附件3
中海贫血相关基检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请中海贫血相关基检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原中海贫血相关基检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究验证资料相关员应遵循法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
中海贫血（简称贫）种常染色体隐性遗传病珠蛋白基发生突变（包括点突变缺失等）致珠蛋白肽链合成减少完全合成导致组单基遗传性溶血性疾病轻者床表现重者进行性溶血性贫血特征根珠蛋白肽链合成受抑制类型贫分αβγ贫等床常见αβ贫贫分布中海岸东南亚少数非洲区具明显种族特性域分布差异贫国南方区常见危害遗传病尤广西云南广东海南四川贵州等省份甚云南海南广东贫基群携带率达10广西更达20
α贫α珠蛋白基发生突变引起α珠蛋白基簇位16p133包括胎期成期表达2基（α2α1）基排列序5’α2α13’根单倍型情况α贫分3类：（1）缺失型α+贫（α）缺失1α基（2）缺失型α0贫（）2α基时缺失（3）非缺失型α+贫（αTαααT ）1α1α2基发生点突变少数碱基缺失中国现已发现少19种α珠蛋白基片段缺失38种α珠蛋白基点突变中6 种α珠蛋白基突变：SEAα37α42αWSα（HBA2：c369C>G）αQSα（HBA2：c377 T>C）αCSα（HBA2：c427T>C）占患病群总数98
α贫基型床分型关系已基阐明α贫表型严重程度着功性α珠蛋白基减少加重：（1）1α基缺失点突变（αααααTαααTααα）称静止型α贫通常贫血血液学表现细胞低色素（2）2α基缺失复合α基点突变点突变基型αααααααTαTαααTααTα称轻型α贫床表现贫血轻度贫血血液学检查细胞低色素特征（3）3α基缺失复合α基点突变基型ααTα称中间型α贫称Hb H病患者轻重度贫血某基型αTααTα病例（αCSααCSααQSααQSααCSααQSα）表现Hb H病通常αTα非缺失型 Hb H病较单纯缺失型Hb H病（α）床表现更严重特基型αCSααQSαHb H病患者贫血程度较严重（4）4α基缺失基型称重型α贫称Hb Bart’s胎水肿综合征类体般法存活出生分娩半时死亡
β贫β珠蛋白基发生突变引起点突变少数缺失型β珠蛋白基簇位11p153包括2成期表达基（βδ）基排列序5’δβ3’根β珠蛋白链合成量程度β贫分3类：（1）β0贫β珠蛋白链完全合成等位基称β0贫等位基（2）β+贫β珠蛋白链合成减少等位基称β+贫等位基（3）β++贫称沉默型β贫β珠蛋白链合成轻微减少中国已少报道84种β珠蛋白基点突变11种β珠蛋白基缺失中6种点突变：HBB：c126_129delCTTTHBB：c52A>THBB：c78A>GHBB： c79G>AHBB： c316197C>THBB： c216_217insA占全部突变类型90
β贫床表型分4种：（1）静止型β贫基型β++βN血液学表型正常界般通分子诊断识（2）轻型β贫基型β0βNβ+βN床表现细胞低色素HbA2值升高（3）中间型β贫基型β+β+β+β0表型变异范围轻度贫血中度贫血幼期出现中度贫血（4）重型β贫基型β+β0β0β0通常伴严重贫血需定期输血存活患出生时症状常婴期（312月龄）发病治疗患5岁前死亡外中间型分子基础较复杂显性β贫突变杂合子（βDβN）合α贫突变β贫突变纯合子（β0β0）合α珠蛋白三联体β贫突变杂合子（β0βNβ+βN）会显示中间型表型
2018年发布重型β中海贫血诊断治疗指南明确规定：重型β中海贫血诊断条件者均应进行基诊断基型纯合子双重杂合子确诊病指标2018年发布童非输血赖型中海贫血诊治理专家识明确规定：贫基检测非输血赖型贫诊断
外国家卫生健康委员会发布相关文件求：减少重型贫患出生国贫高发省份实施贫防控试点项目流程包括：（1）新婚夫妇计划怀孕夫妇怀孕前孕期进行血常规初筛（2）夫妇方双方血常规检查结果阳性夫妇进行血红蛋白分析复筛（3）血红蛋白分析复筛结果均阳性夫妇取抗凝静脉全血进行相应α+β贫基检测（4）综合夫妇双方病史询问贫筛查基检测结果判定高风险夫妇高风险夫妇进行追踪时解受检妇女怀孕情况指导女方怀孕适宜时期接受产前诊断产前诊断象胎样类型胎绒毛羊水脐带血检测项目相应贫基检测
综结合该类产品床实际情况指导原预期途：体外定性检测外周静脉全血胎羊水等样中基组DNAαβ贫相关基αβ贫辅助诊断（遗传诊断）贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断等
结合该类产品中国注册实际情况前认知指导原仅αβ贫辅助诊断（遗传诊断）预期途相关容进行详细阐述针预期途指导原仅部分容进行阐述申请应根产品特性指导原未涉容进行补充做出相应评价
指导原技术求基PCR探针法方法建立分子生物学检测技术（：PCR反点杂交法gapPCR法等）部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学检验原理检测突变类型床意义等方面详细说明申报产品目前市场已获批准类产品间区
