HE染色免疫组织化学染色实验报告
1 实验目意义
11解石蜡切片制作程
12 掌握HE染色免疫组织化学染色基原理染色方法
13 熟悉HE染色免疫组织化学染色读片知识
2 实验方法步骤
21 石蜡切片制作HE染色步骤
211取材固定：
动物新鲜尸体取组织块(般厚度超0．5厘米)投入预先配固定液中(10％福尔马林)组织细胞蛋白质变性凝固防止细胞死溶细菌分解保持细胞形态结构
212脱水透明：
般低浓度高浓度酒精作脱水剂逐渐脱组织块中水份组织块置溶酒精溶石蜡透明剂二甲苯中透明二甲苯换出组织块中酒精浸蜡包埋
213浸蜡包埋：
已透明组织块置已溶化石蜡中放入溶蜡箱保温石蜡完全浸入组织块进行包埋：先制备容器(折叠纸盒)倒入已溶化石蜡迅速夹取已浸透石蜡组织块放入中冷凝固成块成包埋组织块变硬切片机切成薄切片
214切片前准备工作：
先包埋块组织周围石蜡切四周留约2mm石蜡块块两边必须切成行直线玻片擦洗干净均匀涂抹薄薄层蛋白甘油放置冰箱备
215切片贴片：
预冷蜡块固定切片机调节切片厚度6微米切成薄片切薄片皱折放加热水中烫贴载玻片放45℃恒温箱中烘干
216 脱蜡水
二甲苯Ⅰ20分钟二甲苯Ⅱ20分钟水乙醇3分钟95％酒精3分钟80％酒精3分钟70％酒精3分钟水洗5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
217染色：
苏木素液7分钟水洗5分钟1％盐酸溶液分化30秒水洗5分钟1％氨水返蓝10秒水洗20分钟95％酒精3分钟1％伊红酒精溶液2分钟次述序加入相应试剂作相应时间
218脱水透明：
95％酒精2分钟水酒精Ⅰ2分钟水酒精Ⅱ2分钟二甲苯Ⅰ5分钟二甲苯Ⅱ5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
219封固：
已透明切片滴中性树胶盖盖玻片封固放入37℃烘箱
22 SABC 染色步骤
221脱蜡水：
二甲苯Ⅰ20分钟二甲苯Ⅱ15分钟100％酒精2分钟95％酒精2分钟80％酒精2分钟70％酒精2分钟次述序加入相应试剂作相应时间
222流水洗5分钟（水流）
223蒸馏水配置新鲜3双氧水（30双氧水1：9配制配100ml）室温封闭15分钟注意避光
224蒸馏水洗5分钟重复2次
225热抗原修复切片浸入001M枸盐酸盐缓液中置微波炉高火5分钟低火20分钟完然冷
226取出切片放入染色缸中PBS洗5分钟重复3次
227取出切片放入湿盒中滴加5BSA封闭液（覆盖满组织宜）室温20分钟
228甩余液体（擦周围流痕）滴加抗（覆盖满组织宜）注阴性滴加PBS放入4℃冰箱夜
229放入染色缸中PBS洗5分钟重复3次
2210取出放入湿盒中滴加二抗（覆盖满组织宜）室温30分钟
2211取出置染色缸中PBS洗5分钟重复3次放回湿盒中加SABC（覆盖满组织宜）室温30分钟
2212取出置染色缸中PBS洗5分钟重复3次
2213 DAB显色取试加1ml单蒸水BCA试剂序滴加入试中混匀滴加切片观察否终止显色
2214终止显色单蒸水洗5分钟重复2次
2215苏木素衬染1分钟流水洗5分钟
2216脱水透明70％酒精3分钟80％酒精2分钟90％酒精2分钟95％酒精2分钟95％酒精Ⅱ2分钟100％酒精Ⅰ2分钟100％酒精Ⅱ2分钟100％酒精Ⅲ2分钟二甲苯Ⅰ8分钟二甲苯Ⅱ5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
