梅毒实验室诊断
梅毒实验室诊断方法显微镜检查法血清学检测法
显微镜检查法
（）暗视野显微镜检查
基原理
梅毒硬疳扁湿疣黏膜斑等皮损渗出液涂片淋巴结穿刺液涂片等暗视野显微镜光线聚光器边缘斜射涂片梅毒螺旋体发出亮光根特殊形态运动方式进行检测
仪器材料
1．暗视野显微镜
2．钝刀（刮勺）载玻片盖玻片注射器具菌生理盐水
标采集
1．皮肤黏膜组织液：菌生理盐水浸湿棉拭子擦皮损表面污物钝刀轻刮挤压皮损表层取渗出液预先滴加载玻片生理盐水混合加盖玻片镜检
2．淋巴液：菌操作穿刺淋巴结注入生理盐水反复抽吸2～3次取少量淋巴液直接滴载玻片加盖玻片镜检
操作步骤
1．加镜油：暗视野显微镜聚光器滴加镜油
2．聚光：标玻片置载物台升聚光器镜油接触载玻片底面
3．镜检：镜观察寻找特征形态运动方式梅毒螺旋体
结果判读
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX告XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX梅毒螺旋体暗视野显微镜镜表现纤细白色折光螺旋状微生物长5～20mm直径02mm6～12螺旋具旋转蛇行伸缩等三种特征性运动方式暗视野显微镜发现述特征螺旋体阳性结果
结果报告
1．阳性：见述特征梅毒螺旋体
2．阴性：未见述特征梅毒螺旋体
床意义
1．暗视野显微镜检查阳性确诊梅毒
2．螺旋体检查诊断早期现症梅毒方法世界卫生组织指定性病实验室必备项目
3．未见梅毒螺旋体排患梅毒性应复查血清学检查
注意事项
1 取材时量避免出血免影响镜观察
2 取材应立置暗视野显微镜观察
3 镜观察时应注意螺旋体相鉴
（二）镀银染色检查
基原理
梅毒螺旋体具亲银性银溶液染色镜观察梅毒螺旋体
仪器材料
1．显微镜
2．罗吉氏固定液鞣酸媒染剂Fontana氏银溶液
标采集
1 皮肤黏膜组织液：菌生理盐水浸湿棉拭子擦皮损表面污物钝刀轻刮挤压皮损表层取渗出液涂片
2．淋巴液：菌操作穿刺淋巴结注入生理盐水反复抽吸2～3次取少量淋巴液直接滴载玻片
操作步骤
1．涂片干燥：标涂干净载玻片作薄片空气中然干燥
2．固定：固定液涂片固定2～3分钟
3．洗涤：水乙醇洗涤玻片油污
4．媒染：加媒染剂涂片微加热产生蒸汽染30秒
5．银染：水洗加银染液涂片微加热产生蒸汽染30秒
6．镜检：水洗干油镜检查
结果判读
显微镜见染成棕褐色梅毒螺旋体阳性结果
结果报告
1．阳性：见染成棕褐色梅毒螺旋体
2．阴性：未见染成棕褐色梅毒螺旋体
床意义
暗视野显微镜检查法
注意事项
应注意螺旋体加鉴
二血清学检测法
（）非梅毒螺旋体抗原血清试验
非梅毒螺旋体抗原血清试验包括性病研究实验室（VDRL）试验快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验甲苯胺红加热血清试验（TRUST）等
n VDRL试验
基原理
梅毒螺旋体感染体宿会产生抗类脂抗原抗体（反应素）定例心磷脂卵磷脂胆固醇混合物抗原反应检测梅毒患者血中抗类脂抗原抗体
仪器材料
1 水旋转仪显微镜
2 试剂盒：VDRL抗原原液VDRL缓液抗原滴针头带直径14mm漆圈玻璃反应板VDRL试验结果参图片
3 30mL底玻璃瓶生理盐水
标采集
1 血清：抽取静脉血室温静止凝固分离新鲜血清采冻存血清
2 脑脊液：采腰椎穿刺术获应相关专业员操作
操作步骤
1 VDRL抗原配制
2 VDRL玻片定性试验
（1）灭活：血清标56℃灭活30分钟
（2）吸样：吸取005mL血清放入反应板圈中血清涂布整圈
（3）加抗原：标准针头加入1滴抗原
（4）反应：反应板置水旋转仪旋转4分钟〔(180±5)次分钟〕立置低倍显微镜观察
3VDRL定量试验
（1）加稀释液：圈加入005mL生理盐水（根需确定稀释度）
（2）样稀释：吸取005mL样圈中盐水作系列稀释涂布整圈
（3）步骤定性试验（2）～（4）
结果判读
凝集反应强度分级：
3＋ ～ 4＋：中等絮状物液体清亮
2＋：絮状物较液体较清亮
