附件3
茶叶中氯噻啉测定
BJS 201914
1 范围
方法规定茶叶中氯噻啉残留量高效液相色谱串联质谱测定方法
方法适茶叶中氯噻啉残留量测定
2 原理
试样中氯噻啉乙腈均质提取浓缩净化采液相色谱串联质谱仪检测确证外标法定量
3 试剂材料
行规定外水GBT 6682 规定级水
31 试剂
311 乙腈（CH3CN）：色谱纯
312 甲酸（CH2O2）：色谱纯
313 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯
314 氯化钠（NaCl）：分析纯
315 水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯
32 溶液配制
321 乙腈二氯甲烷（3+1体积）溶液：取乙腈（311）600 mL取二氯甲烷（313）200 mL混合均匀备
322 01甲酸水溶液：准确吸取10 mL甲酸（312）超纯水定容10 L混匀
323 01甲酸乙腈溶液：准确吸取10 mL甲酸（312）乙腈定容10 L混匀
33 标准物质
标准物质名称等表1示纯度950
表1 标准物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
化合物名称
英文名
CAS登录号
分子式
相分子质量
氯噻啉
Imidaclothiz
105843365
C7H8ClN5O2S
26101
34 标准溶液配制
称取氯噻啉标准品（33）10 mg（精确001 mg）乙腈（311）溶解定容100 mL配制成浓度100 mgL标准储备液0 ℃～4 ℃避光保存效期12月
35 氨基硅胶酰胺化聚合物石墨化碳柱
规格1000 mg6 mL等效SPE柱
4 仪器设备
41 液相色谱串联质谱仪（LCMSMS）：配电喷雾离子源（ESI）
42 分析天：感量分001g001mg
43 涡旋振荡器
44 高速组织捣碎机：转速低15000 rmin
45 离心机：转速低4000 rmin
46 旋转蒸发仪
5 试样制备保存
茶叶粉碎置干燥状态保存
6 分析步骤
61 提取
称取2 g样品（精确001 g）置50 mL离心中加入15 mL乙腈涡旋振荡05 min高速组织捣碎机15000 rmin均质1 min4000 rmin离心5 min清液移入梨形烧瓶中残渣15 mL乙腈重复述提取次合提取液40 ℃水浴中减压旋转浓缩2～3 mL
62 净化
固相萃取柱（35）预先加入约1 cm高水硫酸钠（315）先5 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）预洗固相萃取柱弃流出液提取浓缩液（61）转移固相萃取柱5 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）分3次洗涤梨形烧瓶转移固相萃取柱时梨形烧瓶收集全部流出液20 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）淋洗固相萃取柱合全部流出液40 ℃水浴中减压旋转浓缩干氮气吹干准确加入20 mL乙腈溶解残渣微孔滤膜（022 μm机相）滤供LCMSMS测定
63 仪器参考条件
631色谱条件
a） 色谱柱：Eclipse Plus C18（21×50 mm18 μm）相者
b） 流动相：A01甲酸水溶液B乙腈洗脱梯度见表2
c） 流速：03 mLmin
d） 柱温：35 ℃
e） 进样体积1 μL
表2 梯度洗脱条件
时间（min）
流动相A （）
流动相B（）
000
85
15
300
85
15
600
25
75
800
25
75
810
85
15
1000
85
15
632质谱条件
a） 离子源类型：电喷雾离子源（ESI）
b） 扫描方式：正离子扫描
c） 毛细电压：4 kV
d） 毛细温度：300 ℃
e） 雾化气：氮气3 Lmin
f） 碰撞气：氩气
g） 检测方式：反应监测（MRM）
h） 定性离子定量离子参见表3
表3 氯噻啉质谱参数
组分
母离子
（mz）
子离子
（mz）
Q1 Pre Bias（V）
碰撞量（eV）
Q3 Pre Bias（V）
氯噻啉
26200
*18105
10
15
30
26200
12210
10
27
23
注： *表示定量离子
64标准工作曲线制作