2217中性树胶封片放入37℃烘箱
3 实验结果
31 HE 染色结果
IB
IB
B
A
A
IB： 狂犬病毒包涵体（基氏（Negri）体）
图1 狂犬病毒感染脑组织病变 HE染色
A 脑浦肯野细胞包涵体x400 B 脑神元处包涵体x400
狂犬病病理变化显微镜表现神元退变淋巴细胞单核细胞浸润胶质细胞增殖特征包涵体形成狂犬病毒包涵体称基体直径
约3～10nm边缘整齐1～2状似细胞核点出现脑海马区脑部位见病变神元胞浆成圆形卵圆形苏木素伊红染色脑组织切片中呈嗜酸性反应病变神元含包涵体脑海马区神元脑浦肯野细胞胞浆检出狂犬病病毒包涵体伴脑组织淤血水肿神元变性．
CP
D
C
B
A
CP： 豆状囊尾蚴虫卵壳
图2 肝脏肾脏病变 HE染色
A 豆状囊尾蚴肝脏形成包囊x200 B 脑神元处包涵体x400
C：肾结构模糊破坏x200 D 肾皮基底膜脱落x400
囊尾蚴感染肝脏病理变化分般性变化特征性变化两种般性病理变化表现肝细胞变性间质性肝炎颗粒变性：表现肝细胞肿肝细胞中蛋白性颗粒肝窦隙变水泡变性：肝脏细胞肿细胞质溶解较透亮细胞核位置改变肝窦隙变脂肪变性：程度等脂肪滴脂肪变性颗粒变性常见肝脏间质病变：表现程度等间质性肝炎汇区叶间结缔组织增生灶状淋巴细胞浸润叶间静脉扩张叶间胆程度等增生数量增加胆皮增生单层变成两层甚复层胆黏膜皮变厚胆周围结缔组织明显增生呈慢性胆炎胆周围炎特征性病理变化肝组织形成肉芽肿幼虫移行肝细胞造成损伤局部发生慢性炎症反应幼虫移行造成肝细胞坏死少量出血接着局部皮样细胞增生间异物巨细胞少等中性粒细胞浸润中性粒细胞结节外侧分布肉芽肿外围结缔组织构成包囊
包囊分布着许空壳样结构均质红染椭圆形虫卵
肾脏病变集中量肾皮基底膜脱落肾球囊腔变肾球萎缩变血球数目减少肾囊囊壁增厚没见明显炎性细胞浸润变现肾病变推断肾病引起原方面床升汞急性中毒便会引起相应病变
C
B
A
图3 肺脏形成霉菌结节 HE染色
A 肺泡结构面积消失x80 B 霉菌结节炎性反应带x200
C：肺脏霉菌结节x400
肺脏病理变化：肺细支气周围叶肉芽肿肉芽肿中心含细胞崩解物嗜酸性坏死块占周围淋巴球组织球等单核细胞外核巨细胞皮细胞结节波两两肺
叶固结构完全遭破坏较结节皮样细胞巨细胞巨噬细胞淋巴细胞数量等假性嗜伊红细胞排列疏松网状结构构成巨细胞位置定结节中心偏边数量核少等结节细胞成分结节相排列定层次性中心干酪样坏死区外围核巨细胞构成细胞带外层淋巴样细胞成纤维细胞形成包膜样结节中数量等假性嗜伊红细胞规排列纤维素结界中时见程度出血没发现明显淡染菌丝体组织厚细胞成分颜色深菌丝体遮盖难发现
32 SABC 染色结果
B
A
D
C
图4 Ki67蛋白乳腺皮表达（SABC染色）
A 乳腺组织Ki67阴性（核）x400B 乳腺组织Ki67阴性（核）x100
C 乳腺组织Ki67阳性（核）x400 D 乳腺组织Ki67阴性（核）x200