1＋：絮状物较均匀分布液体混浊
±：抗原复合物颗粒稍粗
－：抗原颗粒均匀细
结果报告
1．定性试验：
（1）阳性：镜见1＋～4＋絮状凝集物
（2）阴性：产生凝集反应
2．定量试验：
滴度：镜见絮状凝集物血清高稀释倍数
床意义
期二期潜伏期晚期梅毒患者敏感性分781009671脑脊液VDRL阳性神梅毒诊断意义
注意事项
1．VDRL抗原需天配制
2．试验反应完毕应立观察结果
n RPR试验
基原理
RPR试验VDRL试验种改良方法该法心磷脂卵磷脂胆固醇等组成抗原中加入活性炭颗粒检血清（浆）中反应素结合形成肉眼见黑色絮状物
仪器材料
1．水旋转仪
2．RPR试剂盒：RPR抗原直径18mm圆圈反应卡片抗原滴针头
标采集
1．血清：抽取静脉血室温静止凝固分离新鲜血清采冻存血清
2．血浆：种抗凝剂制备血浆
操作步骤
1．定性试验
（1） 加样：吸取005mL血清(浆)放卡片圈中均匀涂布整圈
（2）加抗原：抗原轻轻摇匀9号针头[毫升（60±1）滴]加1滴抗原
（3）反应：卡片置水旋转仪旋转8分钟[（100±5）转分钟]立亮光观察结果
2．定量试验
（1）稀释液准备：圈加入005mL生理盐水（根需确定稀释度）勿盐水涂开
（2）加样：吸取005mL血清（浆）圈中盐水作系列稀释涂布整圈
（3）定性试验（2）～（4）
结果判读
凝集反应强度分级：
3＋ ～ 4＋：圆圈出现中黑色絮状物液体清亮
2＋：圆圈出现中黑色絮状物液体较清亮
1＋：圆圈出现黑色絮状物液体混浊
－：圆圈仅见碳颗粒集中央点均匀分散
结果报告
1．定性试验：
（1）阳性：出现1＋～4＋强度凝集反应
（2）阴性：产生凝集反应
2．定量试验：
滴度：出现凝集反应血清高稀释倍数
床意义
1．RPR试验适梅毒筛查疗效观察复发感染检查
2．未治疗期二期潜伏梅毒患者敏感性分8610098
注意事项
试验应23～29℃环境中进行
n TRUST试验
TRUST试验甲苯胺红颗粒代RPR试验中碳颗粒作指示物阳性结果红色絮状物基原理仪器材料标采集操作步骤结果判读结果报告床意义注意事项等RPR试验基相
（二）梅毒螺旋体抗原血清试验
梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原特异性抗原抗体反应检测梅毒抗体常方法梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTAABS）梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TPELISA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TPWB）等方法
n TPPA试验
基原理
TPPA试验超声裂解梅毒螺旋体制备抗原致敏明胶粒子致敏粒子检血清中抗梅毒螺旋体抗体结合产生肉眼见凝集
仪器材料
1 微量震荡器
2 试剂盒：A溶解液B标稀释液C致敏粒子D未致敏粒子E质控血清
3．U型反应板
标采集
RPR试验
操作步骤
1．试剂准备：试验前检样试剂应恢复室温
2．加稀释液：份样做4孔加B液反应孔第1孔100µL第2～4孔25µL
3．样稀释：取血清25µL加第1孔混匀取25µL第2孔连续倍稀释第4孔1孔混匀弃25µL
4．加液：第3孔加D液25µL第4孔加C液25µL
5．混合：反应板置震荡器震荡30秒
6．反应：置湿盒孵育2时放4℃冰箱夜观察结果
结果判读
观察凝集反应强度分级：
4＋： 粒子光滑覆盖整孔底时边缘折叠
3＋： 粒子光滑覆盖部分孔底
2＋： 粒子光滑聚集覆盖孔底周围细胞环
1＋： 粒子光滑集聚覆盖孔底周围明显细胞环
±： 粒子沉集孔底中央形成点
－： 粒子紧密沉积孔底中央
结果报告
1．阳性：未致敏粒子出现凝集（第3孔）血清1︰80稀释致敏粒子产生1＋～4＋凝集反应
2 阴性：未致敏粒子致敏粒子均产生凝集反应
床意义
1 TPPA作非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)初筛阳性标确证试验