取粉碎质谱确认含氯噻啉空白试样6162步骤操作处理测样品相空白基质该基质稀释标准储备液（34）配制浓度0005 mgL002 mgL005 mgL01 mgL02 mgL05 mgL标准系列溶液混合标准系列工作液分仪器参考条件（63）进行测定相应标准溶液色谱峰面积混合标准工作液浓度横坐标色谱峰峰面积坐标绘制标准曲线
65 测定
651 定性测定
63条件测定试样标准工作液果试样谱图中出现保留时间标准工作液中氯噻啉峰保留时间偏差±25定性离子相丰度标准中氯噻啉工作溶液定性离子相丰度偏差超表4规定范围时确定样品中存氯噻啉
表4 定性确证时相离子丰度允许偏差
相离子丰度
>50
>20~50
>10~20
≤10
允许相偏差
±20
±25
±30
±50
652 定量测定
测样液中氯噻啉响应值应标准曲线线性范围超线性范围应空白基质稀释进样分析
66空白试验
加试样仅加质谱确认含氯噻啉空白试样空白试验应采试样测定完全相试剂设备步骤进行
7 结果计算
试样中氯噻啉质量分数X计数值毫克千克（mgkg）表示公式（1）计算
XC×V×1000m×1000 （1）
式中：
X—— 试样中氯噻啉含量单位毫克千克（mgkg）
C —— 标准曲线氯噻啉浓度单位毫克升（mgL）
V —— 样品溶液定容体积单位毫升（mL）
m —— 试样质量单位克（g）
计算结果保留两位效数字结果1 mgkg时保留3位效数字
8 精密度准确度
81 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值10
82 准确度
方法00053 mgkg添加浓度范围回收率70120
9 检出限定量限
方法定量限0005 mgkg检出限00015 mgkg
附录A
氯噻啉总离子流图特征离子图
图1 氯噻啉总离子流图（100 μgL）
图2 氯噻啉定量离子提取色谱图（2620>18105）（100 μgL）
图3 氯噻啉定性离子提取色谱图（2620>12210）（100 μgL）
方法负责起草单位：浙江省食品药品检验研究院
验证单位：四川省食品药品检验检测院海市食品药品检验山西省食品药品检验杭州市疾病预防控制中心杭州绿城农科检测技术限公司
起草：罗金文刘柱徐潇颖张泸文陈煜金铨
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茶叶中氯噻啉测定
BJS 201914
1 范围
方法规定茶叶中氯噻啉残留量高效液相色谱串联质谱测定方法
方法适茶叶中氯噻啉残留量测定
2 原理
试样中氯噻啉乙腈均质提取浓缩净化采液相色谱串联质谱仪检测确证外标法定量
3 试剂材料
行规定外水GBT 6682 规定级水
31 试剂
311 乙腈（CH3CN）：色谱纯
312 甲酸（CH2O2）：色谱纯
313 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯
314 氯化钠（NaCl）：分析纯
315 水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯
32 溶液配制
321 乙腈二氯甲烷（3+1体积）溶液：取乙腈（311）600 mL取二氯甲烷（313）200 mL混合均匀备
322 01甲酸水溶液：准确吸取10 mL甲酸（312）超纯水定容10 L混匀
323 01甲酸乙腈溶液：准确吸取10 mL甲酸（312）乙腈定容10 L混匀
33 标准物质
标准物质名称等表1示纯度950
表1 标准物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
化合物名称
英文名
CAS登录号
分子式
相分子质量
氯噻啉
Imidaclothiz
105843365
C7H8ClN5O2S
26101
34 标准溶液配制
称取氯噻啉标准品（33）10 mg（精确001 mg）乙腈（311）溶解定容100 mL配制成浓度100 mgL标准储备液0 ℃～4 ℃避光保存效期12月
35 氨基硅胶酰胺化聚合物石墨化碳柱
规格1000 mg6 mL等效SPE柱
4 仪器设备
41 液相色谱串联质谱仪（LCMSMS）：配电喷雾离子源（ESI）
42 分析天：感量分001g001mg
43 涡旋振荡器
44 高速组织捣碎机：转速低15000 rmin
45 离心机：转速低4000 rmin
46 旋转蒸发仪
5 试样制备保存
茶叶粉碎置干燥状态保存
6 分析步骤
61 提取