Ki67抗原1983年Gerdes等发现增殖细胞中表达种核抗原目前较肯定核增殖标志物Ki67标记细胞增殖状况常指标尤常反映恶性肿瘤细胞增殖状况Ki67正常乳腺组织表达正常乳腺纤维腺瘤增生皮样显示ki67表达水极低Ki67高表达乳腺癌恶性程度成正相关Ki67细胞核定位形式复杂特异性细胞周期改变Ki67作种细胞周期相关增殖细胞核蛋白增生细胞核反应组织特异性界定细胞凋亡增殖价值标记物Ki67准确反映肿瘤细胞增殖活性种肿瘤发展转移预关细胞周期G0期外丝分裂期检测Ki67尤M期高直接敏感反映肿瘤细胞增殖活性较全面反映增殖细胞数量高阳性表达反映肿瘤细胞增殖侵袭力强恶性程度高浸润性乳腺癌中发现Ki67肿瘤细胞增殖侵袭转移密切相关部分学者认Ki67表达乳腺癌肿瘤床分期关分期越晚Ki67阳性率越高Ki67肿瘤恶性程度呈正肿瘤生长侵袭转移力密切相关乳腺癌诊断预判断项重指标Ki67表达阳性乳腺癌肿瘤细胞恶性程度细胞增殖活跃肿瘤生长速度快侵袭性转移机会高预差Ki67高表达乳腺癌预良指标
4 结
41石蜡切片制作体会
石蜡切片组织学常规制片技术中广泛应方法石蜡切片仅观察正常细胞组织形态结构病理学法医学等学科研究观察判断细胞组织形态变化方法已相广泛许学科领域研究中面实验步骤谈体会
411取材应根求选取材料源部位
412固定适化学药液（固定液）浸渍切成块组织材料选择合适固定液量固定时间
413脱水透明固定组织材料需留组织固定液结晶沉淀否会影响染色效果脱水时间长短应根组织厚度组织较薄脱水时间宜长否组织会出现硬脆现象组织厚度时相求时间长透明时注意：① 保证级纯酒精浓度组织彻底脱水否二甲苯完全透明② 切片纯酒精取出进入二甲苯时空气中停留时间宜长特阴天空气湿度较时纯酒精吸水性较强致切片进入二甲苯时表面出现雾状切片透明良
414浸蜡掌握时间短石蜡没完全渗入组织中会出现组织软切片困难长会造成组织硬脆切片难组织包埋时掌握标切面选择较完整坦面切面切面标包埋速度应快否易造成组织块
周围石蜡脱裂包埋蜡块放置4℃冰箱中夜便切片
415切片 包埋蜡块刀片修成规整方形长方形切片刀求锋利缺口切片行卷起切片刀锋利致刀缺口时易造成断裂破碎完整切片时组织块固定牢时切片常形成横纹切片厚薄均刀放置合适夹角保证切片完整性组织结构致密组织淋巴结等应适薄切防细胞成分叠加影响观察效果遇硬化度肝脾脑等组织时应轻轻切削防组织震动产生空洞现象
416贴片烤片蛋白甘油作粘附剂洁净载玻片涂抹薄层蛋白甘油防止蛋白甘油吸附染色时出现脱片现象
42应HE染色体会
苏木精—伊红染色法简称HE染色法常普通染色方法苏木精（hematoxylin）阳离子染料细胞核嗜碱性物质染成蓝紫色伊红（eosin）阴离子染料细胞质胶原纤维等染成粉红色然HE染色种十分常见染色方法组织脱水染色透明等步骤具体时间环节进步摸索 面实验步骤谈体会
421染色时调节pH值重果组织块福尔马林中固定时间长组织酸化影响细胞核着色水中洗时间长饱碳酸锂水溶液
中处理1030min样细胞核着色较深染伊红时胞浆着色佳伊红溶液中滴加12滴冰醋酸
422苏木精染色分色关重应该显微镜进行般细胞核染色较清晰细胞质等基色宜发现染延长分色时间染色太浅应重新进行染色分色总必需分色细胞核清晰背景基色进行
423切片酒精脱水入二甲苯时出现白色透明状态脱水彻底应切片退回水酒精更换酒精二甲苯求彻底脱水透明
424染色程中切片干燥免切片收缩变形影响神元形态
425切片二甲苯取出进入二甲苯前切片周边均应擦干净吸干余水分
426封固时中性树脂防止日褪色盖片选组织块面积漏出部分久会褪色树脂浓度适树脂封固时气泡
43应SABC法进行免疫组化染色体会
