附件1
食品中柑橘红2号测定
BJS 201912
1 范围
方法规定柑橘类水果果酱蜜饯果汁饮料辣椒油辣椒酱火锅底料肉制品中柑橘红2号液相色谱串联质谱测定方法
方法适柑橘类水果果酱蜜饯果汁饮料辣椒油辣椒酱火锅底料肉制品中柑橘红2号测定
2 原理
试样乙腈提取氨基固相萃取柱净化液相色谱串联质谱仪测定外标法定量
3 试剂材料
规定外方法中试剂均分析纯水符合GBT 6682规定级水
31 试剂
311 乙腈（CH3CN）：色谱纯
312 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯
313 甲酸（HCOOH）：色谱纯
314 氯化钠（NaCl）
315 氮气（N2）：纯度≥999
32 试剂配制
321 乙腈二氯甲烷溶液（1 ）：准确量取乙腈（311）1mL100mL容量瓶中二氯甲烷（312）定容刻度 摇匀备
322 甲酸乙腈溶液（1 ）：准确量取甲酸（313）1mL100mL容量瓶中乙腈（311）定容刻度 摇匀备
323 甲酸水溶液（01 ）：准确量取甲酸（313）1mL1000mL容量瓶中水定容刻度 摇匀备
33 标准品
柑橘红2号标准物质：分子式C28H16N2O3CAS 号：6358538纯度≥900
34 标准溶液配制
341 柑橘红2号标准储备溶液（200μgmL）：准确称取纯度折算 100 质量柑橘红2号标准品（33）001g（精确000001g）50mL容量瓶中乙腈（311）溶解定容刻度摇匀配制成浓度200μgmL标准储备溶液溶液转移试剂瓶中4℃冷藏保存效期6月
342 柑橘红2号中间溶液：准确移取定量柑橘红2号标准储备溶液（341）乙腈（311）稀释成定浓度中间溶液溶液转移试剂瓶中4℃冷藏保存效期3月
4 仪器设备
41 液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI源）
42 电子分析天：感量分000001g001g
43 超声波清洗器
44 涡旋混合器
45 离心机：转速≥8000rmin
46 氮吹仪
47 固相萃取装置
48 氨基固相萃取柱：500mg3mL
49 微孔滤膜：机相孔径022μm
410 均质机
5 分析步骤
51 试样制备
固体样品切成块均质机粉碎混匀分装洁净容器中中水果样品取果皮部分粉碎
半固体样品直接均质机均质混匀分装洁净容器中
液体样品摇匀备
52 试样前处理
521 试样提取
称取试样2g（精确001g）50mL离心中准确加入10mL乙腈（311）涡旋振荡1min加入2g氯化钠剧烈振摇1min超声10min8000rmin离心3min取清液乙腈层15mL离心中40℃氮吹浓缩干3mL乙腈二氯甲烷溶液（1 ）（321）涡旋超声溶解残渣溶液净化
522 试样净化
6mL乙腈二氯甲烷溶液（1）（321）活化固相萃取柱液面降柱床表面时521净化液转移固相萃取柱时收集流出液6mL乙腈二氯甲烷溶液（1 ）（321）分两次洗涤15mL离心洗涤液淋洗固相萃取柱时收集流出液合流出液40℃条件氮吹浓缩干准确加入10mL甲酸乙腈（1）溶液（322）溶解残渣微孔滤膜机测定
53 基质标准溶液制备
称取5质谱确认含柑橘红2号阴性样品50mL离心中加入定浓度柑橘红2号中间溶液柑橘红2号含量20ng50ng100ng200ng400ng基质样品余52步骤操作完成中阴性样品52步骤操作完成机测试含柑橘红2号
54 仪器参考条件
541 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：C18柱（粒径17 µm 75 mm× 21 mm）性相者
b) 流动相：A01 甲酸水溶液（323）B乙腈（311）梯度洗脱条件见表1
c) 进样体积：20μL
d) 流速：030mLmin
e) 柱温：40℃
表1 流动相梯度洗脱条件
时间min
流动相A
流动相B
00
90
10
30
50
50
50
5
95
70
5
95
71
90
10
90
90
10
542 质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）正离子模式
b）监测方式：反应监测（MRM）
c）毛细电压：30kV
d）脱溶剂气温度：500℃
e）离子源温度：150℃
f）脱溶剂气流速：850Lh
g）锥孔气流速：150Lh
h）碰撞气（Ar）流速：012mLmin
柑橘红2号定性定量离子驻留时间碰撞量见表2
表2 柑橘红2号质谱参考条件
化合物