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（原总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（原总局公告2014年第44号）简称44号公告求
（二）原材料研究资料
原材料研究资料包括反应成分品（质控品）企业参考品研究资料
1 类产品反应成分般包括基组核酸提取纯化试剂检测需引物探针酶dNTPs反应缓液等申请应提交相关原材料选择制备质量标准等研究资料申请制应提交详细工艺稳定性研究资料外购应提交供应商筛选资料供应商提供原材料质量检定报告
11 核酸提取纯化试剂（）组成原理介绍相关验证资料
12 引物探针
申请应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况建议设计套引物探针供筛选针测位点特异性等进行评价选择佳设计提交详细筛选研究数
申请应针选定引物探针原材料进行质量评价般包括：分子量纯度（HPLC等）浓度探针荧光标记基团激发波长发射波长功性试验等评价结果建立合理质量标准
13酶
酶包括DNA聚合酶尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）等申请应针种酶活性进行验证提交功性试验资料确定酶质量标准
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性UDGUNG应具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性
14脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）
包括dATPdCTPdGTPdTTPdUTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料功性试验资料确定质量标准
2 品（质控品）
试剂盒质控体系通设置种试剂盒品（质控品）实现阳性应少包括代表性突变位点突变类型阴性含野生型序列核酸溶液空白含核酸溶液
该类产品采方法学检验原理显示：检测种样（野生型杂合突变纯合突变）反应体系均报出核酸序列结果均抑制导致假阴性结果进行质量控制需外设置标否试剂盒应外设置标
品采基组DNA细胞系质粒等空白应参样核酸行提取申请应提供品原料选择制备定值程等详细研究数检测结果做出明确范围求
3 企业参考品
企业参考品包括阳性参考品阴性参考品检测限参考品精密度参考品等申请应提交企业参考品原料选择制备方法基序列确认检验标准详细研究资料等
31 阳性参考品：采床样核酸溶液采床样样类型应测样致应少包含检测位点杂合型样时量纳入纯合突变型样某稀基型采细胞系质粒
32 阴性参考品：应包括野生型床样核酸溶液易产生交叉反应源序列样时应量包含检测范围外检测位点样等
33检测限参考品选择低检测限浓度（例：95检出率水）接低检测限浓度（例100检出率水）床样核酸溶液少包含检测位点杂合型样
34 精密度参考品应少包括低浓度杂合突变型床样核酸溶液应少包括代表性突变位点突变类型反应体系均分布
目前该类产品已国家参考品申报产品声称检测位点企业参考品求应低国家参考品
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺研究资料包括工作液配制（引物探针浓度酶浓度dNTPs浓度缓液离子浓度等）分装冻干（）荧光标记（）等工艺程描述确定生产程应关键参数进行效控制采流程图方式描述生产工艺标明关键工艺质控步骤详细说明该步骤质控方法质控标准
反应体系研究指反应条件选择确定程包括样采集预处理（）样量试剂量核酸提取纯化步骤PCR反应条件阈值循环数（Ct值）等确定
适机型反应条件差异应分提交
（四）分析性评估资料
申请应针述项分析性提交详细评估资料包括试验点适仪器试剂规格批号试验方法试验样（类型源数量处理方法基型浓度确认等）接受标准统计方法试验数结等分析性评估实验方法参考国外关体外诊断产品性评估指导原
项性评估应量采适样类型致床样某稀基型采细胞系等
1 核酸提取纯化性（）
进行靶核酸检测前应适核酸提取纯化步骤该步骤应量分离纯化目核酸PCR抑制物检测试剂否含核酸提取纯化组分申请应配套核酸提取纯化方法提取效率提取核酸纯度浓度等做充分验证评价该方法否满足该类产品求
2 检测准确性
建议采干份床样验证该类产品检测准确性样类型说明书声称样类型致样应涵盖野生型检测位点杂合突变型时量纳入纯合突变型某稀基型采细胞系质粒
3 低检测限
该类产品低检测限定义：满足定检测准确性精密度条件够检出目标序列低基组DNA浓度采梯度浓度基组DNA样进行次重复检测确定适检出率水（：95）低基组DNA浓度检测限评价建议采床样细胞系少包含检测位点杂合突变型应明确床样细胞系基组DNA浓度应关系
4 分析特异性
41 应针源序列检测范围外基位点进行交叉反应验证说明交叉反应样制备方法核酸序列确认方法提交详细验证资料
42 应针源外源性干扰物进行干扰试验研究源干扰物涉血脂胆红素血红蛋白白蛋白母体细胞干扰等外源干扰物包括血液样采集抗凝剂常药物等
