵母细胞中重组发育成新胚胎新胚胎终发育成新体
核移植方法动物称克隆动物
原理：动物细胞核具全性
2核移植分类
胚胎细胞核移植：细胞分化程度低恢复全性容易
体细胞核移植：细胞分化程度高恢复全性容易
3体细胞核移植程
（1）供体细胞：10代细胞：
原：10代细胞般保持正常二倍体核型
（2）受体细胞：减数第二次分裂中期核卵母细胞
卵母细胞作受体细胞原：
体积易操作 含激发细胞核全性物质
核原：代性状供体细胞核决定
核方法：显微操作
（3）激活细胞方法：电脉钙离子载体乙醇蛋白酶合成抑制剂
（4）获克隆动物供核动物性状完全相原：
发生基突变
性状基环境作结果
克隆动物部分DNA供体细胞细胞核核外线粒体中DNA受体细胞
动物细胞融合
1动物细胞融合：两细胞结合形成细胞程称细胞杂交
杂交细胞：融合形成具原两细胞遗传信息单核细胞称杂交细胞
动物细胞融合原理：细胞膜流动性
2动物细胞融合诱导方法
（1）物理法：离心振动电激
（2）化学法：聚乙二醇(PEG)
（3）生物法：灭活病毒(动物细胞融合特方法)
3注意
（1）细胞融合程包括细胞膜融合细胞质融合细胞核融合
（2）细胞膜融合中体现出细胞膜具流动性
（3）中细胞膜融合细胞融合先导没细胞膜融合会细胞质细胞融合
(4)动物细胞融合实质结束标志细胞核融合
4优点应
(1)优点突破性杂交方法局限远缘杂交成
应
(1)细胞融合技术研究细胞遗传细胞免疫肿瘤生物新品种培育等重手段
利细胞融合技术发展起杂交瘤技术制造单克隆抗体开辟新途径
单克隆抗体
1传统抗体获：
(1)方法：
①动物体反复注射某种抗原动物产生抗体
②动物血清中分离需抗体
(2)缺陷：产量低纯度低特异性差
2较制备单克隆抗体中种细胞：
B淋巴细胞：产生单抗体限增殖
骨髓瘤细胞：限增殖产生抗体
杂交瘤细胞：产生专抗体限增殖
3制备单克隆抗体需技术手段：动物细胞融合动物细胞培养
原理：细胞膜流动性细胞增殖
4单克隆抗体制备
（1）免疫处理：提供B淋巴细胞动物必须先免疫处理否会产生特异性抗体
（2）诱导融合方法：
物理法：离心振动离心
化学法：聚乙二醇(PEG)
生物法：灭活病毒(动物细胞融合特方法)
5仅考虑两两融合情况形成杂交细胞三种
B淋巴细胞B淋巴细胞融合细胞
骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合细胞
杂交瘤细胞
6杂交瘤细胞特点：迅速量增殖产生某种特异性抗体
7两次筛选目：第次筛选目：筛选出杂交瘤细胞
第二次筛选目：筛选出产生特定抗体杂交瘤细胞
8获取单克隆抗体场
(1)培养基中进行杂交瘤细胞培养培养液中提取
(2)鼠动物腹腔中进行培养腹水中提取
腹腔培养：易控制培养条件成低规模产量低
体外培养：规模产量高易控制培养条件成相较高
9杂交瘤细胞特点：迅速量繁殖产生专抗体
单克隆抗体优点：特异性强灵敏性高量制备
10单克隆抗体应：
(1)作诊断试剂
(2)治疗疾病运载药物
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动物细胞工程常技术：动物细胞培养
细胞核移植
动物细胞融合
单克隆抗体制备
中动物细胞培养动物细胞工程基础
动物细胞培养细胞核移植动物细胞培养单克隆抗体制备基础
动物细胞培养
1 概念：动物机体中取出相关组织分散成单细胞然放适宜培养基中细胞生长增殖
2 原理：细胞增殖
3 动物细胞培养程
动物组织块 剪碎组织 胰蛋白酶处理 分散成单细胞 制成细胞悬液
原代培养 原代培养
4
细胞贴壁：悬液中分散细胞快贴附瓶壁（单层）
求：培养瓶（皿）表面光滑毒易贴附
接触抑制：细胞贴壁生长程中着丝分裂数量断增贴壁细胞分裂生长表面相互接触时细胞会停止分裂增殖种现象称细胞接触抑制
原代培养：动物组织消化初次培养称原代培养
特点：10代保持正常二倍体核型
目前冷冻保存正常细胞通常10代保持细胞正常二倍体核型
