肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床及微生物特征分析


    · 微 生物 检 验 床 ·
    DOI:10.3760 /cma.j.issn.0376-2491.2015.40.005
    基金项目:国家然科学基金(81472012)
    作者单位:100853 北京解放军总医院微生物科
    通信作者:沈定霞Email:shendx301@sina.com
    肺炎克雷伯菌肝脓肿床微生物
    特 征 分 析
    吴华

    李东冬

    王京

    孙运芳

    叶丽艳

    沈定霞
    摘 目 肺炎克雷伯菌肝脓肿床特征致病菌微生物特性进行总结 床
    诊治提供 方法 采回顾性分析方法 收集 2010 年 1 月 2014 年 12 月诊北京 3 家教学
    医院 B 超 CT 诊断肝脓肿 脓肿穿刺物培养肺炎克雷伯菌 152 例患者病历 中 137 份
    完整病历进行分析 肝脓肿非重复患者 152 株肺炎克雷伯菌进行黏丝试验确定高黏液
    性状 PCR 方法进行荚膜血清分型毒力基检测 K-B 法进行药敏试验采 χ
    2 检验结果
    进行统计分析 结果 肺炎克雷伯菌肝脓肿发生中老年男性糖尿病患者 92.7%(127 /137)
    发热80.3%(110 /137)脓肿单发 单发脓肿中 80.9%(89 /110)发生右叶33.6%(46 /137)
    脓肿见气体 74.5%(102 /137) 白细胞计数83.2%(114 /137) 中性粒细胞百分78.1%
    (107 /137)谷丙氨酸转氨酶 51.8%(71 /137)胆红素升高 87.5%(133 /152)菌株属高黏液
    型K1 型常见血清型次 K2 型毒力基 rmpA 气杆菌素检出率分 82.9%
    (126 /152) 88.2%(134 /152)伴肝胆疾病肝脓肿 K1 型例rmpA 气杆菌素检出率
    分 65.7%94.9% 96.0%高伴肝胆疾病肝脓肿 28.9%50.0% 68.4%差异
    统计学意义 (χ

    =14.9838.4017.61均 P
    <0.01)未分型例 5.1%低伴肝胆疾病脓
    肿 26.3%差异统计学意义 (χ

    =10.65
    P
    <0.01) 肺炎克雷伯菌常见抗生素耐药率较低
    结 肺炎克雷伯菌肝脓肿高黏液 携带毒力基 rmpA 气杆菌素高毒力肺炎克雷伯菌引
    起数菌株抗生素尚敏感
    关键词 肝脓肿 肺炎克雷伯菌 床表现 高毒力 耐药率
    The clinical and bacterial features of Klebsiella pnuemoniae liver abscess

    Wu Hua

    Li Dongdong
    Wang Jing

    Sun Yunfang

    Ye Liyan

    Shen Dingxia

    Department of Microbiology

    General Hospital of Chinese
    People

    s Liberation Army

    Beijing 100853

    China
    Corresponding author

    Shen Dingxia

    Email

    shendx301

    sina

    com

    Abstract

    Objective
    To summarize the clinical and bacterial features of Klebsiella pnuemoniae
    liver abscess (KPLA) in order to provide the basis for the diagnosis and treatment of KPLA .
    Methods
    Retrospective study was conducted.One hundred and fifty-two medical records from 3 teaching hospitals in
    Beijing between January 2010 and December 2014were collected.Among which 137 complete medical
    records were analyzed.String test was carried out to detect the hypermucoviscosity phenotype .PCR was
    performed to check the capsular serotype and the virulent genes .Disk diffusion method was operated to
    obtain the antimicrobial resistance rates.The results were analyzed by chi -square test.
    Results
    KPLA
    occurred mostly in middle-aged male and diabetes mellitus patients.92.7% (127 /137) patients had fever.
    80.3% (110 /137) of the KLPA were single abscess among which 80.9% (89 /110) were in the right lobe
    and 33.6% ( 46 /137 ) had air cavities.74.5% ( 102 /137 ) of the white blood cell count 83.2%
    (114 /137) of the neutrophils′percentage 78.1% (107 /137) of alanine aminotransferase and 51.8%
    (71 /137) of the total billrubin were elevated.87.5% (133 /152) of the Klebsiella pnuemoniae
    (Kpn)
    appeared to be hypermucoviscous K1 was the most popular serotype the second was K2 and the positive
    rates of virulent genes rmpA and aerobactin were 82.9% (126 /152) and 88.2% (134 /152) respectively.
    Among the isolates from the KPLA without other hepatobiliary diseases the portion of K1 serotype the
    positive rates of rmpA and aerobactin were 65.7% 94.9% and 96.0% respectively higher than those of
    ·9523·中华医学杂志 2015 年 10 月 27 日第 95 卷第 40 期 Natl Med J China October 272015Vol.95 No.40the 28.9% 50.0% and 68.4% from the KPLA with other hepatobiliary diseases while the undefined
    serotype potion was lower (5.1% vs 26.3%) the differences were statistically significant (χ