干扰试验通床样中工添加干扰物质方式评价干扰物质目标序列检测影响直接采集暴露干扰素受试者样进行干扰试验评价建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价干扰应确定产生干扰高浓度
5 精密度
精密度评价应采床样进行试验试验操作完全说明书执行包含核酸提取纯化等步骤（）应反应体系进行精密度评价少覆盖代表性突变位点突变类型
精密度评价需满足求：
51影响检测精密度素进行验证检测试剂身外包括分析仪器操作者点时间检测轮次试剂批次等
52设定合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间重复性进行评价
53精密度评价床样少设置低浓度中高浓度水
54精密度指标设置CV等（）申请应精密度指标评价标准做出合理求
（五）阳性判断值确定资料
建议纳入定数量床样应包括检测位点种基型（野生型杂合突变型时量纳入纯合突变型）采受试者工作特征（ROC）曲线合理方法确定阳性判断值
试剂判读存灰区应解释说明灰区范围确定方法
某检测方法学阳性判断值研究适申请应说明理
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料包括申报产品稳定性研究适样稳定性研究两部分前者包括申报产品实时稳定性开瓶复溶稳定性运输稳定性冻融次数限制研究等者指适样保存条件保存时间等研究
实时稳定性研究应采少三批样品实际储存条件保存成品效期选取时间点进行产品性评价确定产品保存条件效期
核酸提取液保存需核酸提取液保存条件保存时间进行研究
（七）床试验
应满足体外诊断试剂床试验技术指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求相关法规文件更新床试验应符合更新求面仅说明该类产品床试验中应关注重点问题
1．针αβ贫辅助诊断（遗传诊断）预期途
11 床试验机构员
申请应根产品特点预期途综合区种流行病学背景等素选择少3家（含3家）符合法规求床试验机构开展床试验
12 床试验适群床样
具贫症状体征血液学表现细胞低色素疑似贫患者携带者需贫进行鉴诊断疾病患者：缺铁性贫血铁粒细胞性贫血先天性红细胞生成异常性贫血等
床试验样应抗凝外周血样（基组DNA非床样）床样采集处理保存提取等应分满足申报产品说明书试剂说明书（适）第三方试剂说明书（适）相关求
13床试验方法
131已类产品市申报产品
已批准α贫突变β贫突变原选择已市类产品作试剂评价申报产品床检测性
132类产品市申报产品
1321 新突变位点床意义已获行业认（：国相关指南专家识）述认基充分中国群床数床试验选择Sanger基测序（针新点突变）床普遍公认方法（针类型新突变位点缺失）作方法评价新突变位点床检测性外应提交新位点床意义已获行业认相关证该部分资料纳入床方案报告
1322 新突变位点床意义未获行业认床试验应包括两目新突变位点床检测性评价床意义评价新突变位点床检测性评价参考1321新突变位点床意义评价应提交基中国群充分床证证明基型表型关系：访证明基型表型关系床验证资料
14低样量阳性例数
床试验样量应采适统计学方法进行估算详细描述统计方法参数确定
141 床检测性评价样量估算
床检测性评价样量估算分种情况
常见突变位点建议采单组目标值法分估算突变位点床试验低样量通阳性符合率计算需阳性样例数通阴性符合率计算需阴性样例数时考虑脱落情况估算低样总量阳性符合率阴性符合率目标值（床接受低标准）建议均低95
罕见突变位点阴性样例数根述方法进行估算阳性样应保证定例数
极罕见确切床证证明床意义突变位点阴性样例数根述方法进行估算阳性样例数应结合床证确定
142 新位点床意义评价样量估算
新位点床意义评价样量估算建议采抽样调查公式合理方法进行估算
2 针贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断预期途
针述两预期途指导原仅部分容进行阐述申请应根产品特性充分考虑指导原未涉容设计科学合理床试验进行评价
21床试验机构员
申报产品预期途胎产前遗传诊断满足法规求外床试验机构应取产前诊断技术服务资质床试验员应专门培训取资质员机构员应遵循产前诊断技术理办法母婴保健专项技术服务许员资格理办法机构应取母婴保健技术服务执业许证员应取母婴保健技术考核合格证书
22 床试验适群床样
预期途贫高风险夫妇评估适群：贫表型筛查阳性育龄群贫表型筛查阳性育龄群根国家卫生健康委员会贫高发区相关政策确定
预期途胎产前遗传诊断适群：贫高风险夫妇胎贫高风险夫妇确定参考国家卫生健康委员会等相关文件
床试验样应胎羊水等床样（基组DNA非床样）床样采集处理保存提取等应符合国家卫生健康委员会等相关文件求满足产品说明书求
23 低样量阳性例数
针种预期途应分采合理方法估算低样量预期途样类型（羊水脐带血等）应分采合理方法估算低样量
3 预期途应设计科学床试验提供充分证证明预期途
4 预期途通求
41 床试验方法数统计分析
411应床试验方案报告中明确申报产品试剂第三方试剂试验方法
412床试验病例总结表应列表方式表示包括申报产品结果试剂结果第三方试剂检测结果（）床诊断年龄性等
413交叉表分总结两种试剂定性检测结果选择合适统计方法进行统计分析验证两种试剂检测结果致性
414 结果差异样验证
