第九章 酶免疫技术
第节 酶免疫技术特点
酶抗体抗原结合成酶标记抗体抗原酶标抗体（抗原）抗原（抗体）特异性反应完成加入酶相应底物通酶底物显色反应抗原抗体进行定位定性定量测定分析
酶酶作底物
（）酶求：酶蛋白分子分钟催化103～104底物分子转变成色产物标记酶应符合：
1酶活性强催化反应转化率高纯度高
2易抗体抗原偶联标记酶活性保持稳定影响标记抗原抗体免疫反应性
3作专性强酶活性受样品中成分影响受检组织体液中存标记酶相源性酶抑制物均相酶免疫测定酶求抗体酶标抗原结合酶活性出现抑制激活
4酶催化底物产生产物易判断测量方法简单易行敏感重复性
5酶辅助子底物体害酶底物易配制保存酶底物应价廉易
（二）常酶
1辣根氧化物酶（HRP）：目前酶联免疫吸附试验中应广泛标记酶色糖蛋白（酶）亚铁血红蛋白（辅基）结合成复合物辅基酶活性基团酶酶活性关HRP纯度RZ（HRP分403nm275nm处吸光度值）表示RZ值应30
RZ值仅说明血红素基团HRP中含量非表示HRP制剂真正纯度RZ值高HRP意味着酶活性高RZ值酶活性关
酶活性单位U表示：1分钟1μmol底物转化产物需酶量酶变性RZ值变活性降低酶制剂时酶活性单位RZ值更重
2碱性磷酸酶（AP）：肠杆菌源AP分子量80kD酶作适pH80牛肠黏膜AP分子量100kD适pH96种AP活性高前者
3β半乳糖苷酶（βGal）：βGal源肠杆菌血中缺乏酶制备酶标志物测定时易受源性酶干扰提高特异性均相酶免疫测定
（三）常底物
1HRP底物
（1）邻苯二胺（OPD）：HRP敏感色原底物OPDHRP作显橙黄色加强酸硫酸盐酸终止反应呈棕黄色吸收峰492nm波长OPD应液稳定性差易变色需新配制1时显色反应程需避光具致癌性
（2）四甲基联苯胺（TMB）：TMBHRP作变蓝色加入硫酸终止反应变黄色吸收峰波长450nmTMB稳定性成色需避光致突变作目前ELISA中应广泛底物缺点水溶性差
（3）：5氨基水杨酸（5ASA）22联氮二（3乙基苯噻唑6磺酸）二铵盐（ABTS）
2AP底物
常硝基苯磷酸酯（pNPP）pNPPAP作产物黄色硝基酚吸收峰波长405nm
3β半乳糖苷酶（βGal）底物
常4甲基伞酮基RD半乳糖苷（4MUU）酶作生成高强度荧光物4甲基伞形酮（4MU）敏度性较HRP高30～50倍测量时需荧光计
二酶标记抗体抗原
（）酶标记抗体抗原制备
标记方法应符合：技术方法简单产率高重复性标记反应影响酶抗原抗体活性酶标志物稳定应避免酶抗体（抗原）酶标志物形成聚合物等
1戊二醛交联法：源双功交联剂
（1）步法：连接AP
①优点：操作简便效重复性
②缺点：交联时分子间例严格影响效果
（2）二步法：连接HRP
先HRP戊二醛作透析戊二醛pH95缓液中抗体作形成酶标抗体
优点：酶标志物质量较均标记效率较步法高
2改良碘酸钠法
HRP标记抗体抗原常方法
（二）酶标记物纯化鉴定
常纯化方法葡聚糖凝胶G200G150柱层析纯化50饱硫酸铵沉淀提纯等
常免疫电泳双相扩散法进行鉴定
1出现沉淀线表示酶标记物中抗体（抗原）具免疫活性
2沉淀线生理盐水漂洗滴加酶底物溶液沉淀线显色酶标记物中酶活性保留
三固相载体
均相酶免疫测定外种非均相酶免疫测定反应需分离游离结合酶标记物
固相抗体抗原抗体抗原结合固相载体表面酶免疫技术中游离结合酶标志物迅速分离常方法
（）固相载体求 结合抗体抗原容量抗体抗原牢固固定表面长期保存次洗涤易脱落影响固定抗体抗原免疫反应性反应充分进行活性基团反应溶液固相方法简便易行快速济