    =14.98
    38.40 17.61 10.65 all P
    <0.01) .Most of Kpn were susceptible to antimicrobials .
    Conclusions
    KPLA has certain clinical features and are mostly caused by hypervirulent isolates that are
    hypermucoviscous with rmpA and aerobactin genes .Most of the isolates are susceptible to antimicrobials .

    Key words
    Liver abscess
    Klebsiella pneumoniae
    Clinical manifestation Hypervirulent
    Antimicrobial resistant rate
    1982 年国首次报道肺炎克雷伯菌肝脓肿
    (KPLA)[1]
    国外特亚裔群中患
    KPLA 病例报道研究越越中国台湾区
    研究显示 肺炎克雷伯菌(Kpn)引起细菌性
    肝脓肿高达 80%
    [2]
    相细菌引起肝脓
    肿KPLA 床表现影学方面具定特
    征 年研究发现 导致类肝脓肿 Kpn
    数黏液丝试验阳性 具高黏液表型属高毒力
    株高毒力肺炎克雷伯菌 (hvKP)
    [3]
    荚膜分型
    K1K2 型常携带黏液表型调节基 (rmpA)气杆菌素等毒力基 研究通分析 B 超
    CT 诊断肝脓肿脓肿穿刺液仅 Kpn 生长
    152 例 KPLA 患者病历 整理纳具完整资料
    137 份病例床特点患者肝脓
    肿 152 株非重复菌株进行微生物特征研究旨
    加强医务员 KPLA 认识床该病诊
    断治疗提供
    象方法
    1.研究象:2010 年 1 月 2014 年 12 月诊
    北京 3 家教学医院具发热 寒战腹痛等床
    表现腹部 B 超 CT 提示肝区脓肿病灶 脓肿穿
    刺液培养证实病原菌仅 Kpn 152 例患者
    中 137 份记录完整病历进行床资料总结
    分析根胆囊炎肝胆手术史分 2 组
    胆囊炎 ()肝胆手术史者伴肝胆疾病
    组胆囊炎肝胆手术史者伴肝胆
    疾病组 2 组分离出 Kpn 进行微生物特征
    较 152 株患者脓肿穿刺液分离非
    重复菌株进行微生物特征研究 解放军总
    医院 51 株 Kpn 进行药敏试验
    2.研究方法:床资料分析采回顾性研
    究病历资料 2 名研究者病历查询系统查询
    病案室提供 病历完善 137 份病例床资
    料实验室资料影学资料进行总结 152 株
    Kpn 进行黏液丝试验 荚膜分型毒力基检测药
    敏试验总结 Kpn 微生物学特征
    3.黏液丝试验: Kpn 接种含 5%羊血琼
    脂板37 ℃培养 16 ~18 h 接种环轻轻
    挑起菌落 挑起黏液丝黏液丝长度 <
    5 mm黏液丝试验阴性 黏液丝长度 ≥5 mm
    黏液丝试验阳性[3]