数收集程中两种试剂检测结果致样采合理方法进行复核差异原进行分析需复核应说明理
42 床试验方案
床试验机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案意改动整试验程应床试验机构实验室该实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程
试验方案应确定严格入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原试验操作程结果判定时应采盲法保证试验结果客观性床试验机构选试剂方法应保持致便进行合理统计学分析外申报产品样类型应超越试剂方法样类型求
43床试验报告
应试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必数统计分析方法
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法44号公告医疗器械产品技术求编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关求该类产品作三类体外诊断试剂应原材料生产工艺半成品求等容作附录附技术求正文
目前该类产品已行业标准产品技术求相关求应低行业标准求
（九）产品检验报告
根办法求第三类体外诊断试剂申请注册时应提交连续三生产批次样品检验报告目前该产品已国家参考品产品检验应满足国家参考品求
（十）产品说明书
产品说明书应满足体外诊断试剂说明书编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料相关研究结果保持致面该类产品说明书重点容进行阐述
1预期途应少包括部分容：
11产品定性检测xx样基组DNA中αβ贫xx突变：αβ贫辅助诊断（遗传诊断）贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断
12介绍贫相关床背景信息实验室诊断方法等介绍测靶标（突变位点）相关情况
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分企业应列出相关试剂耗材名称相关信息
23果试剂盒中包含核酸提取纯化试剂组分应注明验证配合商品化核酸提取纯化试剂盒生产企业产品名称医疗器械备案号（）等详细信息
3检验原理
31试剂盒测靶标进行详细描述（基位置突变位点相关特征等）试剂盒探针引物突变判定等进行详细介绍样反应组合品设置荧光信号检测原理等进行介绍
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明反应体系中添加相关防污染组分（UNG酶）应作机理进行适介绍
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性等应明确具体储存条件效期等信息
5样求
样采集处理运送保存：明确样采集核酸提取纯化前处理（离心洗涤等）保存条件期限运送条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数限制等
6适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71实验条件：实验室分区实验环境温度湿度空调气流方控制等注意事项
72试剂配制方法注意事项
73详述核酸提取纯化条件步骤注意事项（适）核酸提取纯化环节进行合理质控明确提取核酸浓度纯度等质量求
74扩增反应前准备：加样体积序等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相应动化检测程序相关注意事项
76仪器设置（适）：特殊参数探针荧光素标记情况测样品荧光通道选择等
8检验结果解释
结合品样检测结果检测类型列表形式详述出现结果相应解释存检测灰区应详述灰区结果处理方式
9检验方法局限性
91申报产品仅述检测类型xx进行验证
92关假阴性结果性分析
921合理样采集运送处理核酸度降解均导致假阴性结果
922未验证干扰PCR抑制子等会导致假阴性结果（）
10产品性指标简述性指标：
101低检测限：简单介绍低检测限确定方法明确低检测限结果
102阳性阴性参考品符合率
103精密度：简单介绍精密度确定方法明确精密度结果
104分析特异性
1041交叉反应验证：源性序列等交叉反应验证
1042干扰物质验证：样中常见干扰物质检测结果影响
105试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
11注意事项应少包括容：
111该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
112床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法现行效版等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
三起草单位
国家药品监督理局医疗器械技术审评中心
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