2．梅毒患者抗梅治疗TPPA试验阳性TPPA试验阳性作疗效观察指标
3．TPPA阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断
注意事项
1 试验结果疑时应选试验方法进行复验
2 未致敏粒子出现凝集反应样进行吸收进行试验改试验方法
n TPHA试验
基原理
TPHA试验超声裂解梅毒螺旋体菌体抗原致敏醛化鞣化羊禽类红细胞抗梅毒螺旋体抗体反应产生肉眼见抗原抗体凝集
仪器材料
1 微量震荡器
2．TPHA试剂盒：A溶解液B标稀释液C致敏粒子D 未致敏粒子E质控血清
3 U型反应板
标采集
RPR试验
操作步骤
1．试剂准备：试验前试剂恢复15～25℃
2．加稀释液：加B液反应板第1孔25mL第2孔100mL第3～5孔加25mL
3．样稀释：取血清25mL加第1孔混匀取25mL第2孔混匀取25mL第3孔混匀弃25mL第2孔取25mL第4孔混匀取25mL第5孔混匀弃25mL
4．加液：第3孔加D液（未致敏细胞）75µL第45孔加C液（致敏细胞）75mL
5．混合：反应板置震荡器震荡30秒
6．反应：置湿盒15～25℃孵育4时放4℃冰箱夜观察结果
结果判读
TPPA试验
结果报告
TPPA试验
床意义
TPPA试验
注意事项
采禽类红细胞载体TPHA试验血清吸收直接进行试验
n FTAABS试验
基原理
完整梅毒螺旋体作抗原吸收剂吸收梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物加入荧光素（FITC）标记抗免疫球蛋白形成带荧光抗原抗体复合物荧光显微镜螺旋体显出苹果绿色荧光
仪器材料
1．荧光显微镜
2．试剂盒：梅毒螺旋体抗原片吸收剂荧光素标记抗体阳性血清PBS缓液固定剂
3血清稀释板
标采集
VDRL试验
操作步骤
1 血清灭活：血清标56℃灭活30分钟备
2 血清稀释：检血清吸收剂1：5稀释阳性血清阴性血清分PBS缓液吸收剂15稀释置37℃湿盒30分钟
3 加样：次试验必须设PBS缓液吸收剂PBS液1︰5稀释阳性阴性血清吸收剂1：5稀释阳性阴性血清6涂片涂片分加入10µL稀释血清缓液置37℃湿盒30分钟
4 洗涤：PBS Tween80液洗玻片2次次5分钟蒸馏水洗次冷风干燥
5 加荧光抗体：涂片加10µL求稀释荧光抗体置37℃湿盒30分钟
6 洗涤：步骤4
7 封片镜检：固定剂封片读片
结果判读
1 阳性：PBS缓液吸附剂稀释荧光强度应相
2 阴性空白：产生荧光
结果报告
1 阳性：荧光镜见程度发绿色荧光螺旋体
2 阴性：荧光密螺旋体微显淡绿色
床意义
1FTAABS梅毒螺旋体抗原血清学试验金标准
2．未治疗期二期潜伏梅毒晚期梅毒患者敏感性分8410010096特异性均达97
3 TPPA试验
注意事项
1 抗原片次洗涤干净避免杂质影响判读结果
2 试验需高质量荧光显微镜技术熟练操作员
n TPELISA试验
基原理
TPELISA试验包固相板条超声裂解纯化处理重组梅毒螺旋体抗原检血清中梅毒特异性抗体结合酶标记抗免疫球蛋白单克隆抗体反应形成抗原抗体复合物底物显色
仪器材料
1 酶标仪洗板机
2．试剂盒组成：96孔反应板标稀释液洗涤液酶结合物底物液终止液阳性阴性
标采集
RPR试验
操作步骤
1加稀释液：取标稀释液加反应板孔
2孵育：分加入阳性阴性检血清置37℃孵育定时间 洗板
3加酶结合物：加酶结合物置37℃孵育定时间 洗板
4加显色剂：加底物37℃避光孵育
5终止反应：加终止液酶标仪测OD（光密度）值
结果判读
1．次试验阳性阴性应规定数值范围
2．根阳性阴性OD值设定阈值（cutoff值）
结果报告
1．阳性：标OD值等cutoff值
2．阴性：标OD值cutoff值
床意义
（1）适流行病学调查样量标检测
（2）ELISA阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)结果进行诊断