SABC（Strept ActividinBiotin Complex）法种显示组织细胞中抗原分布简便敏感免疫组化染色方法该方法中链霉亲素等电点接中性（pH6065）组织细胞吸附性特低具较低背景步骤免疫组化染色基相似良操作性SABC法操作简便敏感性强操作中然遵循定原信度高结果
面实验步骤谈体会
431试验前先做标记防滴加试剂时出现混乱
432切片常规脱蜡水：二甲苯然反复次数宜乙醇浓度高低脱水时相反
433灭活源性酶：30双氧水蒸馏水19溶剂混合较理想
434抗原修复：Ki67蛋白细胞核表达进行热修复抗原
435正常犊牛血清封闭：封闭时应该注意室温时间相关系室温低时间长反然外保持反应池湿润重环否前功弃面步骤
436抗浓度：需行探索然试剂公司出参考浓度然探索出恰浓度取巧念头偿失孵育时间温度：抗原抗体充分反应结果关键控制温度时间严肃问题室温控制较困难放4℃冰箱夜（≥18h）
437滴加BSA抗二抗SABC等覆盖满组织宜
438反应均应湿盒中进行PBS洗切片时组织完全浸润液体中
439DAB显色镜控时：DAB浓度应该推荐低样便控制反应时间合适时候中止反应时注意残余DAB应妥善处理便倒入水道致癌性
4310脱水透明：脱水乙醇浓度低高较准确判断脱水成功否办法：观察透明盛二甲苯容器壁发现白色雾状现象说明脱水成功应次脱水透明时间太长1分钟左右
4311封片：封片时中性树脂量宜少时注意产生气泡
44整实验程中注意方面
441设立做记录便问题产生时查找原
442注意时间温度相关系留心试验程优化试验结果
443提前准备：例种浓度乙醇提前准备孵育设备提前开机等考虑周否会影响实验进程甚影响实验结果
444准备份操作流程图部班做实验时利查找失败原
华中农业学动物科技动物医学院
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1 实验目意义
11解石蜡切片制作程
12 掌握HE染色免疫组织化学染色基原理染色方法
13 熟悉HE染色免疫组织化学染色读片知识
2 实验方法步骤
21 石蜡切片制作HE染色步骤
211取材固定：
动物新鲜尸体取组织块(般厚度超0．5厘米)投入预先配固定液中(10％福尔马林)组织细胞蛋白质变性凝固防止细胞死溶细菌分解保持细胞形态结构
212脱水透明：
般低浓度高浓度酒精作脱水剂逐渐脱组织块中水份组织块置溶酒精溶石蜡透明剂二甲苯中透明二甲苯换出组织块中酒精浸蜡包埋
213浸蜡包埋：
已透明组织块置已溶化石蜡中放入溶蜡箱保温石蜡完全浸入组织块进行包埋：先制备容器(折叠纸盒)倒入已溶化石蜡迅速夹取已浸透石蜡组织块放入中冷凝固成块成包埋组织块变硬切片机切成薄切片
214切片前准备工作：
先包埋块组织周围石蜡切四周留约2mm石蜡块块两边必须切成行直线玻片擦洗干净均匀涂抹薄薄层蛋白甘油放置冰箱备
215切片贴片：
预冷蜡块固定切片机调节切片厚度6微米切成薄片切薄片皱折放加热水中烫贴载玻片放45℃恒温箱中烘干
216 脱蜡水
二甲苯Ⅰ20分钟二甲苯Ⅱ20分钟水乙醇3分钟95％酒精3分钟80％酒精3分钟70％酒精3分钟水洗5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
217染色：
苏木素液7分钟水洗5分钟1％盐酸溶液分化30秒水洗5分钟1％氨水返蓝10秒水洗20分钟95％酒精3分钟1％伊红酒精溶液2分钟次述序加入相应试剂作相应时间
218脱水透明：