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中海贫血相关基检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请中海贫血相关基检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原中海贫血相关基检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究验证资料相关员应遵循法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
中海贫血（简称贫）种常染色体隐性遗传病珠蛋白基发生突变（包括点突变缺失等）致珠蛋白肽链合成减少完全合成导致组单基遗传性溶血性疾病轻者床表现重者进行性溶血性贫血特征根珠蛋白肽链合成受抑制类型贫分αβγ贫等床常见αβ贫贫分布中海岸东南亚少数非洲区具明显种族特性域分布差异贫国南方区常见危害遗传病尤广西云南广东海南四川贵州等省份甚云南海南广东贫基群携带率达10广西更达20
α贫α珠蛋白基发生突变引起α珠蛋白基簇位16p133包括胎期成期表达2基（α2α1）基排列序5’α2α13’根单倍型情况α贫分3类：（1）缺失型α+贫（α）缺失1α基（2）缺失型α0贫（）2α基时缺失（3）非缺失型α+贫（αTαααT ）1α1α2基发生点突变少数碱基缺失中国现已发现少19种α珠蛋白基片段缺失38种α珠蛋白基点突变中6 种α珠蛋白基突变：SEAα37α42αWSα（HBA2：c369C>G）αQSα（HBA2：c377 T>C）αCSα（HBA2：c427T>C）占患病群总数98
α贫基型床分型关系已基阐明α贫表型严重程度着功性α珠蛋白基减少加重：（1）1α基缺失点突变（αααααTαααTααα）称静止型α贫通常贫血血液学表现细胞低色素（2）2α基缺失复合α基点突变点突变基型αααααααTαTαααTααTα称轻型α贫床表现贫血轻度贫血血液学检查细胞低色素特征（3）3α基缺失复合α基点突变基型ααTα称中间型α贫称Hb H病患者轻重度贫血某基型αTααTα病例（αCSααCSααQSααQSααCSααQSα）表现Hb H病通常αTα非缺失型 Hb H病较单纯缺失型Hb H病（α）床表现更严重特基型αCSααQSαHb H病患者贫血程度较严重（4）4α基缺失基型称重型α贫称Hb Bart’s胎水肿综合征类体般法存活出生分娩半时死亡
β贫β珠蛋白基发生突变引起点突变少数缺失型β珠蛋白基簇位11p153包括2成期表达基（βδ）基排列序5’δβ3’根β珠蛋白链合成量程度β贫分3类：（1）β0贫β珠蛋白链完全合成等位基称β0贫等位基（2）β+贫β珠蛋白链合成减少等位基称β+贫等位基（3）β++贫称沉默型β贫β珠蛋白链合成轻微减少中国已少报道84种β珠蛋白基点突变11种β珠蛋白基缺失中6种点突变：HBB：c126_129delCTTTHBB：c52A>THBB：c78A>GHBB： c79G>AHBB： c316197C>THBB： c216_217insA占全部突变类型90
β贫床表型分4种：（1）静止型β贫基型β++βN血液学表型正常界般通分子诊断识（2）轻型β贫基型β0βNβ+βN床表现细胞低色素HbA2值升高（3）中间型β贫基型β+β+β+β0表型变异范围轻度贫血中度贫血幼期出现中度贫血（4）重型β贫基型β+β0β0β0通常伴严重贫血需定期输血存活患出生时症状常婴期（312月龄）发病治疗患5岁前死亡外中间型分子基础较复杂显性β贫突变杂合子（βDβN）合α贫突变β贫突变纯合子（β0β0）合α珠蛋白三联体β贫突变杂合子（β0βNβ+βN）会显示中间型表型
2018年发布重型β中海贫血诊断治疗指南明确规定：重型β中海贫血诊断条件者均应进行基诊断基型纯合子双重杂合子确诊病指标2018年发布童非输血赖型中海贫血诊治理专家识明确规定：贫基检测非输血赖型贫诊断
外国家卫生健康委员会发布相关文件求：减少重型贫患出生国贫高发省份实施贫防控试点项目流程包括：（1）新婚夫妇计划怀孕夫妇怀孕前孕期进行血常规初筛（2）夫妇方双方血常规检查结果阳性夫妇进行血红蛋白分析复筛（3）血红蛋白分析复筛结果均阳性夫妇取抗凝静脉全血进行相应α+β贫基检测（4）综合夫妇双方病史询问贫筛查基检测结果判定高风险夫妇高风险夫妇进行追踪时解受检妇女怀孕情况指导女方怀孕适宜时期接受产前诊断产前诊断象胎样类型胎绒毛羊水脐带血检测项目相应贫基检测
综结合该类产品床实际情况指导原预期途：体外定性检测外周静脉全血胎羊水等样中基组DNAαβ贫相关基αβ贫辅助诊断（遗传诊断）贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断等
结合该类产品中国注册实际情况前认知指导原仅αβ贫辅助诊断（遗传诊断）预期途相关容进行详细阐述针预期途指导原仅部分容进行阐述申请应根产品特性指导原未涉容进行补充做出相应评价