注意事项
1批号试剂混
2温度时间必须严格控制
■ TPWB试验
基原理
超声粉碎梅毒螺旋体梅毒螺旋体重组抗原印迹硝酸纤维膜条通酶联反应检测梅毒血清中种特异抗原成分抗体
仪器材料
1 水摇床
2 试剂盒硝酸纤维膜条酶标抗体阳性质控血清阴性质控血清底物液终止液标准阳性反应带结果参图谱
标采集
RPR试验
操作步骤
1．反应：反应槽加20mL工作缓液浸湿膜条5分钟加入002mL检样置水摇床(50转分)18～25℃反应45分钟
2．洗涤：弃反应槽中液体加入 20mL工作缓液置水摇床洗涤3次次5分钟
3．加酶结合物： 加入酶标抗体置水摇床反应30分钟
4．洗涤：步骤2
5．显色：槽加20mL底物置水摇床反应8～10分钟
6．终止 阳性带显色清晰加入10 mL终止剂2分钟弃槽中液体蒸馏水洗2次镊子取出反应条置滤纸
结果判读
1．根阳性结果参图谱判定结果
2 试验硝酸纤维膜条端标记线参标记线齐
3．观察45KD17KD155KD带区显色带
结果报告
1．阳性： 45KD17KD155KD带区均出现显色带
2．阴性： 45KD17KD155KD三条带均未显色
床意义
1．TPPA试验
2．检测IgMIgG抗体
注意事项
1．洗涤充分否易造成试验膜条带背景颜色偏深
2．硝酸纤维膜条反应条带试验中应显示未显示试验效
3．45KD17KD155KD中两条带出现明显色带疑结果需重新试验
n 快速免疫层析法
基原理
利免疫层析原理采吸附显色标记梅毒螺旋体重组抗原滤纸条快速检测标中梅毒螺旋体抗体
仪器材料
试剂盒：测试板次性滴
标采集
RPR试验全血
操作步骤
1．加样：次性滴滴加定量标加样孔中
2．加缓液：立加入定量缓液
3．观察结果：规定时间判读结果
结果判读
1 观察质控条带判断试验效性没出现质控条带说明试验效需重复试验
2．观察标条带
结果报告
1．阳性 出现标条带质控条带
2．阴性：标条带出现质控条带
床意义
1．标快速筛查
2．快速检测阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)结果进行诊断
注意事项
1．试剂盒冷藏环境中取出时应衡室温方
2．试验方法存定假阳性假阴性
三方法
（）梅毒IgM抗体检测
细菌病毒感染样梅毒中特异性IgM抗体合成第次感染体液免疫应答梅毒中螺旋体IgM抗体出现早期梅毒患者中潜伏期晚期患者发现发痊愈患者中IgM水降速度治疗痊愈患者慢IgM分子通胎盘屏障完整损血脑屏障新生血中检测IgM抗体童产前感染诊断标志患者完整损血脑屏障脑脊液（CSF）中出现表示患活动性神梅毒未接受治疗患者血液中CSF中出现抗梅毒IgM抗体均表示需治疗
测定IgM抗体方法基原理采分离柱血清中IgMIgG分子量分离程中沉降速度IgMIgG分收集进行FTAABS等试验采抗IgM单克隆抗体酶标法蛋白质印迹法等进行检测目前测定IgM抗体方法敏感性理想检查IgM抗体助病例中试验结果更解释：先天性梅毒早期期梅毒晚期梅毒非梅毒螺旋体试验血清阳转前早期感染患者判愈试验梅毒史螺旋体感染史患者感染
（二）胎传梅毒(先天梅毒)实验室诊断
具列实验室四指标诊断胎传梅毒(先天梅毒)：①暗视野检查梅毒螺旋体阳性②患非梅毒螺旋体血清抗体滴度持续升③患非梅毒螺旋体血清学定量试验结果母亲高4倍（低等该值排胎传梅毒）④患检出19SIgM抗体
（三）神梅毒实验室诊断
1．神梅毒实验室诊断标准包括：①梅毒血清学检查阳性②脑脊液细胞计数蛋白测定结果异常③脑脊液VDRL试验阳性
2．脑脊液VDRL试验神梅毒标准试验阳性结果诊断神梅毒该试验存假阴性
3．脑脊液FTA－ABS试验阴性排神梅毒特异性高产生假阳性
4．脑脊液检查容
（1）细胞计数：正常时白细胞数应3×106L白细胞数10×106L提示中枢神系统炎症现象
（2）蛋白质量测定：总蛋白质量正常01～04gL神梅毒稍升高高达10～20gL
— END —
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梅毒实验室诊断方法显微镜检查法血清学检测法