    4.荚膜分型毒力基检测 :采 PCR 扩增
    法检测步骤:(1) DNA 模板提取:挑取培养
    16 ~18 h Kpn 菌落盛 400 μl 离子水 EP 中 放 入 100 ℃ 加 热 仪 中 加 热 15 min
    12 000 ×
    g 离心 5 min吸取清液 DNA 模板
    (2)PCR:参考文献[4] 中引物序列分合成
    K1K2K5K54K57 型 rmpA 气杆菌素引
    物相应反应条件分进行基扩增 中
    引物海生工合成 Primix 购 Takara 公司包
    含扩增需缓液 Taq 酶dNTP Mg
    2 +
    反应体
    系 25 μl包括 Primix 10 μl模板 3 μl10 μmol/L游引物 2 μl水 8 μl (3)电泳成:
    100 V 电压1%琼脂糖凝胶产物进行电泳凝
    胶成仪电泳产物进行成
    5.药敏试验:解放军总医院 51 株
    Kpn 进行纸片扩散法药敏试验 碳青霉烯类药物
    耐药菌株进行改良 Hodge 试验判断碳青霉烯酶
    产生情况双纸片法超广谱 β酰胺酶产
    生情况进行确认操作结果判读均参 2014 年
    CLSI 标准[5]
    MH 琼脂粉单药药敏纸片
    Oxiod 公司含酶抑制剂头孢啶 /克拉维酸头
    孢噻肟/克拉维酸药敏纸片购北京天坛药物生
    物技术开发公司 ATCC25922 作质控菌株仅
    质控菌株抑菌环直径控时 试验菌株药敏
    结果效
    6.统计学分析:采 SPSS 16.0 软件患者
    性患者白细胞计数 中性粒细胞百分脓肿
    数脓肿部位构成毒力基检出率进行 χ

    检验
    P
    <0.05 差异统计学意义 采 Whonet
    5.6 药敏试验结果进行统计分析
    结 果
    1.KPLA 床特点 :152 份病例中病历完善
    137 份中男 100 例女 37 例年龄 18 ~81 岁
    ·0623· 中华医学杂志 2015 年 10 月 27 日第 95 卷第 40 期 Natl Med J China October 272015Vol.95 No.40均年龄 (56.5±12.2) 岁40 ~80 岁高发年龄
    段占总数 94.1%(129 /137)时患糖尿病
    者 占 50.4% ( 69 /137 ) 发 热 者 占 92.7%
    (127 /137)脓肿单发位右叶单发脓
    肿直径均 (64.8±22.6)mm白细胞计数(WBC)中性粒细胞百分 (NEUT)丙氨酸转氨酶(ALT)总胆红素 (TB)升高者分 74.5%(102 /137)
    83.2% ( 114 /137 ) 78.1% ( 107 /137 ) 51.8%
    (71 /137)患者均接受抗生素治疗穿刺引
    流/抽脓治疗6 例穿刺引流/抽脓效果佳接
    受部分肝脏切术 97.1%(133 /137)治愈转死亡率仅占 2.9%(4 /137) 具体结果见表 1
    表 1
    137 例肺炎克雷伯菌肝脓肿床资料
    床资料 例数 百分(%) χ2 值 P 值
    性 23.93 <0.01
    男 100 73
    OO
    .0
    女 37 27
    OO
    .0年龄(岁) --
    <20 2 1
    OO
    .5
    21 ~40