指导原技术求基PCR探针法方法建立分子生物学检测技术（：PCR反点杂交法gapPCR法等）部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学检验原理检测突变类型床意义等方面详细说明申报产品目前市场已获批准类产品间区
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（原总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（原总局公告2014年第44号）简称44号公告求
（二）原材料研究资料
原材料研究资料包括反应成分品（质控品）企业参考品研究资料
1 类产品反应成分般包括基组核酸提取纯化试剂检测需引物探针酶dNTPs反应缓液等申请应提交相关原材料选择制备质量标准等研究资料申请制应提交详细工艺稳定性研究资料外购应提交供应商筛选资料供应商提供原材料质量检定报告
11 核酸提取纯化试剂（）组成原理介绍相关验证资料
12 引物探针
申请应详述引物探针设计原提供引物探针核酸序列模板核酸序列两者应情况建议设计套引物探针供筛选针测位点特异性等进行评价选择佳设计提交详细筛选研究数
申请应针选定引物探针原材料进行质量评价般包括：分子量纯度（HPLC等）浓度探针荧光标记基团激发波长发射波长功性试验等评价结果建立合理质量标准
13酶
酶包括DNA聚合酶尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）等申请应针种酶活性进行验证提交功性试验资料确定酶质量标准
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性UDGUNG应具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性
14脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）
包括dATPdCTPdGTPdTTPdUTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料功性试验资料确定质量标准
2 品（质控品）
试剂盒质控体系通设置种试剂盒品（质控品）实现阳性应少包括代表性突变位点突变类型阴性含野生型序列核酸溶液空白含核酸溶液
该类产品采方法学检验原理显示：检测种样（野生型杂合突变纯合突变）反应体系均报出核酸序列结果均抑制导致假阴性结果进行质量控制需外设置标否试剂盒应外设置标
品采基组DNA细胞系质粒等空白应参样核酸行提取申请应提供品原料选择制备定值程等详细研究数检测结果做出明确范围求
3 企业参考品
企业参考品包括阳性参考品阴性参考品检测限参考品精密度参考品等申请应提交企业参考品原料选择制备方法基序列确认检验标准详细研究资料等
31 阳性参考品：采床样核酸溶液采床样样类型应测样致应少包含检测位点杂合型样时量纳入纯合突变型样某稀基型采细胞系质粒
32 阴性参考品：应包括野生型床样核酸溶液易产生交叉反应源序列样时应量包含检测范围外检测位点样等
33检测限参考品选择低检测限浓度（例：95检出率水）接低检测限浓度（例100检出率水）床样核酸溶液少包含检测位点杂合型样
34 精密度参考品应少包括低浓度杂合突变型床样核酸溶液应少包括代表性突变位点突变类型反应体系均分布
目前该类产品已国家参考品申报产品声称检测位点企业参考品求应低国家参考品
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺研究资料包括工作液配制（引物探针浓度酶浓度dNTPs浓度缓液离子浓度等）分装冻干（）荧光标记（）等工艺程描述确定生产程应关键参数进行效控制采流程图方式描述生产工艺标明关键工艺质控步骤详细说明该步骤质控方法质控标准
反应体系研究指反应条件选择确定程包括样采集预处理（）样量试剂量核酸提取纯化步骤PCR反应条件阈值循环数（Ct值）等确定
适机型反应条件差异应分提交
（四）分析性评估资料
申请应针述项分析性提交详细评估资料包括试验点适仪器试剂规格批号试验方法试验样（类型源数量处理方法基型浓度确认等）接受标准统计方法试验数结等分析性评估实验方法参考国外关体外诊断产品性评估指导原
项性评估应量采适样类型致床样某稀基型采细胞系等
1 核酸提取纯化性（）
进行靶核酸检测前应适核酸提取纯化步骤该步骤应量分离纯化目核酸PCR抑制物检测试剂否含核酸提取纯化组分申请应配套核酸提取纯化方法提取效率提取核酸纯度浓度等做充分验证评价该方法否满足该类产品求
2 检测准确性
建议采干份床样验证该类产品检测准确性样类型说明书声称样类型致样应涵盖野生型检测位点杂合突变型时量纳入纯合突变型某稀基型采细胞系质粒
3 低检测限
该类产品低检测限定义：满足定检测准确性精密度条件够检出目标序列低基组DNA浓度采梯度浓度基组DNA样进行次重复检测确定适检出率水（：95）低基组DNA浓度检测限评价建议采床样细胞系少包含检测位点杂合突变型应明确床样细胞系基组DNA浓度应关系
4 分析特异性
41 应针源序列检测范围外基位点进行交叉反应验证说明交叉反应样制备方法核酸序列确认方法提交详细验证资料
42 应针源外源性干扰物进行干扰试验研究源干扰物涉血脂胆红素血红蛋白白蛋白母体细胞干扰等外源干扰物包括血液样采集抗凝剂常药物等