母离子
（mz）
子离子
（mz）
锥孔电压（V）
驻留时间 （ms）
碰撞量（eV）
柑橘红2号
3091
1530*
25
100
20
2780
25
100
12
注：* 定量离子
543 定性测定
相试验条件测定试样基质标准溶液样品溶液中检出色谱峰保留时间基质标准溶液中目标物色谱峰保留时间致（变化范围±25）样品溶液质谱离子相丰度浓度相基质标准溶液质谱离子相丰度相较相离子丰度相偏差超表3规定范围判定样品中存该组分
表 3 定性时相离子丰度允许偏差
相离子丰度（）
k﹥50
50≥k﹥20
20≥k﹥10
k≤10
允许偏差（）
± 20
± 25
± 30
± 50
544 定量测定
基质标准溶液注入液相色谱串联质谱仪测定柑橘红2号峰面积基质标准溶液浓度横坐标柑橘红2号定量离子峰面积坐标绘制标准工作曲线试样溶液（52）仪器参考条件（54）进行测定相应试样溶液色谱峰面积根校正曲线试样溶液柑橘红2号浓度试样溶液中目标物响应值高校正曲线线性范围应稀释进行分析
述色谱质谱条件柑橘红2号标准溶液反应监测质量色谱图参见附录A
55 空白试验
加试样外均述步骤进行操作
6 分析结果表述
试样中柑橘红2号含量式（1）计算：
（1）
式中：
X — 试样中柑橘红2号含量单位微克千克（µgkg）
m — 基质加标工作计算出测定样液中柑橘红2号含量单位纳克（ng）
M — 试样质量单位克（g）
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留两位效数字
7 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值10
8
称样量2g时柑橘红2号检出限5µgkg定量限10µgkg
附录A
柑橘红2号反应监测质量色谱图
图A1 柑橘红2号标准溶液反应监测质量色谱图（浓度10ngmL）
方法负责起草单位：山东省食品药品检验研究院
方法验证单位：北京市疾病预防控制中心海市质量监督检验技术研究院四川省食品药品检验检测院武汉食品化妆品检验山西省食品药品检验
方法起草：张艳侠尹丽丽卢跃鹏薛霞刘艳明王骏
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
食品中柑橘红2号测定
BJS 201912
1 范围
方法规定柑橘类水果果酱蜜饯果汁饮料辣椒油辣椒酱火锅底料肉制品中柑橘红2号液相色谱串联质谱测定方法
方法适柑橘类水果果酱蜜饯果汁饮料辣椒油辣椒酱火锅底料肉制品中柑橘红2号测定
2 原理
试样乙腈提取氨基固相萃取柱净化液相色谱串联质谱仪测定外标法定量
3 试剂材料
规定外方法中试剂均分析纯水符合GBT 6682规定级水
31 试剂
311 乙腈（CH3CN）：色谱纯
312 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯
313 甲酸（HCOOH）：色谱纯
314 氯化钠（NaCl）
315 氮气（N2）：纯度≥999
32 试剂配制
321 乙腈二氯甲烷溶液（1 ）：准确量取乙腈（311）1mL100mL容量瓶中二氯甲烷（312）定容刻度 摇匀备
322 甲酸乙腈溶液（1 ）：准确量取甲酸（313）1mL100mL容量瓶中乙腈（311）定容刻度 摇匀备
323 甲酸水溶液（01 ）：准确量取甲酸（313）1mL1000mL容量瓶中水定容刻度 摇匀备
33 标准品
柑橘红2号标准物质：分子式C28H16N2O3CAS 号：6358538纯度≥900
34 标准溶液配制
341 柑橘红2号标准储备溶液（200μgmL）：准确称取纯度折算 100 质量柑橘红2号标准品（33）001g（精确000001g）50mL容量瓶中乙腈（311）溶解定容刻度摇匀配制成浓度200μgmL标准储备溶液溶液转移试剂瓶中4℃冷藏保存效期6月
342 柑橘红2号中间溶液：准确移取定量柑橘红2号标准储备溶液（341）乙腈（311）稀释成定浓度中间溶液溶液转移试剂瓶中4℃冷藏保存效期3月
4 仪器设备
41 液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI源）
42 电子分析天：感量分000001g001g
43 超声波清洗器
44 涡旋混合器
45 离心机：转速≥8000rmin
46 氮吹仪
47 固相萃取装置
48 氨基固相萃取柱：500mg3mL
49 微孔滤膜：机相孔径022μm
410 均质机
5 分析步骤
51 试样制备