95％酒精2分钟水酒精Ⅰ2分钟水酒精Ⅱ2分钟二甲苯Ⅰ5分钟二甲苯Ⅱ5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
219封固：
已透明切片滴中性树胶盖盖玻片封固放入37℃烘箱
22 SABC 染色步骤
221脱蜡水：
二甲苯Ⅰ20分钟二甲苯Ⅱ15分钟100％酒精2分钟95％酒精2分钟80％酒精2分钟70％酒精2分钟次述序加入相应试剂作相应时间
222流水洗5分钟（水流）
223蒸馏水配置新鲜3双氧水（30双氧水1：9配制配100ml）室温封闭15分钟注意避光
224蒸馏水洗5分钟重复2次
225热抗原修复切片浸入001M枸盐酸盐缓液中置微波炉高火5分钟低火20分钟完然冷
226取出切片放入染色缸中PBS洗5分钟重复3次
227取出切片放入湿盒中滴加5BSA封闭液（覆盖满组织宜）室温20分钟
228甩余液体（擦周围流痕）滴加抗（覆盖满组织宜）注阴性滴加PBS放入4℃冰箱夜
229放入染色缸中PBS洗5分钟重复3次
2210取出放入湿盒中滴加二抗（覆盖满组织宜）室温30分钟
2211取出置染色缸中PBS洗5分钟重复3次放回湿盒中加SABC（覆盖满组织宜）室温30分钟
2212取出置染色缸中PBS洗5分钟重复3次
2213 DAB显色取试加1ml单蒸水BCA试剂序滴加入试中混匀滴加切片观察否终止显色
2214终止显色单蒸水洗5分钟重复2次
2215苏木素衬染1分钟流水洗5分钟
2216脱水透明70％酒精3分钟80％酒精2分钟90％酒精2分钟95％酒精2分钟95％酒精Ⅱ2分钟100％酒精Ⅰ2分钟100％酒精Ⅱ2分钟100％酒精Ⅲ2分钟二甲苯Ⅰ8分钟二甲苯Ⅱ5分钟次述序加入相应试剂作相应时间
2217中性树胶封片放入37℃烘箱
3 实验结果
31 HE 染色结果
IB
IB
B
A
A
IB： 狂犬病毒包涵体（基氏（Negri）体）
图1 狂犬病毒感染脑组织病变 HE染色
A 脑浦肯野细胞包涵体x400 B 脑神元处包涵体x400
狂犬病病理变化显微镜表现神元退变淋巴细胞单核细胞浸润胶质细胞增殖特征包涵体形成狂犬病毒包涵体称基体直径
约3～10nm边缘整齐1～2状似细胞核点出现脑海马区脑部位见病变神元胞浆成圆形卵圆形苏木素伊红染色脑组织切片中呈嗜酸性反应病变神元含包涵体脑海马区神元脑浦肯野细胞胞浆检出狂犬病病毒包涵体伴脑组织淤血水肿神元变性．
CP
D
C
B
A
CP： 豆状囊尾蚴虫卵壳
图2 肝脏肾脏病变 HE染色
A 豆状囊尾蚴肝脏形成包囊x200 B 脑神元处包涵体x400
C：肾结构模糊破坏x200 D 肾皮基底膜脱落x400
囊尾蚴感染肝脏病理变化分般性变化特征性变化两种般性病理变化表现肝细胞变性间质性肝炎颗粒变性：表现肝细胞肿肝细胞中蛋白性颗粒肝窦隙变水泡变性：肝脏细胞肿细胞质溶解较透亮细胞核位置改变肝窦隙变脂肪变性：程度等脂肪滴脂肪变性颗粒变性常见肝脏间质病变：表现程度等间质性肝炎汇区叶间结缔组织增生灶状淋巴细胞浸润叶间静脉扩张叶间胆程度等增生数量增加胆皮增生单层变成两层甚复层胆黏膜皮变厚胆周围结缔组织明显增生呈慢性胆炎胆周围炎特征性病理变化肝组织形成肉芽肿幼虫移行肝细胞造成损伤局部发生慢性炎症反应幼虫移行造成肝细胞坏死少量出血接着局部皮样细胞增生间异物巨细胞少等中性粒细胞浸润中性粒细胞结节外侧分布肉芽肿外围结缔组织构成包囊