干扰试验通床样中工添加干扰物质方式评价干扰物质目标序列检测影响直接采集暴露干扰素受试者样进行干扰试验评价建议申请种干扰物质潜浓度（差条件）条件进行评价干扰应确定产生干扰高浓度
5 精密度
精密度评价应采床样进行试验试验操作完全说明书执行包含核酸提取纯化等步骤（）应反应体系进行精密度评价少覆盖代表性突变位点突变类型
精密度评价需满足求：
51影响检测精密度素进行验证检测试剂身外包括分析仪器操作者点时间检测轮次试剂批次等
52设定合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间重复性进行评价
53精密度评价床样少设置低浓度中高浓度水
54精密度指标设置CV等（）申请应精密度指标评价标准做出合理求
（五）阳性判断值确定资料
建议纳入定数量床样应包括检测位点种基型（野生型杂合突变型时量纳入纯合突变型）采受试者工作特征（ROC）曲线合理方法确定阳性判断值
试剂判读存灰区应解释说明灰区范围确定方法
某检测方法学阳性判断值研究适申请应说明理
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料包括申报产品稳定性研究适样稳定性研究两部分前者包括申报产品实时稳定性开瓶复溶稳定性运输稳定性冻融次数限制研究等者指适样保存条件保存时间等研究
实时稳定性研究应采少三批样品实际储存条件保存成品效期选取时间点进行产品性评价确定产品保存条件效期
核酸提取液保存需核酸提取液保存条件保存时间进行研究
（七）床试验
应满足体外诊断试剂床试验技术指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求相关法规文件更新床试验应符合更新求面仅说明该类产品床试验中应关注重点问题
1．针αβ贫辅助诊断（遗传诊断）预期途
11 床试验机构员
申请应根产品特点预期途综合区种流行病学背景等素选择少3家（含3家）符合法规求床试验机构开展床试验
12 床试验适群床样
具贫症状体征血液学表现细胞低色素疑似贫患者携带者需贫进行鉴诊断疾病患者：缺铁性贫血铁粒细胞性贫血先天性红细胞生成异常性贫血等
床试验样应抗凝外周血样（基组DNA非床样）床样采集处理保存提取等应分满足申报产品说明书试剂说明书（适）第三方试剂说明书（适）相关求
13床试验方法
131已类产品市申报产品
已批准α贫突变β贫突变原选择已市类产品作试剂评价申报产品床检测性
132类产品市申报产品
1321 新突变位点床意义已获行业认（：国相关指南专家识）述认基充分中国群床数床试验选择Sanger基测序（针新点突变）床普遍公认方法（针类型新突变位点缺失）作方法评价新突变位点床检测性外应提交新位点床意义已获行业认相关证该部分资料纳入床方案报告
1322 新突变位点床意义未获行业认床试验应包括两目新突变位点床检测性评价床意义评价新突变位点床检测性评价参考1321新突变位点床意义评价应提交基中国群充分床证证明基型表型关系：访证明基型表型关系床验证资料
14低样量阳性例数
床试验样量应采适统计学方法进行估算详细描述统计方法参数确定
141 床检测性评价样量估算
床检测性评价样量估算分种情况
常见突变位点建议采单组目标值法分估算突变位点床试验低样量通阳性符合率计算需阳性样例数通阴性符合率计算需阴性样例数时考虑脱落情况估算低样总量阳性符合率阴性符合率目标值（床接受低标准）建议均低95
罕见突变位点阴性样例数根述方法进行估算阳性样应保证定例数
极罕见确切床证证明床意义突变位点阴性样例数根述方法进行估算阳性样例数应结合床证确定
142 新位点床意义评价样量估算
新位点床意义评价样量估算建议采抽样调查公式合理方法进行估算
2 针贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断预期途
针述两预期途指导原仅部分容进行阐述申请应根产品特性充分考虑指导原未涉容设计科学合理床试验进行评价
21床试验机构员
申报产品预期途胎产前遗传诊断满足法规求外床试验机构应取产前诊断技术服务资质床试验员应专门培训取资质员机构员应遵循产前诊断技术理办法母婴保健专项技术服务许员资格理办法机构应取母婴保健技术服务执业许证员应取母婴保健技术考核合格证书
22 床试验适群床样
预期途贫高风险夫妇评估适群：贫表型筛查阳性育龄群贫表型筛查阳性育龄群根国家卫生健康委员会贫高发区相关政策确定
预期途胎产前遗传诊断适群：贫高风险夫妇胎贫高风险夫妇确定参考国家卫生健康委员会等相关文件
床试验样应胎羊水等床样（基组DNA非床样）床样采集处理保存提取等应符合国家卫生健康委员会等相关文件求满足产品说明书求
23 低样量阳性例数
针种预期途应分采合理方法估算低样量预期途样类型（羊水脐带血等）应分采合理方法估算低样量
3 预期途应设计科学床试验提供充分证证明预期途
4 预期途通求
41 床试验方法数统计分析
411应床试验方案报告中明确申报产品试剂第三方试剂试验方法
412床试验病例总结表应列表方式表示包括申报产品结果试剂结果第三方试剂检测结果（）床诊断年龄性等
413交叉表分总结两种试剂定性检测结果选择合适统计方法进行统计分析验证两种试剂检测结果致性