显微镜检查法
（）暗视野显微镜检查
基原理
梅毒硬疳扁湿疣黏膜斑等皮损渗出液涂片淋巴结穿刺液涂片等暗视野显微镜光线聚光器边缘斜射涂片梅毒螺旋体发出亮光根特殊形态运动方式进行检测
仪器材料
1．暗视野显微镜
2．钝刀（刮勺）载玻片盖玻片注射器具菌生理盐水
标采集
1．皮肤黏膜组织液：菌生理盐水浸湿棉拭子擦皮损表面污物钝刀轻刮挤压皮损表层取渗出液预先滴加载玻片生理盐水混合加盖玻片镜检
2．淋巴液：菌操作穿刺淋巴结注入生理盐水反复抽吸2～3次取少量淋巴液直接滴载玻片加盖玻片镜检
操作步骤
1．加镜油：暗视野显微镜聚光器滴加镜油
2．聚光：标玻片置载物台升聚光器镜油接触载玻片底面
3．镜检：镜观察寻找特征形态运动方式梅毒螺旋体
结果判读
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX告XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX梅毒螺旋体暗视野显微镜镜表现纤细白色折光螺旋状微生物长5～20mm直径02mm6～12螺旋具旋转蛇行伸缩等三种特征性运动方式暗视野显微镜发现述特征螺旋体阳性结果
结果报告
1．阳性：见述特征梅毒螺旋体
2．阴性：未见述特征梅毒螺旋体
床意义
1．暗视野显微镜检查阳性确诊梅毒
2．螺旋体检查诊断早期现症梅毒方法世界卫生组织指定性病实验室必备项目
3．未见梅毒螺旋体排患梅毒性应复查血清学检查
注意事项
1 取材时量避免出血免影响镜观察
2 取材应立置暗视野显微镜观察
3 镜观察时应注意螺旋体相鉴
（二）镀银染色检查
基原理
梅毒螺旋体具亲银性银溶液染色镜观察梅毒螺旋体
仪器材料
1．显微镜
2．罗吉氏固定液鞣酸媒染剂Fontana氏银溶液
标采集
1 皮肤黏膜组织液：菌生理盐水浸湿棉拭子擦皮损表面污物钝刀轻刮挤压皮损表层取渗出液涂片
2．淋巴液：菌操作穿刺淋巴结注入生理盐水反复抽吸2～3次取少量淋巴液直接滴载玻片
操作步骤
1．涂片干燥：标涂干净载玻片作薄片空气中然干燥
2．固定：固定液涂片固定2～3分钟
3．洗涤：水乙醇洗涤玻片油污
4．媒染：加媒染剂涂片微加热产生蒸汽染30秒
5．银染：水洗加银染液涂片微加热产生蒸汽染30秒
6．镜检：水洗干油镜检查
结果判读
显微镜见染成棕褐色梅毒螺旋体阳性结果
结果报告
1．阳性：见染成棕褐色梅毒螺旋体
2．阴性：未见染成棕褐色梅毒螺旋体
床意义
暗视野显微镜检查法
注意事项
应注意螺旋体加鉴
二血清学检测法
（）非梅毒螺旋体抗原血清试验
非梅毒螺旋体抗原血清试验包括性病研究实验室（VDRL）试验快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验甲苯胺红加热血清试验（TRUST）等
n VDRL试验
基原理
梅毒螺旋体感染体宿会产生抗类脂抗原抗体（反应素）定例心磷脂卵磷脂胆固醇混合物抗原反应检测梅毒患者血中抗类脂抗原抗体
仪器材料
1 水旋转仪显微镜
2 试剂盒：VDRL抗原原液VDRL缓液抗原滴针头带直径14mm漆圈玻璃反应板VDRL试验结果参图片
3 30mL底玻璃瓶生理盐水
标采集
1 血清：抽取静脉血室温静止凝固分离新鲜血清采冻存血清
2 脑脊液：采腰椎穿刺术获应相关专业员操作
操作步骤
1 VDRL抗原配制
2 VDRL玻片定性试验
（1）灭活：血清标56℃灭活30分钟
（2）吸样：吸取005mL血清放入反应板圈中血清涂布整圈
（3）加抗原：标准针头加入1滴抗原
（4）反应：反应板置水旋转仪旋转4分钟〔(180±5)次分钟〕立置低倍显微镜观察
3VDRL定量试验
（1）加稀释液：圈加入005mL生理盐水（根需确定稀释度）
（2）样稀释：吸取005mL样圈中盐水作系列稀释涂布整圈
（3）步骤定性试验（2）～（4）
结果判读
凝集反应强度分级：
3＋ ～ 4＋：中等絮状物液体清亮
2＋：絮状物较液体较清亮
