实验二十五基因重组实验Ⅳ——重组体的筛选与鉴定

实验二十五 基重组实验Ⅳ——重组体筛选鉴定
[原理]
限制性切核酸酶酶切鉴定：具体原理见实验二十
PCR反响鉴定：具体原理见实验十八
[试剂]
1DNA模板
2引物
3Taq DNA聚合酶
4dNTPs〔dATPdGTPdCTPdTTP〕
510×PCR 反响缓液：100mmolL TrisHCl pH 83500mmolL KCl15mmolL MgCl201明胶
6矿物油
1 超纯水
8EcoR I酶解反响液〔10×〕 1molL pH75 TrisHCl 05molL NaCl 01molL MgCl2
9Hind III酶解反响液〔10×〕：1molL pH74 TrisHCl 1molL NaCl 007molL MgCl2
350×TAE 电泳缓液：称取242克Tris参加571ml冰乙酸100ml 05molL EDTA调节pH80加蒸馏水1000ml
10凝胶加样缓液：025溴酚蓝025二甲苯青FF40蔗糖水溶液〔wv〕
111〔15〕琼脂糖凝胶：1×TAE 100ml含1g〔15g〕琼脂糖
[器材]
1DNA扩增仪
2电泳仪电泳槽
3微量移液器
4紫外投射仪
505ml塑料离心
6样品槽模板〔梳子〕
7锥型瓶〔100ml50ml〕
8次性塑料手套
9凝胶成系统
[操作步骤]
1 酶切反响体系建立〔20μl反响体系〕
表求配制酶切反响体系
质粒DNA
6μl

10×Buffer
2μl
HindIII
1μl

H2O
10μl
EcoR I
1μl



混匀置37℃水浴3h
2 PCR反响体系制备（25μl反响体系）
表求配制酶切反响体系
DNA
2μl

10×Buffer
25μl
dNTP
01μl

H2O
172μl
Primer1
01μl

TaqE
1μl
Primer2
01μl

50甘油
2μl
混匀2000rpm离心30sec然
94℃ 5min
94℃ 40sec
55℃ 40sec 35cycles
72℃ 90sec
72℃ 3min
3 电泳：1琼脂糖凝胶〔酶切〕15琼脂糖凝胶〔PCR反响〕
20μl酶切PCR产物进行电泳观察结果


Vocabulary in Biochemical technology

A
Absorbance

吸光度
Absorbent

吸附剂
Absorption chromatography

吸附层析
Absorption spectrum

吸收光谱
Acrylamide AaAcr

丙烯酰胺〔单体〕
Adenine A

腺嘌呤
Affinity chromatography

亲层析
Agarose

琼脂糖
Agarose gel electrophoresisAGE

琼脂糖凝胶电泳
Allele specific oligonucleotide ASO

等位基特异性寡核苷酸杂交
Ammonium persulfate AP

硫酸胺
Angle rotor

角式转头
Anion exchange chromatography

阴离子交换层析



C
Carrier ampholyte

载体两性电解质
Cation exchange chromatography

阳离子交换层析
Cellulose acetate membrane electro phoresis〔CAME〕

醋酸纤维薄膜电泳
Cellulose ionexchangers

纤维素离子交换剂
Centrifuge

离心机
Centrifugal force

离心力
Centrifugal technique

离心技术
Coenzyme

辅酶
Column chromatography

柱层析
Cytosine C

胞嘧啶



D
Denature gradient gel eletro phoresis DGGE

变性梯度凝胶电泳
Deoxyribonucleic acid DNA

脱氧核糖核酸
Dialysis

透析
Differential centrifugation

差速离心
Discontinuous PAGE

连续聚丙烯酰胺凝胶电泳



E
Eletroosmosis

电渗
Emission spectrum

发射光谱
Exclusion chromatography

排阻层析



G
Gel chromatography

凝胶层析
Gel filtration

凝胶滤
GuanineG

鸟嘌呤
H
Homogenizer

匀浆器
Holozymase

全酶



I
Ionexchange chromatography

离子交换层析
Ionexchange gel

离子交换凝胶
Ionexchange resin

离子交换树脂
Isoelectric focusing IEF

等电点聚焦
Isoenzyme

工酶



L
Ligand

配基



M
Melting temperature Tm

溶解温度
Matrix

载体
Mobile phase

流动相
Molecular sieve filtration

分子筛滤



N
NNN’N’methylenc
Bisacrylamide Bis

NNN’N’四亚甲基 双丙烯酰胺
NNN’N’tetramethylethylenedi amine TEMED

四甲基乙二胺



O
Osmosis

渗透



P
Paper chromatography

纸层析
Partition chromatography

分配层析
Partition coefficient

分配系数
Photoelectric colorimetry

光电色法
Plasmid

质粒
Polyacrylamide gel electrophoresis PAGE

聚丙烯酰胺凝胶
Polymerase chain reaction PCR

聚合酶链反响
Primer

引物



R
Relative centrifugal force RCF

相离心力
Restriction endonuclease RE

限制性切酶
Restriction fragment length polymorphism RFLP

限制性片段长度态性
Rate zonal centrifugation

速率区离心法
Reverse osmosis

反渗透
Revolution per minute rpm

分钟转速
Ribonucleic acid RNA

核糖核酸
Rotor

转头



S
Salting in

盐溶
Salting out

盐析
Saphadex

葡聚糖凝胶
SDSPAGE

SDS聚丙烯酰胺凝胶
Sedimentation coefficient

沉降系数
Sedimentation velocity

沉降速率
Sedimentation timeST

沉降时间
Sepharose

琼脂糖凝胶
Sequencing

测序
Single strand conformative polymorphism SSCP

单链构象态性
Sodium dodecyl sulfate SDS

十二烷基硫酸钠
Spectrophotometer

分光光度计
Spectrophotometery

分光光度法
Stationary phase

固定相
Swingout rotor

水式转头



T
Thinlayer chromatography TLC

薄层层析
Transmittance

透光率
Thymine T

胸腺嘧啶
Transformation

转化
Transfection

转染
Transduction

转导
Transposition

转位



U
Ultrafiltration

超滤
Uracil U

尿嘧啶



V
Visible and ultraviolet Spectro photometery

紫外见分光光度法
Vector

载体





文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传

《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档