附件1
保健食品中西非达拉非快速检测
胶体金免疫层析法
（KJ201901）
1 范围
方法规定保健食品中西非达拉非胶体金免疫层析快速筛查方法
方法适声称具抗疲劳调节免疫等功保健食品中西非达拉非成分快速筛查
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中西非达拉非等物质提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条检测卡中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线（C线）颜色深浅较样品中西非达拉非成分进行定性判定
3 试剂材料
31 试剂
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
311 甲醇：色谱纯
312 三羟甲基氨基甲烷Tris碱
313 浓盐酸
314 吐温20
315 盐酸溶液：量取浓盐酸（313）167 mL水溶解稀释100 mL
316 缓液：称取121 g Tris碱（312）加适量水溶解混匀盐酸溶液（315）调节pH80加入50 g吐温20（314）搅拌均匀定容1000 mL
32 参考物质
参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度均≥99
表1 参考物质信息表
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
西非
Sildenafil
139755832
C22H30N6O4S
47458
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
2
达拉非
Tadalafil
171596295
C22H19N3O4
38940
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
331 西非标准储备液（10 mgmL）：精密称取适量西非参考物质（32）甲醇（311）溶解稀释刻度摇匀配制成浓度10 mgmL标准储备液20℃避光保存效期1年
332 西非标准工作液（10 μgmL）：精密移取适量西非标准储备液（10 mgmL）（331）分置10 mL容量瓶中甲醇（311）稀释刻度摇匀配制成浓度10 μgmL标准工作液20℃避光保存效期3月
333 达拉非标准储备液（05 mgmL）：精密称取适量达拉非参考物质（32）甲醇（311）溶解稀释刻度摇匀配制成浓度05 mgmL标准储备液20℃避光保存效期1年
334 达拉非标准工作液（10 μgmL）：精密移取适量达拉非标准储备液（05mgmL）（333）分置10 mL容量瓶中甲醇（311）稀释刻度摇匀制成浓度10 μgmL标准工作液20℃避光保存效期3月
34 材料
西非胶体金免疫层析试剂盒配套试剂（选）适基质保健食品
达拉非胶体金免疫层析试剂盒配套试剂（选）适基质保健食品
4 设备仪器
41 设备
411 天：感量01 mg001 g
412 涡旋混合器
413 移液器：20200 μL1001000 μL5 mL
414 离心机：转速达4000 rmin
42 仪器
421 读数仪：产品配套检测仪器（选）
422 环境条件：温度1040℃相湿度≤80
5 分析步骤
51 试样制备
液体样品充分混匀固体样品充分粉碎混匀
52 试样提取净化
521 液体基质
量取05 mL±002 mL试样15 mL离心中加入4 mL缓液（316）涡旋混合30 s作测液
522 固体基质
5221 检测西非
准确称取试样05 g±001 g15 mL离心中加1 mL甲醇（311）涡旋30 s4000 rpm离心2 min静置2 min取250 µL清液2 mL离心中加入750 µL缓液（316）涡旋混合30s作测液
5222 检测达拉非
准确称取试样05 g±001 g15 mL离心中加1 mL甲醇（311）涡旋30 s4000 rpm离心2 min静置2 min取200 µL清液15 mL离心中加入3 mL缓液（316）涡旋混合30 s作测液
注：试样提取净化（52）程试剂盒说明书操作做限定
53 测定步骤
531 试纸条金标微孔测定步骤
吸取200 µL样品测液金标微孔中抽吸5~10次混合均匀室温温育5 min温育结束试纸条吸水海绵端垂直插入金标微孔中室温温育5 min微孔中取出试纸条掉试纸条端吸水海绵进行结果判定
注：测定步骤建议试剂盒说明书
532 检测卡金标微孔测定步骤
吸取200 μL述测液金标微孔中抽吸5~10次混合均匀室温温育5 min反应液全部加入检测卡加样孔中金标微孔中全部溶液滴加检测卡加样孔中温育5 min进行结果判定
注：测定步骤建议试剂盒说明书
54 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
准确称取固体空白试样05 g±001 g量取液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中5253步骤试样法操作
542 加标质控试验
准确称取固体空白试样05 g±001 g量取液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中加入适量标准工作液（332）西非参考物质浓度10 µgg10 µgmL5253步骤试样法操作
