革兰染色血浆凝固酶实验
实验目：
掌握革兰染色法原理实验步骤理解血浆凝固酶试验原理掌握血浆凝固酶试验操作方法结果判断
试验仪器试剂：
仪器：载玻片特种铅笔试夹酒精灯火机接种环染色盘显微镜
试剂：龙胆紫溶液碘溶液脱色液沙黄溶液生理盐水蒸馏水菌种金黄色葡萄球菌培养物EDTA抗凝兔血浆等
实验原理：
革兰染色：细菌显色反应细胞壁乙醇通透性抗脱色力差异肽聚糖层厚度结构决定结晶紫染色细胞碘液处理形成溶性复合物乙醇溶解染色前二步结果样G+细胞中乙醇厚肽聚糖层脱水导致孔隙变结晶紫碘复合物分子太通细胞壁保持着紫色G细胞中乙醇处理破坏胞壁外膜损伤肽聚糖层细胞质膜乙醇溶解结晶紫碘复合物细胞中渗漏出衬托染色液复染时显现红色红色染料然进入已染成紫色G+细胞紫色盖没红色显示出
血浆凝固酶试验：致病葡萄球菌分泌游离型凝固酶菌体外游离型凝固酶血浆中协子激活凝酶样物质液态纤维蛋白原转变固态纤维蛋白血浆凝固
实验步骤：
革兰染色：1 标记：特种铅笔载玻片画圈致确定菌液滴位置
2 涂片：滴加滴菌生理盐水洁净载玻片火机点燃酒精灯灼烧接种环接种环冷培养基中取细菌然菌落菌苔轻轻涂布散开（菌液标直接涂载玻片）涂片完成消毒接种环熄灭酒精灯
3 干燥：涂片室温然干燥酒精灯略加温迅速干燥勿火焰（火焰方15cm左右手背试温求玻片背面触手背皮肤热烫宜）
4 固定：高温进行固定夹子夹取载玻片端标面酒精外焰快速回移动3~4次约3~4秒放置冷染色
5 染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色10 s 蒸馏水洗沥水分
（2）煤染：碘液染色10 s 蒸馏水洗沥水分
（3）脱色：脱色剂脱色1020 s 蒸馏水洗沥水分
（4）复染水洗：沙黄溶液染色10 s 蒸馏水洗然干燥镜检
6显微镜观察
血浆凝固酶试验：1 取张载玻片做标记侧滴加生理盐水作侧滴加兔血浆
2 接种环灼烧消毒冷接种环挑取金黄色葡萄球菌生理盐水侧涂匀接种环灼烧消毒接种环冷跳金黄色葡萄球菌兔血浆侧涂匀510秒观察结果
实验结果：
实验分析：
革兰染色：1涂片时动作轻柔薄均匀动作会改变细菌排列形式
2固定步骤杀死细菌固定细菌结构保证菌体牢固黏附载玻片免水洗时水掉改变菌体染料通透性
3龙胆紫碱性染料细菌DNA 结合细菌呈紫色
4媒染剂作增强染料细菌亲力更加强染料细菌结合
5脱色革兰染色关键步骤目帮助染料染色细菌中
脱色利细菌染料脱色难易程度细菌加区分革兰阳性细菌易脱色剂脱色革兰阴性菌易脱色
6复染目脱色细菌重新染种颜色便未脱色菌进行较
7革兰阳性菌染色呈紫色革兰阴性菌呈红色外注意实验中常会出现假阳性假阴性结果假阳性脱色完全涂片厚者结晶紫染色度导致脱色完全假阴性细胞固定度造成细胞壁通透性改变出现假阴性结果外细胞培养时间太长已部分细胞发生死亡者溶导致细胞壁通透性改变出现假阴性结果
血浆凝固酶试验：1血浆凝固酶鉴定致病性葡萄球菌重指标
2运玻片法血浆凝固酶试验检测游离型凝固酶EDTA抗凝兔血浆试验效果佳
3血浆凝固酶试验结果判断出现明显凝聚颗粒阳性凝集颗粒阴性
