ABO血型鉴定作业指导书


    标题:ABO血型鉴定作业指导书 版本号:A 修订号:0 文件编号:JAZYY--LJ-SOP-018 发布日期:2006年06月06日 生效日期:2006年07月01日 发布部门:管理层 编制人:*** 审核人: ** 批准人(签字): 页码:第 1 页 , 共 5 页 ABO血型鉴定(玻片法)标准操作程序 1 检验目的 鉴定ABO血型,不仅对某种具体疾病的诊断与治疗如母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病,还能对输血、器官移植具有重要意义(受者与供者ABO血型必须完全符合后才能输血或移植) 2 检测原理 红细胞血型抗原与相应抗体特异结合,可发生凝集反应。通过正、反定型试验来确定ABO血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和(或)B抗原;反定型是用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A 和(或)抗B抗体。 3 性能参数 红细胞血型鉴定是一个定性试验,目前还没有测定性能指标。 4 标本 4.1 抽取患者静脉血标本3mL置于紫色瓶盖的真空试管内(内含EDTA-K2抗凝剂)。 4.2 采血后应立即送到临检科血型室。 4.3 样品收到后立即分离血浆(以备反定使用),不能及时鉴定的血液标本应存2~8℃冰箱保存。 4.4 严重溶血或脂血的标本不能测定。 5 设备和试剂 5.1 血型定型试剂:标准抗血清、标准血球(长春生物制品研究所)。 5.2 血型定型试剂应存放在2~8℃冰箱保存。 5.3 标准血球使用前必须颠倒彻底混匀,超过失效期的所有试剂不能使用。 5.4 清洁的一次性塑料试管(配患者5%红细胞盐水悬液,分离患者血浆标本使用)。 6 容器和添加剂 采集血样使用一次性含EDTA-K2抗凝剂的真空试管(紫色盖)。 7 试剂鉴定步骤 每一批试剂必须做效价、亲和力及特异性测定。 7.1 标准血清效价滴定 7.1.1 取清洁干燥的一次性塑料试管,分别标明A、B,每排标明稀释倍数2、4…….264,最后一管为对照管。 7.1.2 每管各加生理盐水0.2mL。 7.1.3 第一排第一管加标准抗B血清0.2mL,第二排第一管加标准抗A血清0.2mL。 7.1.4 分别用吸管将第一管内的溶液吸放3次,使之混均,吸0.2mL至第二管并混均,依次连续稀释至第8管,混均后弃去0.2mL,最后一管不加血清,作为盐水对照。 7.1.5 分别加入相应的2%红细胞悬液0.2mL,既第一排加B型红细胞,第二排加A型红细胞。 7.1.6 将试管架振摇使之混均,置室温一小时,用肉眼观察结果。对照管应无凝集现象。抗A效价应不低于1:128,抗B不低于1:64为合格。 7.2 标准血清亲和力试验 取清洁玻片1块,分别标明抗A、抗B,各取相应的标准血清0.5mL,放置标记处,在吸取10%相应红细胞盐水悬液0.1mL,置于血清旁,摇动玻片使血清与红细胞混合,同时开始记时,记录开始出现凝集的时间,3min时观察凝块的大小,抗血清的亲和力以在15s内开始凝集,3min时,凝块达1mm2以上者为合格。 7.3 标准血清特异性测定 7.3.1 任意取10名O型人红细胞,1名A型和B型红细胞,分别配成5%红细胞盐水悬液。 7.3.2 取清洁一次性的试管12支,各加受检标准抗血清1滴,第1~第10分别加如O型红细胞悬液1滴,第11管加入A型红细胞悬液1滴第12管加入B红细胞悬液1滴,混匀,置室温1h,观察结果。 7.3.3 如果受检血清同10个O型红细胞和同型红细胞都不凝,只与含相应抗原的红细胞凝集,则其特异性合格。 7.4 标准血球特异性、亲和力测定 对于标准血球试剂,我们用以鉴定合格的标准血清做其特异性测定,亲和力试验,方法如下: 7.4.1 取4支清洁的一次试管,各加以鉴定合格的标准血清抗A,随机取4盒新到标准血球A血球分别加入4支试管内,混匀,室温1h,观察结果。 7.4.2 取4支清洁的一次性试管,各加以鉴定合格的标准血清抗B,随机取4盒新到标准血球B血球分别加入4支试管内,混匀,室温1h,观察结果。 7.4.3 如果出现特异性凝集,则其特异性合格。 7.4.4 亲和力参照血清方法。 8 操作步骤 8.1 5%的红细胞盐水悬液的配制:取患者压积红细胞1滴,加0.8mL或(16滴)盐水将患者血配制成5%的红细胞悬液 8.2正定型:取试管2支,分别标明抗A、抗B,并分别加入标准的抗A、抗B血清各2滴,加受检者的5%红细胞悬液各2滴,离心1000rpm一分钟,先观察试管中上清液有否溶血,然后轻摇试管,肉眼及显微镜观察是否凝集,按下表报告结果。 