    2 1
    OO
    .5
    41 ~60

    57 41
    OO
    .6
    61 ~80

    72 52
    OO
    .5
    >80 4 2
    OO
    .9基础病 --
    糖尿病 69 50
    OO
    .4
    胆道疾病 34 24
    OO
    .8
    腹部外科手术史 24 17
    OO
    .5
    乙肝肝硬化 14 10
    OO
    .2
    放化疗 9 6
    OO
    .6
    脂肪肝 13 9
    OO
    .5床表现 --
    发热 127 92
    OO
    .7
    寒战 85 62
    OO
    .0
    纳差 66 48
    OO
    .2
    腹痛 63 46
    OO
    .0
    乏力 32 23
    OO
    .4
    呕吐 27 19
    OO
    .7
    发血流感染 34 24
    OO
    .8脓肿数 36.81 <0.01
    单发 110 80
    OO
    .3
    发 27 19
    OO
    .7脓肿部位 30.39 <0.01
    左叶单发 21 19
    OO
    .1
    右叶单发 89 80
    OO
    .9
    WBC 26.55 <0.01
    增高 102 74
    OO
    .5
    正常 35 25
    OO
    .5
    NEUT 41.9 <0.01
    增高 114 83
    OO
    .2
    正常 23 16
    OO
    .8治疗结局 --
    治愈转 133 97
    OO
    .1
    死亡 4 2
    OO
    .9
    注:WBC:白细胞NEUT:中性粒细胞百分 - 示未作统计
    学分析
    2.Kpn 黏液表型 荚膜分型毒力基检出
    情况: 87.5% Kpn 具 高 黏 液 表 型 K1 型 占
    53.9% K2 型 占 32.2% 两 型 占 86.1%
    11.2%已分型引物未分出型 解放军
    总医院51 株 Kpn 中检出1 株 K5 型2 株 K54 型
    1 株 K57 型 毒 力 基 rmpA 检 出 率
    82.9%气杆菌素检出率 88.2% 荚膜分型
    毒力基 PCR 结果见图1 病历完善患者分离出
    137 株菌分组分析结果见表 2
    图 1
    肺炎克雷伯菌荚膜分型毒力基 PCR 产物电
    泳图
    3.Kpn 抗生素耐药情况 :51 株 Kpn 12 种
    常抗生素耐药情况见表 3 51 株 Kpn 中 3 株
    产碳青霉烯酶均非高黏液未分型菌株中
    2 株分离胆囊切术发生肝脓肿 1 株分离
    肝癌胆癌切术发生肝脓肿2 株产超广
    谱 β酰胺酶 中 1 株非高黏液型未分型株分离肝门胆癌胆囊切术患者1 株高黏
    液 K1 型法获完整病历 患者情况明