传代培养：原代培养接触抑制时胰蛋白酶处理分瓶培养称传代培养
细胞株：1050代遗传物质没发生改变
细胞系：50代遗传物质发生改变
5 细胞培养条件
（1） 菌毒
菌：添加抗生素
毒定期更换培养便清代谢产物防止细胞代谢产物积累细胞身造成危害
（2） 营养
糖促生长子机盐氨基酸血清血浆微量元素
加入血清血浆目：血清血浆补充培养基中缺乏物质
（3） 温度pH
温度：365+05 pH：7274
（4） 气体环境
95空气加5CO2
O2细胞代谢必须
CO2作维持培养液pH
6 动物细胞培养植物组织培养培养基相特点：
动物细胞培养：液体培养基含血清血浆
植物细胞培养：固体培养基含植物激素
动物细胞核移植技术克隆动物
1概念：动物细胞细胞核移入已掉细胞核卵母细胞中重组发育成新胚胎新胚胎终发育成新体
核移植方法动物称克隆动物
原理：动物细胞核具全性
2核移植分类
胚胎细胞核移植：细胞分化程度低恢复全性容易
体细胞核移植：细胞分化程度高恢复全性容易
3体细胞核移植程
（1）供体细胞：10代细胞：
原：10代细胞般保持正常二倍体核型
（2）受体细胞：减数第二次分裂中期核卵母细胞
卵母细胞作受体细胞原：
体积易操作 含激发细胞核全性物质
核原：代性状供体细胞核决定
核方法：显微操作
（3）激活细胞方法：电脉钙离子载体乙醇蛋白酶合成抑制剂
（4）获克隆动物供核动物性状完全相原：
发生基突变
性状基环境作结果
克隆动物部分DNA供体细胞细胞核核外线粒体中DNA受体细胞
动物细胞融合
1动物细胞融合：两细胞结合形成细胞程称细胞杂交
杂交细胞：融合形成具原两细胞遗传信息单核细胞称杂交细胞
动物细胞融合原理：细胞膜流动性
2动物细胞融合诱导方法
（1）物理法：离心振动电激
（2）化学法：聚乙二醇(PEG)
（3）生物法：灭活病毒(动物细胞融合特方法)
3注意
（1）细胞融合程包括细胞膜融合细胞质融合细胞核融合
（2）细胞膜融合中体现出细胞膜具流动性
（3）中细胞膜融合细胞融合先导没细胞膜融合会细胞质细胞融合
(4)动物细胞融合实质结束标志细胞核融合
4优点应
(1)优点突破性杂交方法局限远缘杂交成
应
(1)细胞融合技术研究细胞遗传细胞免疫肿瘤生物新品种培育等重手段
利细胞融合技术发展起杂交瘤技术制造单克隆抗体开辟新途径
单克隆抗体
1传统抗体获：
(1)方法：
①动物体反复注射某种抗原动物产生抗体
②动物血清中分离需抗体
(2)缺陷：产量低纯度低特异性差
2较制备单克隆抗体中种细胞：
B淋巴细胞：产生单抗体限增殖
骨髓瘤细胞：限增殖产生抗体
杂交瘤细胞：产生专抗体限增殖
3制备单克隆抗体需技术手段：动物细胞融合动物细胞培养
原理：细胞膜流动性细胞增殖
4单克隆抗体制备
（1）免疫处理：提供B淋巴细胞动物必须先免疫处理否会产生特异性抗体
（2）诱导融合方法：
物理法：离心振动离心
化学法：聚乙二醇(PEG)
生物法：灭活病毒(动物细胞融合特方法)
5仅考虑两两融合情况形成杂交细胞三种
B淋巴细胞B淋巴细胞融合细胞
骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合细胞
杂交瘤细胞
6杂交瘤细胞特点：迅速量增殖产生某种特异性抗体
7两次筛选目：第次筛选目：筛选出杂交瘤细胞
第二次筛选目：筛选出产生特定抗体杂交瘤细胞
8获取单克隆抗体场
(1)培养基中进行杂交瘤细胞培养培养液中提取
(2)鼠动物腹腔中进行培养腹水中提取
腹腔培养：易控制培养条件成低规模产量低
体外培养：规模产量高易控制培养条件成相较高
9杂交瘤细胞特点：迅速量繁殖产生专抗体
单克隆抗体优点：特异性强灵敏性高量制备
10单克隆抗体应：
(1)作诊断试剂
(2)治疗疾病运载药物
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