8.3反定型:取试管3支,分别标明A、B、O,并分别加入5%标准A、B、O型红细胞悬液各2滴,加受检者的血清每管2滴,离心1000rpm一分钟,先观察试管中上清液有否溶血,然后轻摇试管,肉眼及显微镜观察是否凝集,按下表报告结果。 ABO血型正反定型结果判断 (“+”为凝集,“-”为不凝集) 分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+标准红细胞 抗-A血清 抗-B血清 A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞 + - - + - - + + A B O AB - + - + - - + + - - - - 9 质量控制措施 对外购标准血清及标准红细胞分别作特异性、效价及亲和力鉴定。 10 干扰因素 冷凝集:该试验应在常温下进行以防冷凝;脂血;溶血。 11 结果计算及测量不确定度 红细胞血型鉴定无结果计算及测量不确定度。 12 生物参考区间 红细胞血型人人都存在,无生物参考区间。 13 患者检验结果可报告区间 红细胞血型鉴定患者检验结果可报告区间为A型、B型、AB型和O型。 14 警告/危急值 红细胞血型鉴定无警告/危急值。 15 实验室解释 每个人都有ABO血型中的某种抗原及相应的天然抗体。血型检查的重要性不在于某种具体疾病的诊断与治疗,而在于: 15.1 输血:血液是人类赖以生存的重要成分。循环血量不足或血细胞的减少(大失血或贫血等),均会发生许多临床症状,甚至危及生命,此时输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型,选择血型相同的供血者,进行交叉配血完全相合才能输血。 15.2 母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病,主要是依靠血型血清学检查来诊断。 15.3 器官移植时,受者与供者也必须ABO血型相符才能移植。血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。 16 安全防护措施 血型检验过程中,要穿好工作衣、带防护口罩、手套;严格按操作规程,检验结束后,要用0.2%过氧乙酸溶液擦拭实验台、显微镜手柄、载物台等。 17 变异的潜在来源 17.1 新生儿、年老体弱者ABO血型抗体反应较弱,因而观察结果时,不可用力摇动,以免弱凝集散开而呈阴性结果。 17.2 由于新鲜血清中有补体存在,抗体与相应抗原结合后,可发生溶血,故观察结果时发现有溶血现象或镜下红细胞有减少趋向,其意义与凝集相同,表现配血不合。 17.3 红细胞或血清被细菌或病毒污染后,出现细菌性凝集。 17.4 患者未产生ABO抗体或抗体抑制这种情况可见于;①新生儿,4~6个月内的婴儿反向定型时可能不凝集或凝集很弱,且新生儿抗体多来自母亲,故反定向意义不大;②随年龄的增长老年人抗体水平的下降:③白血病、淋巴瘤以及使用免疫抑制药物患者;④骨髓移植患者等。 17.5 被检红细胞异常 ①弱A或弱B亚型;②白血病时可使A或B抗原减弱,而误定为O型;③霍奇金病也有类似白血病的情况;④获得性B或获得性A表现等。 17.6 被检者血浆成分异常 ①某些疾病如多发性骨髓瘤、霍奇金肉瘤时,可使血浆纤维蛋白原水平升高易形成串状物,外观类似凝集;②应用血浆扩溶剂如低分子右旋糖酐、胰腺癌等,血浆可有过多的可溶性血型物质,中和了试剂中抗A或抗B。 18 报告发送时间与标本保存 18.1 普通鉴定标本,当日下午4点发出报告,急诊标本在无特殊疑难血型时,接到标本后40分钟报告鉴定结果。 18.2 血型标本鉴定后标本保留二周。 19 参考文献 1 叶应妩, 王毓三主编. 全国临床检验操作规程. 中华人民共和国卫生部医政司. 南京. 第二版. 1997. 2.临床基础检验学(全国医学专科学校教材,人民卫生出版社)。 本文档由香当网(https://www.xiangdang.net)用户上传

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    文档贡献者

    旭阳1

    贡献于2019-06-11

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