1＋：絮状物较均匀分布液体混浊
±：抗原复合物颗粒稍粗
－：抗原颗粒均匀细
结果报告
1．定性试验：
（1）阳性：镜见1＋～4＋絮状凝集物
（2）阴性：产生凝集反应
2．定量试验：
滴度：镜见絮状凝集物血清高稀释倍数
床意义
期二期潜伏期晚期梅毒患者敏感性分781009671脑脊液VDRL阳性神梅毒诊断意义
注意事项
1．VDRL抗原需天配制
2．试验反应完毕应立观察结果
n RPR试验
基原理
RPR试验VDRL试验种改良方法该法心磷脂卵磷脂胆固醇等组成抗原中加入活性炭颗粒检血清（浆）中反应素结合形成肉眼见黑色絮状物
仪器材料
1．水旋转仪
2．RPR试剂盒：RPR抗原直径18mm圆圈反应卡片抗原滴针头
标采集
1．血清：抽取静脉血室温静止凝固分离新鲜血清采冻存血清
2．血浆：种抗凝剂制备血浆
操作步骤
1．定性试验
（1） 加样：吸取005mL血清(浆)放卡片圈中均匀涂布整圈
（2）加抗原：抗原轻轻摇匀9号针头[毫升（60±1）滴]加1滴抗原
（3）反应：卡片置水旋转仪旋转8分钟[（100±5）转分钟]立亮光观察结果
2．定量试验
（1）稀释液准备：圈加入005mL生理盐水（根需确定稀释度）勿盐水涂开
（2）加样：吸取005mL血清（浆）圈中盐水作系列稀释涂布整圈
（3）定性试验（2）～（4）
结果判读
凝集反应强度分级：
3＋ ～ 4＋：圆圈出现中黑色絮状物液体清亮
2＋：圆圈出现中黑色絮状物液体较清亮
1＋：圆圈出现黑色絮状物液体混浊
－：圆圈仅见碳颗粒集中央点均匀分散
结果报告
1．定性试验：
（1）阳性：出现1＋～4＋强度凝集反应
（2）阴性：产生凝集反应
2．定量试验：
滴度：出现凝集反应血清高稀释倍数
床意义
1．RPR试验适梅毒筛查疗效观察复发感染检查
2．未治疗期二期潜伏梅毒患者敏感性分8610098
注意事项
试验应23～29℃环境中进行
n TRUST试验
TRUST试验甲苯胺红颗粒代RPR试验中碳颗粒作指示物阳性结果红色絮状物基原理仪器材料标采集操作步骤结果判读结果报告床意义注意事项等RPR试验基相
（二）梅毒螺旋体抗原血清试验
梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原特异性抗原抗体反应检测梅毒抗体常方法梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTAABS）梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TPELISA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TPWB）等方法
n TPPA试验
基原理
TPPA试验超声裂解梅毒螺旋体制备抗原致敏明胶粒子致敏粒子检血清中抗梅毒螺旋体抗体结合产生肉眼见凝集
仪器材料
1 微量震荡器
2 试剂盒：A溶解液B标稀释液C致敏粒子D未致敏粒子E质控血清
3．U型反应板
标采集
RPR试验
操作步骤
1．试剂准备：试验前检样试剂应恢复室温
2．加稀释液：份样做4孔加B液反应孔第1孔100µL第2～4孔25µL
3．样稀释：取血清25µL加第1孔混匀取25µL第2孔连续倍稀释第4孔1孔混匀弃25µL
4．加液：第3孔加D液25µL第4孔加C液25µL
5．混合：反应板置震荡器震荡30秒
6．反应：置湿盒孵育2时放4℃冰箱夜观察结果
结果判读
观察凝集反应强度分级：
4＋： 粒子光滑覆盖整孔底时边缘折叠
3＋： 粒子光滑覆盖部分孔底
2＋： 粒子光滑聚集覆盖孔底周围细胞环
1＋： 粒子光滑集聚覆盖孔底周围明显细胞环
±： 粒子沉集孔底中央形成点
－： 粒子紧密沉积孔底中央
结果报告
1．阳性：未致敏粒子出现凝集（第3孔）血清1︰80稀释致敏粒子产生1＋～4＋凝集反应
2 阴性：未致敏粒子致敏粒子均产生凝集反应
床意义
1 TPPA作非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)初筛阳性标确证试验