414 结果差异样验证
数收集程中两种试剂检测结果致样采合理方法进行复核差异原进行分析需复核应说明理
42 床试验方案
床试验机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案意改动整试验程应床试验机构实验室该实验室技术员操作完成申报单位技术员进行必技术指导外意干涉实验进程
试验方案应确定严格入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原试验操作程结果判定时应采盲法保证试验结果客观性床试验机构选试剂方法应保持致便进行合理统计学分析外申报产品样类型应超越试剂方法样类型求
43床试验报告
应试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必数统计分析方法
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法44号公告医疗器械产品技术求编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关求该类产品作三类体外诊断试剂应原材料生产工艺半成品求等容作附录附技术求正文
目前该类产品已行业标准产品技术求相关求应低行业标准求
（九）产品检验报告
根办法求第三类体外诊断试剂申请注册时应提交连续三生产批次样品检验报告目前该产品已国家参考品产品检验应满足国家参考品求
（十）产品说明书
产品说明书应满足体外诊断试剂说明书编写指导原（原国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求产品说明书容均应申请提交注册申报资料相关研究结果保持致面该类产品说明书重点容进行阐述
1预期途应少包括部分容：
11产品定性检测xx样基组DNA中αβ贫xx突变：αβ贫辅助诊断（遗传诊断）贫高风险夫妇评估胎产前遗传诊断
12介绍贫相关床背景信息实验室诊断方法等介绍测靶标（突变位点）相关情况
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分企业应列出相关试剂耗材名称相关信息
23果试剂盒中包含核酸提取纯化试剂组分应注明验证配合商品化核酸提取纯化试剂盒生产企业产品名称医疗器械备案号（）等详细信息
3检验原理
31试剂盒测靶标进行详细描述（基位置突变位点相关特征等）试剂盒探针引物突变判定等进行详细介绍样反应组合品设置荧光信号检测原理等进行介绍
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明反应体系中添加相关防污染组分（UNG酶）应作机理进行适介绍
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性等应明确具体储存条件效期等信息
5样求
样采集处理运送保存：明确样采集核酸提取纯化前处理（离心洗涤等）保存条件期限运送条件等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数限制等
6适仪器
适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71实验条件：实验室分区实验环境温度湿度空调气流方控制等注意事项
72试剂配制方法注意事项
73详述核酸提取纯化条件步骤注意事项（适）核酸提取纯化环节进行合理质控明确提取核酸浓度纯度等质量求
74扩增反应前准备：加样体积序等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相应动化检测程序相关注意事项
76仪器设置（适）：特殊参数探针荧光素标记情况测样品荧光通道选择等
8检验结果解释
结合品样检测结果检测类型列表形式详述出现结果相应解释存检测灰区应详述灰区结果处理方式
9检验方法局限性
91申报产品仅述检测类型xx进行验证
92关假阴性结果性分析
921合理样采集运送处理核酸度降解均导致假阴性结果
922未验证干扰PCR抑制子等会导致假阴性结果（）
10产品性指标简述性指标：
101低检测限：简单介绍低检测限确定方法明确低检测限结果
102阳性阴性参考品符合率
103精密度：简单介绍精密度确定方法明确精密度结果
104分析特异性
1041交叉反应验证：源性序列等交叉反应验证
1042干扰物质验证：样中常见干扰物质检测结果影响
105试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
11注意事项应少包括容：
111该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
112床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法现行效版等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
三起草单位
国家药品监督理局医疗器械技术审评中心
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