称取2 g样品（精确001 g）置50 mL离心中加入15 mL乙腈涡旋振荡05 min高速组织捣碎机15000 rmin均质1 min4000 rmin离心5 min清液移入梨形烧瓶中残渣15 mL乙腈重复述提取次合提取液40 ℃水浴中减压旋转浓缩2～3 mL
62 净化
固相萃取柱（35）预先加入约1 cm高水硫酸钠（315）先5 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）预洗固相萃取柱弃流出液提取浓缩液（61）转移固相萃取柱5 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）分3次洗涤梨形烧瓶转移固相萃取柱时梨形烧瓶收集全部流出液20 mL乙腈二氯甲烷（体积3+1）溶液（321）淋洗固相萃取柱合全部流出液40 ℃水浴中减压旋转浓缩干氮气吹干准确加入20 mL乙腈溶解残渣微孔滤膜（022 μm机相）滤供LCMSMS测定
63 仪器参考条件
631色谱条件
a） 色谱柱：Eclipse Plus C18（21×50 mm18 μm）相者
b） 流动相：A01甲酸水溶液B乙腈洗脱梯度见表2
c） 流速：03 mLmin
d） 柱温：35 ℃
e） 进样体积1 μL
表2 梯度洗脱条件
时间（min）
流动相A （）
流动相B（）
000
85
15
300
85
15
600
25
75
800
25
75
810
85
15
1000
85
15
632质谱条件
a） 离子源类型：电喷雾离子源（ESI）
b） 扫描方式：正离子扫描
c） 毛细电压：4 kV
d） 毛细温度：300 ℃
e） 雾化气：氮气3 Lmin
f） 碰撞气：氩气
g） 检测方式：反应监测（MRM）
h） 定性离子定量离子参见表3
表3 氯噻啉质谱参数
组分
母离子
（mz）
子离子
（mz）
Q1 Pre Bias（V）
碰撞量（eV）
Q3 Pre Bias（V）
氯噻啉
26200
*18105
10
15
30
26200
12210
10
27
23
注： *表示定量离子
64标准工作曲线制作
取粉碎质谱确认含氯噻啉空白试样6162步骤操作处理测样品相空白基质该基质稀释标准储备液（34）配制浓度0005 mgL002 mgL005 mgL01 mgL02 mgL05 mgL标准系列溶液混合标准系列工作液分仪器参考条件（63）进行测定相应标准溶液色谱峰面积混合标准工作液浓度横坐标色谱峰峰面积坐标绘制标准曲线
65 测定
651 定性测定
63条件测定试样标准工作液果试样谱图中出现保留时间标准工作液中氯噻啉峰保留时间偏差±25定性离子相丰度标准中氯噻啉工作溶液定性离子相丰度偏差超表4规定范围时确定样品中存氯噻啉
表4 定性确证时相离子丰度允许偏差
相离子丰度
>50
>20~50
>10~20
≤10
允许相偏差
±20
±25
±30
±50
652 定量测定
测样液中氯噻啉响应值应标准曲线线性范围超线性范围应空白基质稀释进样分析
66空白试验
加试样仅加质谱确认含氯噻啉空白试样空白试验应采试样测定完全相试剂设备步骤进行
7 结果计算
试样中氯噻啉质量分数X计数值毫克千克（mgkg）表示公式（1）计算
XC×V×1000m×1000 （1）
式中：
X—— 试样中氯噻啉含量单位毫克千克（mgkg）
C —— 标准曲线氯噻啉浓度单位毫克升（mgL）
V —— 样品溶液定容体积单位毫升（mL）
m —— 试样质量单位克（g）
计算结果保留两位效数字结果1 mgkg时保留3位效数字
8 精密度准确度
81 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值10
82 准确度
方法00053 mgkg添加浓度范围回收率70120
9 检出限定量限
方法定量限0005 mgkg检出限00015 mgkg
附录A
氯噻啉总离子流图特征离子图
图1 氯噻啉总离子流图（100 μgL）
图2 氯噻啉定量离子提取色谱图（2620>18105）（100 μgL）
图3 氯噻啉定性离子提取色谱图（2620>12210）（100 μgL）
方法负责起草单位：浙江省食品药品检验研究院
验证单位：四川省食品药品检验检测院海市食品药品检验山西省食品药品检验杭州市疾病预防控制中心杭州绿城农科检测技术限公司
起草：罗金文刘柱徐潇颖张泸文陈煜金铨
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