（二）固相载体种类选择
1塑料制品：聚苯乙烯塑料常采抗原抗体非价物理吸附方式结合载体
缺点抗体（抗原）结合容量高固相抗体（抗原）脱吸附率较高均孔间变异重复性差影响测定灵敏度精确度检测范围
目前采非价化学偶联价吸附方法进行抗原抗体固相化改善述缺点
2微粒：易抗体（抗原）形成化学偶联结合容量均匀分散整反应溶液中反应速度快制成磁化微颗粒动化检测中常
3膜载体：常硝酸纤维素膜（Nc）玻璃纤维素膜尼龙膜等通非价键吸附抗体（抗原）广泛定性半定量斑点ELISA固相载体
（三）包封闭
1包：抗原抗体结合固相载体程普遍聚苯乙烯载体抗原抗体溶缓液（常pH96碳酸盐缓液）中加ELISA板孔中4℃夜包固相载体低温放置段时间失免疫活性
2封闭：包蛋白质浓度低固相载体表面蛋白质完全覆盖加入血清标酶结合物中蛋白质会部分吸附固相载体表面产生非特异性显色致底偏高种情况需1～5牛血清白蛋白5～20牛血清包次消干扰程称封闭
第二节 酶免疫技术分类
包括两种：
酶免疫组织化学技术：组织切片标中抗原定位
酶免疫测定技术（EIA）：液体标中抗原抗体定性定量根抗原抗体反应否需结合游离酶标志物分离EIA般分均相异相两种类型
均相酶免疫测定
利酶标志物相应抗原抗体结合标记酶活性会发生改变原理结合游离酶标志物分离情况通测定标记酶活性改变确定抗原抗体含量该法分子激素半抗原（药物）测定均相法优点适合动化测定反应中抑制酶活力较需灵敏光度计测定反应温度需严格控制
（）酶放免疫测定技术（EMIT） EMIT基原理半抗原酶结合成酶标半抗原抗体结合标酶抗体密切接触酶活性中心受影响活性抑制反应酶活力标中半抗原量呈定例酶活力测定结果推算出标中半抗原量
（二）克隆酶供体免疫分析（CDEIA） DNA重组技术分合成某种功酶（βD半乳糖苷酶）分子两片段片段称酶受体（EA）分子称作酶供体（ED）两者单独均酶活性定条件结合形成四聚体方具酶活性克隆酶供体免疫测定（CDEIA）反应模式竞争法
标中抗原酶供体（ED）标记抗原特异性抗体竞争结合形成两种抗原抗体复合物ED标记抗原抗体结合空间位阻酶受体（EA）结合游离ED标记抗原EDEA结合形成具活性酶加入底物测定酶活性酶活力标中抗原含量成正
二异相酶免疫测定
目前应广泛类标记免疫测定技术
（）异相液相酶免疫测定 检测样品中极微量短肽激素某药物等分子半抗原酶标志物具更稳定性放射性污染
1衡法：测样品抗原酶标抗原特异性抗体进行次性温育反应达衡测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液呈色吸光度值
2非衡法：先样品（标准品）抗体混合反应达衡然加入酶标记抗原继续温育段时间测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液呈色吸光度值
（二）固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验（ELISA）
第三节 酶联免疫吸附试验
基原理
抗原抗体结合固相载体表面测定时受检样品酶标记抗原抗体结合固相载体抗原抗体反应形成抗原抗体复合物洗未结合成分加入底物底物固相载体酶催化变成色产物：
①固相抗原抗体
②酶标记抗原抗体
③酶反应底物三种试剂反应必备
二方法类型反应原理
（）检测抗原方法
1双抗体夹心法：属非竞争结合检测抗原常方法检测含少两抗原决定簇价抗原原理先特异性抗体固相载体连接加入测标形成固相抗原抗体复合物加入酶标抗体形成双抗体夹心洗涤加底物显色根颜色反应程度进行该抗原定性定量检测