包囊分布着许空壳样结构均质红染椭圆形虫卵
肾脏病变集中量肾皮基底膜脱落肾球囊腔变肾球萎缩变血球数目减少肾囊囊壁增厚没见明显炎性细胞浸润变现肾病变推断肾病引起原方面床升汞急性中毒便会引起相应病变
C
B
A
图3 肺脏形成霉菌结节 HE染色
A 肺泡结构面积消失x80 B 霉菌结节炎性反应带x200
C：肺脏霉菌结节x400
肺脏病理变化：肺细支气周围叶肉芽肿肉芽肿中心含细胞崩解物嗜酸性坏死块占周围淋巴球组织球等单核细胞外核巨细胞皮细胞结节波两两肺
叶固结构完全遭破坏较结节皮样细胞巨细胞巨噬细胞淋巴细胞数量等假性嗜伊红细胞排列疏松网状结构构成巨细胞位置定结节中心偏边数量核少等结节细胞成分结节相排列定层次性中心干酪样坏死区外围核巨细胞构成细胞带外层淋巴样细胞成纤维细胞形成包膜样结节中数量等假性嗜伊红细胞规排列纤维素结界中时见程度出血没发现明显淡染菌丝体组织厚细胞成分颜色深菌丝体遮盖难发现
32 SABC 染色结果
B
A
D
C
图4 Ki67蛋白乳腺皮表达（SABC染色）
A 乳腺组织Ki67阴性（核）x400B 乳腺组织Ki67阴性（核）x100
C 乳腺组织Ki67阳性（核）x400 D 乳腺组织Ki67阴性（核）x200
Ki67抗原1983年Gerdes等发现增殖细胞中表达种核抗原目前较肯定核增殖标志物Ki67标记细胞增殖状况常指标尤常反映恶性肿瘤细胞增殖状况Ki67正常乳腺组织表达正常乳腺纤维腺瘤增生皮样显示ki67表达水极低Ki67高表达乳腺癌恶性程度成正相关Ki67细胞核定位形式复杂特异性细胞周期改变Ki67作种细胞周期相关增殖细胞核蛋白增生细胞核反应组织特异性界定细胞凋亡增殖价值标记物Ki67准确反映肿瘤细胞增殖活性种肿瘤发展转移预关细胞周期G0期外丝分裂期检测Ki67尤M期高直接敏感反映肿瘤细胞增殖活性较全面反映增殖细胞数量高阳性表达反映肿瘤细胞增殖侵袭力强恶性程度高浸润性乳腺癌中发现Ki67肿瘤细胞增殖侵袭转移密切相关部分学者认Ki67表达乳腺癌肿瘤床分期关分期越晚Ki67阳性率越高Ki67肿瘤恶性程度呈正肿瘤生长侵袭转移力密切相关乳腺癌诊断预判断项重指标Ki67表达阳性乳腺癌肿瘤细胞恶性程度细胞增殖活跃肿瘤生长速度快侵袭性转移机会高预差Ki67高表达乳腺癌预良指标
4 结
41石蜡切片制作体会
石蜡切片组织学常规制片技术中广泛应方法石蜡切片仅观察正常细胞组织形态结构病理学法医学等学科研究观察判断细胞组织形态变化方法已相广泛许学科领域研究中面实验步骤谈体会
411取材应根求选取材料源部位
412固定适化学药液（固定液）浸渍切成块组织材料选择合适固定液量固定时间
413脱水透明固定组织材料需留组织固定液结晶沉淀否会影响染色效果脱水时间长短应根组织厚度组织较薄脱水时间宜长否组织会出现硬脆现象组织厚度时相求时间长透明时注意：① 保证级纯酒精浓度组织彻底脱水否二甲苯完全透明② 切片纯酒精取出进入二甲苯时空气中停留时间宜长特阴天空气湿度较时纯酒精吸水性较强致切片进入二甲苯时表面出现雾状切片透明良
414浸蜡掌握时间短石蜡没完全渗入组织中会出现组织软切片困难长会造成组织硬脆切片难组织包埋时掌握标切面选择较完整坦面切面切面标包埋速度应快否易造成组织块
周围石蜡脱裂包埋蜡块放置4℃冰箱中夜便切片