准确称取固体空白试样05 g±001 g液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中加入适量标准工作液（334）达拉非参考物质浓度10 µgg10 µgmL5253步骤试样法操作
6 结果判定
通控制线（C线）检测线（T线）颜色深浅进行结果判定目视判定示意图见图1结果判定根产品说明书进行
61 效
控制线（C线）显色表明正确操作试纸条效
62 阴性结果
控制线（C线）显色检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色深检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色相均表示样品中含测组分含量低方法检测限判阴性
63 阳性结果
控制线（C线）显色检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色明显浅检测线（T线）显色均表示样品中测组分含量高方法检测限判阳性
64 质控试验求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
图1 目视判定示意图
7 结
检测结果阳性时应结果进行确证
8 性指标
81 检出限
固体样品10 μgg液体样品10 μgmL
82 灵敏度
灵敏度≥95
83 特异性
特异性≥90
84 假阴性率
假阴性率≤5
85 假阳性率
假阳性率≤10
注：性指标计算方法见附录A
9
方法分析步骤结果判定根厂家试剂盒说明书进行应符合优方法规定性指标
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者应验证满足方法规定项性指标试剂试剂盒
方法参标准食品补充检验方法BJS201710保健食品中75种非法添加化学药物检测药品检验补充检验方法2009030补肾壮阳类中成药中PDE5型抑制剂快速检测方法
方法西非试剂盒莫西非豪莫西非羟基豪莫西非伪伐非伐非硫代艾非存交叉反应达拉非试剂盒氨基达拉非甲基达拉非存交叉反应结果判定阳性应结果进行确证
附录A
定性方法性指标计算表
表A1性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N12
N2N21+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（c2）
c2（½N12N21½1）2（N12+N21）
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：广东省食品检验
验证单位：江苏省南通市食品药品监督检测中心南京工业学
起草：刘海虹申超群邓皇翼雷毅
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保健食品中西非达拉非快速检测
胶体金免疫层析法
（KJ201901）
1 范围
方法规定保健食品中西非达拉非胶体金免疫层析快速筛查方法
方法适声称具抗疲劳调节免疫等功保健食品中西非达拉非成分快速筛查
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中西非达拉非等物质提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条检测卡中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线（C线）颜色深浅较样品中西非达拉非成分进行定性判定
3 试剂材料
31 试剂
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
311 甲醇：色谱纯
312 三羟甲基氨基甲烷Tris碱
313 浓盐酸
314 吐温20
315 盐酸溶液：量取浓盐酸（313）167 mL水溶解稀释100 mL
316 缓液：称取121 g Tris碱（312）加适量水溶解混匀盐酸溶液（315）调节pH80加入50 g吐温20（314）搅拌均匀定容1000 mL
32 参考物质
参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度均≥99
表1 参考物质信息表
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
西非
Sildenafil
139755832
C22H30N6O4S
47458
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
2
达拉非
Tadalafil
171596295
C22H19N3O4
38940
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
331 西非标准储备液（10 mgmL）：精密称取适量西非参考物质（32）甲醇（311）溶解稀释刻度摇匀配制成浓度10 mgmL标准储备液20℃避光保存效期1年
332 西非标准工作液（10 μgmL）：精密移取适量西非标准储备液（10 mgmL）（331）分置10 mL容量瓶中甲醇（311）稀释刻度摇匀配制成浓度10 μgmL标准工作液20℃避光保存效期3月
333 达拉非标准储备液（05 mgmL）：精密称取适量达拉非参考物质（32）甲醇（311）溶解稀释刻度摇匀配制成浓度05 mgmL标准储备液20℃避光保存效期1年