血清标中类风湿子（RF）存出现假阳性反应RF种抗变性IgG身抗体种动物变性IgGFc部分结合RF作固相抗体酶标抗体间桥接抗原
双抗体夹心法适二价较分子抗原测定分子半抗原检测
2双位点步法：针抗原分子两空间距离较远决定簇包种单抗酶标记种单抗测定时测抗原酶标抗体时加入温育洗涤加入底物显色测抗原浓度高时量抗原分固相抗体酶标抗体结合抑制夹心复合物形成出现钩状效应显色降低甚假阴性必时标适稀释重复测定
3竞争法
测定分子抗原药物激素等原理先抗分子特异性抗体包固相然时加入测样酶标记分子两种分子竞争固相抗分子特异性抗体结合温育定时间洗涤加入酶底物显色
特点：
①酶标记抗原样品标准品中非标记抗原具相固相抗体结合力
②反应体系中固相抗体酶标抗原固定限量前者结合位点少酶标记非标记抗原分子数量
③免疫反应结合固相载体复合物中测定酶标抗原量（酶活性）样品标准品中非标记抗原浓度成反
（二）检测抗体方法
1间接法：常方法属非竞争性结合试验原理：抗原包固相载体加入测样形成固相抗原受检抗体复合物温育洗涤加入酶标二抗常羊抗IgG固相形成固相抗原测抗体酶标抗抗体复合物加入底物根显色深浅确定测抗体含量检测IgG类型抗体
2双抗原夹心法
法检测类抗体双抗原夹心法灵敏度特异性高间接法原理操作步骤类似双抗体夹心法采步法机体产生抗体IgG效价限般会出现钩状效应
床乙型肝炎表面抗体测定常法
3竞争法
般抗体检测较少采相应抗原材料中含抗IgG反应物质易足够纯化抗原抗原结合特异性稳定时采种方法测定抗体目前床运较乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）检测
竞争抗体测抗体特异性亲力越接测定性越强
4捕获法称反间接法
血清中某种抗体亚型成分（IgM）测定常病原体急性感染诊断中IgM型抗体原理：先针IgM二抗包固相载体加入测标中IgM类抗体固相抗体捕获加入特异性抗原固相捕获IgM抗体结合加入酶标记特异性抗原抗体形成固相二抗IgM抗原酶标记抗体复合物加底物显色测标中IgM否存含量进行测定
第四节 酶免疫测定应
溶性抗原抗体系统均酶免疫测定检测
均相酶免疫测定药物分子物质检测
非均相免疫测定中ELISA种物质检测中广泛
实战演练
目前酶免疫技术中应较广提纯较简便酶
A脲酶
B碱性磷酸酶
C葡萄糖氧化酶
D辣根氧化物酶
E半乳糖苷酶
『正确答案』D
『答案解析』HRP目前酶联免疫吸附试验中应广泛标记酶
酶放免疫测定技术（EMIT）检测
A抗原
B抗体
C半抗原
D完全抗体
E抗原抗体复合物
『正确答案』C
『答案解析』酶放免疫测定技术（EMIT）检测半抗原
关酶标记抗体抗原正确
A碘酸盐氧化法HRP标记
B未标记游离抗体酶标记抗体竞争固相抗原
C制备标记物须纯化游离酶未标记抗原抗体成分测定程中洗掉
D制备结合物需纯化
E标价物需鉴定
『正确答案』C
『答案解析』批制备酶标志物进行质量标记率鉴定质量鉴定包括酶活性抗体（抗原）免疫活性鉴定常免疫电泳双相扩散法出现沉淀线表示酶标记物中抗体（抗原）具免疫活性沉淀线生理盐水反复漂洗滴加酶底物溶液沉淀线显色表示酶标记物中酶活性保留直接ELISA方法测定
关酶联免疫吸附试验（ELISA）错误
A属液相固相酶免疫测定
B固相常聚苯乙烯反应板
C通洗涤未结合成分
D底物显色
E定性定量分析
『正确答案』A
『答案解析』酶联免疫吸附试验（ELISA）属固相酶免疫测定
酶免疫技术中常固相载体