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掌握革兰染色法原理实验步骤理解血浆凝固酶试验原理掌握血浆凝固酶试验操作方法结果判断
试验仪器试剂：
仪器：载玻片特种铅笔试夹酒精灯火机接种环染色盘显微镜
试剂：龙胆紫溶液碘溶液脱色液沙黄溶液生理盐水蒸馏水菌种金黄色葡萄球菌培养物EDTA抗凝兔血浆等
实验原理：
革兰染色：细菌显色反应细胞壁乙醇通透性抗脱色力差异肽聚糖层厚度结构决定结晶紫染色细胞碘液处理形成溶性复合物乙醇溶解染色前二步结果样G+细胞中乙醇厚肽聚糖层脱水导致孔隙变结晶紫碘复合物分子太通细胞壁保持着紫色G细胞中乙醇处理破坏胞壁外膜损伤肽聚糖层细胞质膜乙醇溶解结晶紫碘复合物细胞中渗漏出衬托染色液复染时显现红色红色染料然进入已染成紫色G+细胞紫色盖没红色显示出
血浆凝固酶试验：致病葡萄球菌分泌游离型凝固酶菌体外游离型凝固酶血浆中协子激活凝酶样物质液态纤维蛋白原转变固态纤维蛋白血浆凝固
实验步骤：
革兰染色：1 标记：特种铅笔载玻片画圈致确定菌液滴位置
2 涂片：滴加滴菌生理盐水洁净载玻片火机点燃酒精灯灼烧接种环接种环冷培养基中取细菌然菌落菌苔轻轻涂布散开（菌液标直接涂载玻片）涂片完成消毒接种环熄灭酒精灯
3 干燥：涂片室温然干燥酒精灯略加温迅速干燥勿火焰（火焰方15cm左右手背试温求玻片背面触手背皮肤热烫宜）
4 固定：高温进行固定夹子夹取载玻片端标面酒精外焰快速回移动3~4次约3~4秒放置冷染色
5 染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色10 s 蒸馏水洗沥水分
（2）煤染：碘液染色10 s 蒸馏水洗沥水分
（3）脱色：脱色剂脱色1020 s 蒸馏水洗沥水分
（4）复染水洗：沙黄溶液染色10 s 蒸馏水洗然干燥镜检
6显微镜观察
血浆凝固酶试验：1 取张载玻片做标记侧滴加生理盐水作侧滴加兔血浆
2 接种环灼烧消毒冷接种环挑取金黄色葡萄球菌生理盐水侧涂匀接种环灼烧消毒接种环冷跳金黄色葡萄球菌兔血浆侧涂匀510秒观察结果
实验结果：
实验分析：
革兰染色：1涂片时动作轻柔薄均匀动作会改变细菌排列形式
2固定步骤杀死细菌固定细菌结构保证菌体牢固黏附载玻片免水洗时水掉改变菌体染料通透性
3龙胆紫碱性染料细菌DNA 结合细菌呈紫色
4媒染剂作增强染料细菌亲力更加强染料细菌结合
5脱色革兰染色关键步骤目帮助染料染色细菌中
脱色利细菌染料脱色难易程度细菌加区分革兰阳性细菌易脱色剂脱色革兰阴性菌易脱色
6复染目脱色细菌重新染种颜色便未脱色菌进行较
7革兰阳性菌染色呈紫色革兰阴性菌呈红色外注意实验中常会出现假阳性假阴性结果假阳性脱色完全涂片厚者结晶紫染色度导致脱色完全假阴性细胞固定度造成细胞壁通透性改变出现假阴性结果外细胞培养时间太长已部分细胞发生死亡者溶导致细胞壁通透性改变出现假阴性结果
血浆凝固酶试验：1血浆凝固酶鉴定致病性葡萄球菌重指标
2运玻片法血浆凝固酶试验检测游离型凝固酶EDTA抗凝兔血浆试验效果佳
3血浆凝固酶试验结果判断出现明显凝聚颗粒阳性凝集颗粒阴性
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