415切片 包埋蜡块刀片修成规整方形长方形切片刀求锋利缺口切片行卷起切片刀锋利致刀缺口时易造成断裂破碎完整切片时组织块固定牢时切片常形成横纹切片厚薄均刀放置合适夹角保证切片完整性组织结构致密组织淋巴结等应适薄切防细胞成分叠加影响观察效果遇硬化度肝脾脑等组织时应轻轻切削防组织震动产生空洞现象
416贴片烤片蛋白甘油作粘附剂洁净载玻片涂抹薄层蛋白甘油防止蛋白甘油吸附染色时出现脱片现象
42应HE染色体会
苏木精—伊红染色法简称HE染色法常普通染色方法苏木精（hematoxylin）阳离子染料细胞核嗜碱性物质染成蓝紫色伊红（eosin）阴离子染料细胞质胶原纤维等染成粉红色然HE染色种十分常见染色方法组织脱水染色透明等步骤具体时间环节进步摸索 面实验步骤谈体会
421染色时调节pH值重果组织块福尔马林中固定时间长组织酸化影响细胞核着色水中洗时间长饱碳酸锂水溶液
中处理1030min样细胞核着色较深染伊红时胞浆着色佳伊红溶液中滴加12滴冰醋酸
422苏木精染色分色关重应该显微镜进行般细胞核染色较清晰细胞质等基色宜发现染延长分色时间染色太浅应重新进行染色分色总必需分色细胞核清晰背景基色进行
423切片酒精脱水入二甲苯时出现白色透明状态脱水彻底应切片退回水酒精更换酒精二甲苯求彻底脱水透明
424染色程中切片干燥免切片收缩变形影响神元形态
425切片二甲苯取出进入二甲苯前切片周边均应擦干净吸干余水分
426封固时中性树脂防止日褪色盖片选组织块面积漏出部分久会褪色树脂浓度适树脂封固时气泡
43应SABC法进行免疫组化染色体会
SABC（Strept ActividinBiotin Complex）法种显示组织细胞中抗原分布简便敏感免疫组化染色方法该方法中链霉亲素等电点接中性（pH6065）组织细胞吸附性特低具较低背景步骤免疫组化染色基相似良操作性SABC法操作简便敏感性强操作中然遵循定原信度高结果
面实验步骤谈体会
431试验前先做标记防滴加试剂时出现混乱
432切片常规脱蜡水：二甲苯然反复次数宜乙醇浓度高低脱水时相反
433灭活源性酶：30双氧水蒸馏水19溶剂混合较理想
434抗原修复：Ki67蛋白细胞核表达进行热修复抗原
435正常犊牛血清封闭：封闭时应该注意室温时间相关系室温低时间长反然外保持反应池湿润重环否前功弃面步骤
436抗浓度：需行探索然试剂公司出参考浓度然探索出恰浓度取巧念头偿失孵育时间温度：抗原抗体充分反应结果关键控制温度时间严肃问题室温控制较困难放4℃冰箱夜（≥18h）
437滴加BSA抗二抗SABC等覆盖满组织宜
438反应均应湿盒中进行PBS洗切片时组织完全浸润液体中
439DAB显色镜控时：DAB浓度应该推荐低样便控制反应时间合适时候中止反应时注意残余DAB应妥善处理便倒入水道致癌性
4310脱水透明：脱水乙醇浓度低高较准确判断脱水成功否办法：观察透明盛二甲苯容器壁发现白色雾状现象说明脱水成功应次脱水透明时间太长1分钟左右
4311封片：封片时中性树脂量宜少时注意产生气泡
44整实验程中注意方面
441设立做记录便问题产生时查找原
442注意时间温度相关系留心试验程优化试验结果
443提前准备：例种浓度乙醇提前准备孵育设备提前开机等考虑周否会影响实验进程甚影响实验结果
444准备份操作流程图部班做实验时利查找失败原
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