A聚氯乙烯
B聚苯乙烯
C硝酸纤维素膜
D琼脂糖
E尼龙膜
『正确答案』B
『答案解析』酶免疫技术中常固相载体聚苯乙烯
酶免疫技术中悬浮溶液中具液相反应速率固相载体
A聚氯乙烯
B聚苯乙烯
C硝酸纤维素膜
D磁性微粒
E尼龙膜
『正确答案』D
『答案解析』酶免疫技术中悬浮溶液中具液相反应速率固相载体磁性微粒
抗原抗体固相化程称
A吸附
B包
C封闭
D标记
E交联
『正确答案』B
『答案解析』抗原抗体固相化程称包
ELISA技术中常检测抗体方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D捕获法
E应生物素亲素ELISA
『正确答案』B
『答案解析』ELISA技术中常检测抗体方法间接法
列关双位点步法ELISA叙述中错误
A针抗原决定簇两种单克隆抗体作酶标抗体
B种单克隆抗体作固相抗体种作酶标抗体
C采高亲力单克隆抗体提高测定敏感性特异性
D标酶标抗体时加入
E标中抗原高时会出现钩状效应
『正确答案』A
『答案解析』双位点步法：双抗体夹心法基础进步发展双位点步法该法针抗原分子两空间距离较远决定簇两种单克隆抗体包种单抗酶标记种单抗测定时含测抗原标酶标抗体时加入进行反应两种抗体互干扰次温育洗涤加入底物进行显色测定测抗原浓度高时量抗原分固相抗体酶标抗体结合抑制夹心复合物形成出现钩状效应（hook effect）显色降低严重时出现假阴性结果必时标适稀释重复测定应法必须注意问题
ELISA技术中测孔（）显色颜色深浅测抗原抗体呈负相关
A双抗体夹心法
B双位点步法
C间接法测抗体
D竞争法
E捕获法
『正确答案』D
『答案解析』ELISA技术中测孔（）显色颜色深浅测抗原抗体呈负相关竞争法
双位点步法钩状效应产生
A标中抗原纯
B洗涤充分
C孵育时间长
D酶标抗体量
E标中抗原浓度高
『正确答案』E
『答案解析』双位点步法钩状效应产生标中抗原浓度高
种标记物检测种抗原相应抗体ELISA方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D双抗原夹心法
E双位点步法
『正确答案』B
『答案解析』种标记物检测种抗原相应抗体ELISA方法间接法
关ELISA竞争法叙述中正确
A检测抗原
B测成分优先酶标记物固相结合
C测物含量标记物结合机会少
D测显色颜色越淡表示测物含量越少
E检测抗体
『正确答案』C
『答案解析』关ELISA竞争法叙述中正确测物含量标记物结合机会少
ELISA间接法中固相包
A抗体
B完全抗体
C抗原
D抗抗体
E酶标抗体
『正确答案』C
『答案解析』ELISA间接法中固相包抗原
床检测IgM抗体常ELISA方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D双抗原夹心法
E捕获法
『正确答案』E
『答案解析』捕获法称反间接法血清中某种抗体亚型成分（IgM）测定目前常病原体急性感染诊断中IgM型抗体
酶免疫技术分两类酶免疫测定
A均相异相
B固相液相
C酶免疫组化酶免疫测定
D均相固相
E异相液相
『正确答案』C
『答案解析』酶免疫技术分两类酶免疫测定酶免疫组化酶免疫测定
ELISA般检测
A病原体抗体
BIg补体肿瘤标志物等蛋白质
C非肽类激素
D药物
E半抗原
『正确答案』E
『答案解析』ELISA般检测半抗原半抗原般均相酶免疫测定法
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