2．梅毒患者抗梅治疗TPPA试验阳性TPPA试验阳性作疗效观察指标
3．TPPA阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断
注意事项
1 试验结果疑时应选试验方法进行复验
2 未致敏粒子出现凝集反应样进行吸收进行试验改试验方法
n TPHA试验
基原理
TPHA试验超声裂解梅毒螺旋体菌体抗原致敏醛化鞣化羊禽类红细胞抗梅毒螺旋体抗体反应产生肉眼见抗原抗体凝集
仪器材料
1 微量震荡器
2．TPHA试剂盒：A溶解液B标稀释液C致敏粒子D 未致敏粒子E质控血清
3 U型反应板
标采集
RPR试验
操作步骤
1．试剂准备：试验前试剂恢复15～25℃
2．加稀释液：加B液反应板第1孔25mL第2孔100mL第3～5孔加25mL
3．样稀释：取血清25mL加第1孔混匀取25mL第2孔混匀取25mL第3孔混匀弃25mL第2孔取25mL第4孔混匀取25mL第5孔混匀弃25mL
4．加液：第3孔加D液（未致敏细胞）75µL第45孔加C液（致敏细胞）75mL
5．混合：反应板置震荡器震荡30秒
6．反应：置湿盒15～25℃孵育4时放4℃冰箱夜观察结果
结果判读
TPPA试验
结果报告
TPPA试验
床意义
TPPA试验
注意事项
采禽类红细胞载体TPHA试验血清吸收直接进行试验
n FTAABS试验
基原理
完整梅毒螺旋体作抗原吸收剂吸收梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物加入荧光素（FITC）标记抗免疫球蛋白形成带荧光抗原抗体复合物荧光显微镜螺旋体显出苹果绿色荧光
仪器材料
1．荧光显微镜
2．试剂盒：梅毒螺旋体抗原片吸收剂荧光素标记抗体阳性血清PBS缓液固定剂
3血清稀释板
标采集
VDRL试验
操作步骤
1 血清灭活：血清标56℃灭活30分钟备
2 血清稀释：检血清吸收剂1：5稀释阳性血清阴性血清分PBS缓液吸收剂15稀释置37℃湿盒30分钟
3 加样：次试验必须设PBS缓液吸收剂PBS液1︰5稀释阳性阴性血清吸收剂1：5稀释阳性阴性血清6涂片涂片分加入10µL稀释血清缓液置37℃湿盒30分钟
4 洗涤：PBS Tween80液洗玻片2次次5分钟蒸馏水洗次冷风干燥
5 加荧光抗体：涂片加10µL求稀释荧光抗体置37℃湿盒30分钟
6 洗涤：步骤4
7 封片镜检：固定剂封片读片
结果判读
1 阳性：PBS缓液吸附剂稀释荧光强度应相
2 阴性空白：产生荧光
结果报告
1 阳性：荧光镜见程度发绿色荧光螺旋体
2 阴性：荧光密螺旋体微显淡绿色
床意义
1FTAABS梅毒螺旋体抗原血清学试验金标准
2．未治疗期二期潜伏梅毒晚期梅毒患者敏感性分8410010096特异性均达97
3 TPPA试验
注意事项
1 抗原片次洗涤干净避免杂质影响判读结果
2 试验需高质量荧光显微镜技术熟练操作员
n TPELISA试验
基原理
TPELISA试验包固相板条超声裂解纯化处理重组梅毒螺旋体抗原检血清中梅毒特异性抗体结合酶标记抗免疫球蛋白单克隆抗体反应形成抗原抗体复合物底物显色
仪器材料
1 酶标仪洗板机
2．试剂盒组成：96孔反应板标稀释液洗涤液酶结合物底物液终止液阳性阴性
标采集
RPR试验
操作步骤
1加稀释液：取标稀释液加反应板孔
2孵育：分加入阳性阴性检血清置37℃孵育定时间 洗板
3加酶结合物：加酶结合物置37℃孵育定时间 洗板
4加显色剂：加底物37℃避光孵育
5终止反应：加终止液酶标仪测OD（光密度）值
结果判读
1．次试验阳性阴性应规定数值范围
2．根阳性阴性OD值设定阈值（cutoff值）
结果报告
1．阳性：标OD值等cutoff值
2．阴性：标OD值cutoff值
床意义
（1）适流行病学调查样量标检测
（2）ELISA阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)结果进行诊断