    30 年Kpn 逐渐超肠埃希菌成细
    菌性肝脓肿致病菌 KPLA 患者具定
    特点 男性患者女性患者男女率
    1.5~2.5∶1
    [6]
    患 者 中 老 年 研 究 中
    94.1%患者 41 ~80 岁间中仅 61 ~80 岁
    段高达 52.5%低 40 岁高 80 岁患者较
    少见文献报道致[6]
    糖尿病患者免疫
    功受影响 KPLA 重易患素 研
    究结果显示 KPLA 患者中患糖尿病率占
    50.4%Lee 等[7] 报道非 KPLA 时伴胆道疾病
    率高达 78.6% KPLA 时伴胆道疾病
    率27.1%研究患者中胆道疾病者
    ·1623·中华医学杂志 2015 年 10 月 27 日第 95 卷第 40 期 Natl Med J China October 272015Vol.95 No.40表 2
    伴伴肝胆疾病患者分离出肺炎克雷伯菌微生物特性较 [例(%)]
    组 例数 高黏液型 荚膜分型
    K1 K2 K5a
    K54a
    K57a
    毒力基
    未分型b rmpA 气杆菌素
    伴肝胆疾病 99
    &
    98(99.0) 65(65.7) 26(26.3) 1 2 1 5(5.1) 94(94.9) 95(96.0)
    伴肝胆疾病 38
    &
    21(55.3) 11(28.9) 16(42.1) 0 0 0 10(26.3) 19(50.0) 26(68.4)
    χ2 值 42
    rr
    .25 14
    ss
    .98 3
    LL
    .24 - - - 10.65 38.4 17.61P 值 <0
    rr
    .01 <0
    ss
    .01 >0
    LL
    .05 - - - <0.01 <0.01 <0.01
    注:a
    :仅解放军总医院菌株进行 K5K54K57 型检测b
    :未分型指分型属 K1 K2 K5 K54 K57 型菌株 -示未作统
    计学分析
    表 3
    51 株致肝脓肿肺炎克雷伯菌抗生素
    耐药情况[株(%)]
    抗生素 敏感 中介 耐药
    哌拉西林 45(88.2) 1(2) 5(9.8)
    哌拉西林唑巴坦 47(92.1) 1(2) 3(5.9)
    头孢呋辛 45(88.2) - 6(11.8)
    头孢啶 47(92.1) 1(2) 3(5.9)
    头孢噻肟 46(90.2) - 5(9.8)
    头孢吡肟 48(94.1) - 3(5.9)
    阿米卡星 49(96.1) - 2(3.9)
    复方新诺明 47(92.1) - 4(7.8)
    左氧氟沙星 48(94.1) - 3(5.9)
    环丙沙星 47(92.1) 1(2) 3(5.9)
    亚胺培南 48(94.1) - 3(5.9)
    美罗培南 48(94.1) - 3(5.9)
    注: -示中介菌株
    率仅占 24.8% 属细菌感染 患者
    绝部分表现发热 寒战脓肿身导致局部
    疼痛部分患者表现纳差 乏力呕吐等非特
    异症状
    KPLA 通 B 超 CT 出初步诊断 该
    病影学表现具定特点 单发位右叶 脓肿气体提示 KPLA
    氧特糖尿病患者体高糖条件 Kpn发酵组织中葡萄糖产生二氧化碳 脓肿
    气体产生 实验室方面涂片培养药敏诊疗
    指导作较 白细胞计数 中性粒细胞百分仅反
    应感染 谷丙氨酸转氨酶总胆红素肝
    脏损伤体现 均非特异指标 发血流感染 研究尚未发现 Kpn 引
    起部位转移性感染 研究报道hvKP侵袭性患者发眼炎 脑膜炎坏死性筋膜
    炎等预较差[8]
    眼炎时治疗严重
    影响患者视力 甚导致失明 发脑膜炎时死亡
    率较高 研究中4 例发血流感染导致败
    血症死亡余患者接受抗生素穿刺引流/抽脓
    手术治疗 体温降恢复正常局部疼痛纳差乏力呕吐等症状缓解消失 B 超
    CT 显示脓肿明显缩 WBC 计数中性粒细胞百
    分降正常 均转者治愈 严重
    发症已报道床工作中应提高警惕 发现
    发症应时处理避免带良果 部分引起肝脓肿 Kpn 属高毒力株分型
    K1K2 型Siu 等[8] 甚认引起
    肝脓肿 Kpn K1 K2 两种型 研究
    152 株 Kpn 中86.1% K1 K2 型排伴发
    肝 胆 疾 病 病 例 两 型 占 例 达
    92.9%伴肝胆疾病组伴肝胆疾
    病组进行较发现 伴肝胆疾病肝脓肿
    中 K1 K2 型例较高 高毒力株高黏液表
    型黏液表型调节基 rmpA 相关该基正
    调控荚膜糖合成 产量增加菌落表现黏
    液型[9]
    气杆菌素种铁载体 宿转铁
    蛋白竞争铁离子动物模型显示气杆菌素 Kpn毒力增强 100 倍[10]
    菌落黏液性相关
    两种基常存 hvKP 中研究显示rmpA气杆菌素伴肝胆疾病组阳性率高伴
    肝胆疾病组阳性率 推测普通
    Kpn 毒力限 仅患者胆囊炎接受肝
    胆手术前提引起感染 高毒力株
    肝胆疾病情况引起原发感染 研究 3 株产碳青霉烯酶菌株均非高黏
    液非 hvKP 普通 Kpn毒力较弱分离术
    患者考虑继发感染 hvKP 绝部分分离
    胆囊炎肝胆手术史患者 然毒力较强
    抗生素较少耐药 Li 等[11] 发现着时间推
    移hvKP 抗生素耐药增高趋势 南昌温
    州已发现产碳青霉烯酶 K1 K2 型 hvKP
    [12]
    解放军总医院 51 株菌中发现 1 株产超广谱
    β酰胺酶高毒力株 提示 高 hvKP 获
    取耐药基成高毒力高耐药菌株 会治疗带
    极困难应引起方面重视
    参 考 文 献
    [1] 尹宽 张清波 翁心 华等.肺炎杆菌性肝脓肿例报告
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    155.
    (收稿日期:2015-04-30)
    (文编辑 :张媛)
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    三具体示例
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