第节 酶免疫技术特点
酶抗体抗原结合成酶标记抗体抗原酶标抗体（抗原）抗原（抗体）特异性反应完成加入酶相应底物通酶底物显色反应抗原抗体进行定位定性定量测定分析
酶酶作底物
（）酶求：酶蛋白分子分钟催化103～104底物分子转变成色产物标记酶应符合：
1酶活性强催化反应转化率高纯度高
2易抗体抗原偶联标记酶活性保持稳定影响标记抗原抗体免疫反应性
3作专性强酶活性受样品中成分影响受检组织体液中存标记酶相源性酶抑制物均相酶免疫测定酶求抗体酶标抗原结合酶活性出现抑制激活
4酶催化底物产生产物易判断测量方法简单易行敏感重复性
5酶辅助子底物体害酶底物易配制保存酶底物应价廉易
（二）常酶
1辣根氧化物酶（HRP）：目前酶联免疫吸附试验中应广泛标记酶色糖蛋白（酶）亚铁血红蛋白（辅基）结合成复合物辅基酶活性基团酶酶活性关HRP纯度RZ（HRP分403nm275nm处吸光度值）表示RZ值应30
RZ值仅说明血红素基团HRP中含量非表示HRP制剂真正纯度RZ值高HRP意味着酶活性高RZ值酶活性关
酶活性单位U表示：1分钟1μmol底物转化产物需酶量酶变性RZ值变活性降低酶制剂时酶活性单位RZ值更重
2碱性磷酸酶（AP）：肠杆菌源AP分子量80kD酶作适pH80牛肠黏膜AP分子量100kD适pH96种AP活性高前者
3β半乳糖苷酶（βGal）：βGal源肠杆菌血中缺乏酶制备酶标志物测定时易受源性酶干扰提高特异性均相酶免疫测定
（三）常底物
1HRP底物
（1）邻苯二胺（OPD）：HRP敏感色原底物OPDHRP作显橙黄色加强酸硫酸盐酸终止反应呈棕黄色吸收峰492nm波长OPD应液稳定性差易变色需新配制1时显色反应程需避光具致癌性
（2）四甲基联苯胺（TMB）：TMBHRP作变蓝色加入硫酸终止反应变黄色吸收峰波长450nmTMB稳定性成色需避光致突变作目前ELISA中应广泛底物缺点水溶性差
（3）：5氨基水杨酸（5ASA）22联氮二（3乙基苯噻唑6磺酸）二铵盐（ABTS）
2AP底物
常硝基苯磷酸酯（pNPP）pNPPAP作产物黄色硝基酚吸收峰波长405nm
3β半乳糖苷酶（βGal）底物
常4甲基伞酮基RD半乳糖苷（4MUU）酶作生成高强度荧光物4甲基伞形酮（4MU）敏度性较HRP高30～50倍测量时需荧光计
二酶标记抗体抗原
（）酶标记抗体抗原制备
标记方法应符合：技术方法简单产率高重复性标记反应影响酶抗原抗体活性酶标志物稳定应避免酶抗体（抗原）酶标志物形成聚合物等
1戊二醛交联法：源双功交联剂
（1）步法：连接AP
①优点：操作简便效重复性
②缺点：交联时分子间例严格影响效果
（2）二步法：连接HRP
先HRP戊二醛作透析戊二醛pH95缓液中抗体作形成酶标抗体
优点：酶标志物质量较均标记效率较步法高
2改良碘酸钠法
HRP标记抗体抗原常方法
（二）酶标记物纯化鉴定
常纯化方法葡聚糖凝胶G200G150柱层析纯化50饱硫酸铵沉淀提纯等
常免疫电泳双相扩散法进行鉴定
1出现沉淀线表示酶标记物中抗体（抗原）具免疫活性
2沉淀线生理盐水漂洗滴加酶底物溶液沉淀线显色酶标记物中酶活性保留
三固相载体
均相酶免疫测定外种非均相酶免疫测定反应需分离游离结合酶标记物
固相抗体抗原抗体抗原结合固相载体表面酶免疫技术中游离结合酶标志物迅速分离常方法
（）固相载体求 结合抗体抗原容量抗体抗原牢固固定表面长期保存次洗涤易脱落影响固定抗体抗原免疫反应性反应充分进行活性基团反应溶液固相方法简便易行快速济