注意事项
1批号试剂混
2温度时间必须严格控制
■ TPWB试验
基原理
超声粉碎梅毒螺旋体梅毒螺旋体重组抗原印迹硝酸纤维膜条通酶联反应检测梅毒血清中种特异抗原成分抗体
仪器材料
1 水摇床
2 试剂盒硝酸纤维膜条酶标抗体阳性质控血清阴性质控血清底物液终止液标准阳性反应带结果参图谱
标采集
RPR试验
操作步骤
1．反应：反应槽加20mL工作缓液浸湿膜条5分钟加入002mL检样置水摇床(50转分)18～25℃反应45分钟
2．洗涤：弃反应槽中液体加入 20mL工作缓液置水摇床洗涤3次次5分钟
3．加酶结合物： 加入酶标抗体置水摇床反应30分钟
4．洗涤：步骤2
5．显色：槽加20mL底物置水摇床反应8～10分钟
6．终止 阳性带显色清晰加入10 mL终止剂2分钟弃槽中液体蒸馏水洗2次镊子取出反应条置滤纸
结果判读
1．根阳性结果参图谱判定结果
2 试验硝酸纤维膜条端标记线参标记线齐
3．观察45KD17KD155KD带区显色带
结果报告
1．阳性： 45KD17KD155KD带区均出现显色带
2．阴性： 45KD17KD155KD三条带均未显色
床意义
1．TPPA试验
2．检测IgMIgG抗体
注意事项
1．洗涤充分否易造成试验膜条带背景颜色偏深
2．硝酸纤维膜条反应条带试验中应显示未显示试验效
3．45KD17KD155KD中两条带出现明显色带疑结果需重新试验
n 快速免疫层析法
基原理
利免疫层析原理采吸附显色标记梅毒螺旋体重组抗原滤纸条快速检测标中梅毒螺旋体抗体
仪器材料
试剂盒：测试板次性滴
标采集
RPR试验全血
操作步骤
1．加样：次性滴滴加定量标加样孔中
2．加缓液：立加入定量缓液
3．观察结果：规定时间判读结果
结果判读
1 观察质控条带判断试验效性没出现质控条带说明试验效需重复试验
2．观察标条带
结果报告
1．阳性 出现标条带质控条带
2．阴性：标条带出现质控条带
床意义
1．标快速筛查
2．快速检测阳性区分感染现症感染应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)结果进行诊断
注意事项
1．试剂盒冷藏环境中取出时应衡室温方
2．试验方法存定假阳性假阴性
三方法
（）梅毒IgM抗体检测
细菌病毒感染样梅毒中特异性IgM抗体合成第次感染体液免疫应答梅毒中螺旋体IgM抗体出现早期梅毒患者中潜伏期晚期患者发现发痊愈患者中IgM水降速度治疗痊愈患者慢IgM分子通胎盘屏障完整损血脑屏障新生血中检测IgM抗体童产前感染诊断标志患者完整损血脑屏障脑脊液（CSF）中出现表示患活动性神梅毒未接受治疗患者血液中CSF中出现抗梅毒IgM抗体均表示需治疗
测定IgM抗体方法基原理采分离柱血清中IgMIgG分子量分离程中沉降速度IgMIgG分收集进行FTAABS等试验采抗IgM单克隆抗体酶标法蛋白质印迹法等进行检测目前测定IgM抗体方法敏感性理想检查IgM抗体助病例中试验结果更解释：先天性梅毒早期期梅毒晚期梅毒非梅毒螺旋体试验血清阳转前早期感染患者判愈试验梅毒史螺旋体感染史患者感染
（二）胎传梅毒(先天梅毒)实验室诊断
具列实验室四指标诊断胎传梅毒(先天梅毒)：①暗视野检查梅毒螺旋体阳性②患非梅毒螺旋体血清抗体滴度持续升③患非梅毒螺旋体血清学定量试验结果母亲高4倍（低等该值排胎传梅毒）④患检出19SIgM抗体
（三）神梅毒实验室诊断
1．神梅毒实验室诊断标准包括：①梅毒血清学检查阳性②脑脊液细胞计数蛋白测定结果异常③脑脊液VDRL试验阳性
2．脑脊液VDRL试验神梅毒标准试验阳性结果诊断神梅毒该试验存假阴性
3．脑脊液FTA－ABS试验阴性排神梅毒特异性高产生假阳性
4．脑脊液检查容
（1）细胞计数：正常时白细胞数应3×106L白细胞数10×106L提示中枢神系统炎症现象
（2）蛋白质量测定：总蛋白质量正常01～04gL神梅毒稍升高高达10～20gL
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