固体样品切成块均质机粉碎混匀分装洁净容器中中水果样品取果皮部分粉碎
半固体样品直接均质机均质混匀分装洁净容器中
液体样品摇匀备
52 试样前处理
521 试样提取
称取试样2g（精确001g）50mL离心中准确加入10mL乙腈（311）涡旋振荡1min加入2g氯化钠剧烈振摇1min超声10min8000rmin离心3min取清液乙腈层15mL离心中40℃氮吹浓缩干3mL乙腈二氯甲烷溶液（1 ）（321）涡旋超声溶解残渣溶液净化
522 试样净化
6mL乙腈二氯甲烷溶液（1）（321）活化固相萃取柱液面降柱床表面时521净化液转移固相萃取柱时收集流出液6mL乙腈二氯甲烷溶液（1 ）（321）分两次洗涤15mL离心洗涤液淋洗固相萃取柱时收集流出液合流出液40℃条件氮吹浓缩干准确加入10mL甲酸乙腈（1）溶液（322）溶解残渣微孔滤膜机测定
53 基质标准溶液制备
称取5质谱确认含柑橘红2号阴性样品50mL离心中加入定浓度柑橘红2号中间溶液柑橘红2号含量20ng50ng100ng200ng400ng基质样品余52步骤操作完成中阴性样品52步骤操作完成机测试含柑橘红2号
54 仪器参考条件
541 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：C18柱（粒径17 µm 75 mm× 21 mm）性相者
b) 流动相：A01 甲酸水溶液（323）B乙腈（311）梯度洗脱条件见表1
c) 进样体积：20μL
d) 流速：030mLmin
e) 柱温：40℃
表1 流动相梯度洗脱条件
时间min
流动相A
流动相B
00
90
10
30
50
50
50
5
95
70
5
95
71
90
10
90
90
10
542 质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）正离子模式
b）监测方式：反应监测（MRM）
c）毛细电压：30kV
d）脱溶剂气温度：500℃
e）离子源温度：150℃
f）脱溶剂气流速：850Lh
g）锥孔气流速：150Lh
h）碰撞气（Ar）流速：012mLmin
柑橘红2号定性定量离子驻留时间碰撞量见表2
表2 柑橘红2号质谱参考条件
化合物
母离子
（mz）
子离子
（mz）
锥孔电压（V）
驻留时间 （ms）
碰撞量（eV）
柑橘红2号
3091
1530*
25
100
20
2780
25
100
12
注：* 定量离子
543 定性测定
相试验条件测定试样基质标准溶液样品溶液中检出色谱峰保留时间基质标准溶液中目标物色谱峰保留时间致（变化范围±25）样品溶液质谱离子相丰度浓度相基质标准溶液质谱离子相丰度相较相离子丰度相偏差超表3规定范围判定样品中存该组分
表 3 定性时相离子丰度允许偏差
相离子丰度（）
k﹥50
50≥k﹥20
20≥k﹥10
k≤10
允许偏差（）
± 20
± 25
± 30
± 50
544 定量测定
基质标准溶液注入液相色谱串联质谱仪测定柑橘红2号峰面积基质标准溶液浓度横坐标柑橘红2号定量离子峰面积坐标绘制标准工作曲线试样溶液（52）仪器参考条件（54）进行测定相应试样溶液色谱峰面积根校正曲线试样溶液柑橘红2号浓度试样溶液中目标物响应值高校正曲线线性范围应稀释进行分析
述色谱质谱条件柑橘红2号标准溶液反应监测质量色谱图参见附录A
55 空白试验
加试样外均述步骤进行操作
6 分析结果表述
试样中柑橘红2号含量式（1）计算：
（1）
式中：
X — 试样中柑橘红2号含量单位微克千克（µgkg）
m — 基质加标工作计算出测定样液中柑橘红2号含量单位纳克（ng）
M — 试样质量单位克（g）
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留两位效数字
7 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值10
8
称样量2g时柑橘红2号检出限5µgkg定量限10µgkg
附录A
柑橘红2号反应监测质量色谱图
图A1 柑橘红2号标准溶液反应监测质量色谱图（浓度10ngmL）
方法负责起草单位：山东省食品药品检验研究院
方法验证单位：北京市疾病预防控制中心海市质量监督检验技术研究院四川省食品药品检验检测院武汉食品化妆品检验山西省食品药品检验
方法起草：张艳侠尹丽丽卢跃鹏薛霞刘艳明王骏
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