（二）固相载体种类选择
1塑料制品：聚苯乙烯塑料常采抗原抗体非价物理吸附方式结合载体
缺点抗体（抗原）结合容量高固相抗体（抗原）脱吸附率较高均孔间变异重复性差影响测定灵敏度精确度检测范围
目前采非价化学偶联价吸附方法进行抗原抗体固相化改善述缺点
2微粒：易抗体（抗原）形成化学偶联结合容量均匀分散整反应溶液中反应速度快制成磁化微颗粒动化检测中常
3膜载体：常硝酸纤维素膜（Nc）玻璃纤维素膜尼龙膜等通非价键吸附抗体（抗原）广泛定性半定量斑点ELISA固相载体
（三）包封闭
1包：抗原抗体结合固相载体程普遍聚苯乙烯载体抗原抗体溶缓液（常pH96碳酸盐缓液）中加ELISA板孔中4℃夜包固相载体低温放置段时间失免疫活性
2封闭：包蛋白质浓度低固相载体表面蛋白质完全覆盖加入血清标酶结合物中蛋白质会部分吸附固相载体表面产生非特异性显色致底偏高种情况需1～5牛血清白蛋白5～20牛血清包次消干扰程称封闭
第二节 酶免疫技术分类
包括两种：
酶免疫组织化学技术：组织切片标中抗原定位
酶免疫测定技术（EIA）：液体标中抗原抗体定性定量根抗原抗体反应否需结合游离酶标志物分离EIA般分均相异相两种类型
均相酶免疫测定
利酶标志物相应抗原抗体结合标记酶活性会发生改变原理结合游离酶标志物分离情况通测定标记酶活性改变确定抗原抗体含量该法分子激素半抗原（药物）测定均相法优点适合动化测定反应中抑制酶活力较需灵敏光度计测定反应温度需严格控制
（）酶放免疫测定技术（EMIT） EMIT基原理半抗原酶结合成酶标半抗原抗体结合标酶抗体密切接触酶活性中心受影响活性抑制反应酶活力标中半抗原量呈定例酶活力测定结果推算出标中半抗原量
（二）克隆酶供体免疫分析（CDEIA） DNA重组技术分合成某种功酶（βD半乳糖苷酶）分子两片段片段称酶受体（EA）分子称作酶供体（ED）两者单独均酶活性定条件结合形成四聚体方具酶活性克隆酶供体免疫测定（CDEIA）反应模式竞争法
标中抗原酶供体（ED）标记抗原特异性抗体竞争结合形成两种抗原抗体复合物ED标记抗原抗体结合空间位阻酶受体（EA）结合游离ED标记抗原EDEA结合形成具活性酶加入底物测定酶活性酶活力标中抗原含量成正
二异相酶免疫测定
目前应广泛类标记免疫测定技术
（）异相液相酶免疫测定 检测样品中极微量短肽激素某药物等分子半抗原酶标志物具更稳定性放射性污染
1衡法：测样品抗原酶标抗原特异性抗体进行次性温育反应达衡测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液呈色吸光度值
2非衡法：先样品（标准品）抗体混合反应达衡然加入酶标记抗原继续温育段时间测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液呈色吸光度值
（二）固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验（ELISA）
第三节 酶联免疫吸附试验
基原理
抗原抗体结合固相载体表面测定时受检样品酶标记抗原抗体结合固相载体抗原抗体反应形成抗原抗体复合物洗未结合成分加入底物底物固相载体酶催化变成色产物：
①固相抗原抗体
②酶标记抗原抗体
③酶反应底物三种试剂反应必备
二方法类型反应原理
（）检测抗原方法
1双抗体夹心法：属非竞争结合检测抗原常方法检测含少两抗原决定簇价抗原原理先特异性抗体固相载体连接加入测标形成固相抗原抗体复合物加入酶标抗体形成双抗体夹心洗涤加底物显色根颜色反应程度进行该抗原定性定量检测