334 达拉非标准工作液（10 μgmL）：精密移取适量达拉非标准储备液（05mgmL）（333）分置10 mL容量瓶中甲醇（311）稀释刻度摇匀制成浓度10 μgmL标准工作液20℃避光保存效期3月
34 材料
西非胶体金免疫层析试剂盒配套试剂（选）适基质保健食品
达拉非胶体金免疫层析试剂盒配套试剂（选）适基质保健食品
4 设备仪器
41 设备
411 天：感量01 mg001 g
412 涡旋混合器
413 移液器：20200 μL1001000 μL5 mL
414 离心机：转速达4000 rmin
42 仪器
421 读数仪：产品配套检测仪器（选）
422 环境条件：温度1040℃相湿度≤80
5 分析步骤
51 试样制备
液体样品充分混匀固体样品充分粉碎混匀
52 试样提取净化
521 液体基质
量取05 mL±002 mL试样15 mL离心中加入4 mL缓液（316）涡旋混合30 s作测液
522 固体基质
5221 检测西非
准确称取试样05 g±001 g15 mL离心中加1 mL甲醇（311）涡旋30 s4000 rpm离心2 min静置2 min取250 µL清液2 mL离心中加入750 µL缓液（316）涡旋混合30s作测液
5222 检测达拉非
准确称取试样05 g±001 g15 mL离心中加1 mL甲醇（311）涡旋30 s4000 rpm离心2 min静置2 min取200 µL清液15 mL离心中加入3 mL缓液（316）涡旋混合30 s作测液
注：试样提取净化（52）程试剂盒说明书操作做限定
53 测定步骤
531 试纸条金标微孔测定步骤
吸取200 µL样品测液金标微孔中抽吸5~10次混合均匀室温温育5 min温育结束试纸条吸水海绵端垂直插入金标微孔中室温温育5 min微孔中取出试纸条掉试纸条端吸水海绵进行结果判定
注：测定步骤建议试剂盒说明书
532 检测卡金标微孔测定步骤
吸取200 μL述测液金标微孔中抽吸5~10次混合均匀室温温育5 min反应液全部加入检测卡加样孔中金标微孔中全部溶液滴加检测卡加样孔中温育5 min进行结果判定
注：测定步骤建议试剂盒说明书
54 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
准确称取固体空白试样05 g±001 g量取液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中5253步骤试样法操作
542 加标质控试验
准确称取固体空白试样05 g±001 g量取液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中加入适量标准工作液（332）西非参考物质浓度10 µgg10 µgmL5253步骤试样法操作
准确称取固体空白试样05 g±001 g液体空白试样05 mL±002 mL15 mL离心中加入适量标准工作液（334）达拉非参考物质浓度10 µgg10 µgmL5253步骤试样法操作
6 结果判定
通控制线（C线）检测线（T线）颜色深浅进行结果判定目视判定示意图见图1结果判定根产品说明书进行
61 效
控制线（C线）显色表明正确操作试纸条效
62 阴性结果
控制线（C线）显色检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色深检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色相均表示样品中含测组分含量低方法检测限判阴性
63 阳性结果
控制线（C线）显色检测线（T线）颜色控制线（C线）颜色明显浅检测线（T线）显色均表示样品中测组分含量高方法检测限判阳性
64 质控试验求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
图1 目视判定示意图
7 结
检测结果阳性时应结果进行确证
8 性指标
81 检出限
固体样品10 μgg液体样品10 μgmL
82 灵敏度
灵敏度≥95
83 特异性
特异性≥90
84 假阴性率
假阴性率≤5
85 假阳性率
假阳性率≤10
注：性指标计算方法见附录A
9
方法分析步骤结果判定根厂家试剂盒说明书进行应符合优方法规定性指标
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者应验证满足方法规定项性指标试剂试剂盒
方法参标准食品补充检验方法BJS201710保健食品中75种非法添加化学药物检测药品检验补充检验方法2009030补肾壮阳类中成药中PDE5型抑制剂快速检测方法
方法西非试剂盒莫西非豪莫西非羟基豪莫西非伪伐非伐非硫代艾非存交叉反应达拉非试剂盒氨基达拉非甲基达拉非存交叉反应结果判定阳性应结果进行确证
附录A
定性方法性指标计算表
表A1性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N12
N2N21+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（c2）
c2（½N12N21½1）2（N12+N21）
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：广东省食品检验
验证单位：江苏省南通市食品药品监督检测中心南京工业学
起草：刘海虹申超群邓皇翼雷毅
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