血清标中类风湿子（RF）存出现假阳性反应RF种抗变性IgG身抗体种动物变性IgGFc部分结合RF作固相抗体酶标抗体间桥接抗原
双抗体夹心法适二价较分子抗原测定分子半抗原检测
2双位点步法：针抗原分子两空间距离较远决定簇包种单抗酶标记种单抗测定时测抗原酶标抗体时加入温育洗涤加入底物显色测抗原浓度高时量抗原分固相抗体酶标抗体结合抑制夹心复合物形成出现钩状效应显色降低甚假阴性必时标适稀释重复测定
3竞争法
测定分子抗原药物激素等原理先抗分子特异性抗体包固相然时加入测样酶标记分子两种分子竞争固相抗分子特异性抗体结合温育定时间洗涤加入酶底物显色
特点：
①酶标记抗原样品标准品中非标记抗原具相固相抗体结合力
②反应体系中固相抗体酶标抗原固定限量前者结合位点少酶标记非标记抗原分子数量
③免疫反应结合固相载体复合物中测定酶标抗原量（酶活性）样品标准品中非标记抗原浓度成反
（二）检测抗体方法
1间接法：常方法属非竞争性结合试验原理：抗原包固相载体加入测样形成固相抗原受检抗体复合物温育洗涤加入酶标二抗常羊抗IgG固相形成固相抗原测抗体酶标抗抗体复合物加入底物根显色深浅确定测抗体含量检测IgG类型抗体
2双抗原夹心法
法检测类抗体双抗原夹心法灵敏度特异性高间接法原理操作步骤类似双抗体夹心法采步法机体产生抗体IgG效价限般会出现钩状效应
床乙型肝炎表面抗体测定常法
3竞争法
般抗体检测较少采相应抗原材料中含抗IgG反应物质易足够纯化抗原抗原结合特异性稳定时采种方法测定抗体目前床运较乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）检测
竞争抗体测抗体特异性亲力越接测定性越强
4捕获法称反间接法
血清中某种抗体亚型成分（IgM）测定常病原体急性感染诊断中IgM型抗体原理：先针IgM二抗包固相载体加入测标中IgM类抗体固相抗体捕获加入特异性抗原固相捕获IgM抗体结合加入酶标记特异性抗原抗体形成固相二抗IgM抗原酶标记抗体复合物加底物显色测标中IgM否存含量进行测定
第四节 酶免疫测定应
溶性抗原抗体系统均酶免疫测定检测
均相酶免疫测定药物分子物质检测
非均相免疫测定中ELISA种物质检测中广泛
实战演练
目前酶免疫技术中应较广提纯较简便酶
A脲酶
B碱性磷酸酶
C葡萄糖氧化酶
D辣根氧化物酶
E半乳糖苷酶
『正确答案』D
『答案解析』HRP目前酶联免疫吸附试验中应广泛标记酶
酶放免疫测定技术（EMIT）检测
A抗原
B抗体
C半抗原
D完全抗体
E抗原抗体复合物
『正确答案』C
『答案解析』酶放免疫测定技术（EMIT）检测半抗原
关酶标记抗体抗原正确
A碘酸盐氧化法HRP标记
B未标记游离抗体酶标记抗体竞争固相抗原
C制备标记物须纯化游离酶未标记抗原抗体成分测定程中洗掉
D制备结合物需纯化
E标价物需鉴定
『正确答案』C
『答案解析』批制备酶标志物进行质量标记率鉴定质量鉴定包括酶活性抗体（抗原）免疫活性鉴定常免疫电泳双相扩散法出现沉淀线表示酶标记物中抗体（抗原）具免疫活性沉淀线生理盐水反复漂洗滴加酶底物溶液沉淀线显色表示酶标记物中酶活性保留直接ELISA方法测定
关酶联免疫吸附试验（ELISA）错误
A属液相固相酶免疫测定
B固相常聚苯乙烯反应板
C通洗涤未结合成分
D底物显色
E定性定量分析
『正确答案』A
『答案解析』酶联免疫吸附试验（ELISA）属固相酶免疫测定
酶免疫技术中常固相载体
A聚氯乙烯
B聚苯乙烯
C硝酸纤维素膜
D琼脂糖
E尼龙膜
『正确答案』B
『答案解析』酶免疫技术中常固相载体聚苯乙烯
酶免疫技术中悬浮溶液中具液相反应速率固相载体
A聚氯乙烯
B聚苯乙烯
C硝酸纤维素膜
D磁性微粒
E尼龙膜
『正确答案』D
『答案解析』酶免疫技术中悬浮溶液中具液相反应速率固相载体磁性微粒
抗原抗体固相化程称
A吸附
B包
C封闭
D标记
E交联
『正确答案』B
『答案解析』抗原抗体固相化程称包
ELISA技术中常检测抗体方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D捕获法
E应生物素亲素ELISA
『正确答案』B
『答案解析』ELISA技术中常检测抗体方法间接法
列关双位点步法ELISA叙述中错误
A针抗原决定簇两种单克隆抗体作酶标抗体
B种单克隆抗体作固相抗体种作酶标抗体
C采高亲力单克隆抗体提高测定敏感性特异性
D标酶标抗体时加入
E标中抗原高时会出现钩状效应
『正确答案』A
『答案解析』双位点步法：双抗体夹心法基础进步发展双位点步法该法针抗原分子两空间距离较远决定簇两种单克隆抗体包种单抗酶标记种单抗测定时含测抗原标酶标抗体时加入进行反应两种抗体互干扰次温育洗涤加入底物进行显色测定测抗原浓度高时量抗原分固相抗体酶标抗体结合抑制夹心复合物形成出现钩状效应（hook effect）显色降低严重时出现假阴性结果必时标适稀释重复测定应法必须注意问题
ELISA技术中测孔（）显色颜色深浅测抗原抗体呈负相关
A双抗体夹心法
B双位点步法
C间接法测抗体
D竞争法
E捕获法
『正确答案』D
『答案解析』ELISA技术中测孔（）显色颜色深浅测抗原抗体呈负相关竞争法
双位点步法钩状效应产生
A标中抗原纯
B洗涤充分
C孵育时间长
D酶标抗体量
E标中抗原浓度高
『正确答案』E
『答案解析』双位点步法钩状效应产生标中抗原浓度高
种标记物检测种抗原相应抗体ELISA方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D双抗原夹心法
E双位点步法
『正确答案』B
『答案解析』种标记物检测种抗原相应抗体ELISA方法间接法
关ELISA竞争法叙述中正确
A检测抗原
B测成分优先酶标记物固相结合
C测物含量标记物结合机会少
D测显色颜色越淡表示测物含量越少
E检测抗体
『正确答案』C
『答案解析』关ELISA竞争法叙述中正确测物含量标记物结合机会少
ELISA间接法中固相包
A抗体
B完全抗体
C抗原
D抗抗体
E酶标抗体
『正确答案』C
『答案解析』ELISA间接法中固相包抗原
床检测IgM抗体常ELISA方法
A双抗体夹心法
B间接法
C竞争法
D双抗原夹心法
E捕获法
『正确答案』E
『答案解析』捕获法称反间接法血清中某种抗体亚型成分（IgM）测定目前常病原体急性感染诊断中IgM型抗体
酶免疫技术分两类酶免疫测定
A均相异相
B固相液相
C酶免疫组化酶免疫测定
D均相固相
E异相液相
『正确答案』C
『答案解析』酶免疫技术分两类酶免疫测定酶免疫组化酶免疫测定
ELISA般检测
A病原体抗体
BIg补体肿瘤标志物等蛋白质
C非肽类激素
D药物
E半抗原
『正确答案』E
『答案解析』ELISA般检测半抗原半抗原般均相酶免疫测定法
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
