附件1
表皮生长子受体（EGFR）突变基检测
试剂（PCR法）注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请表皮生长子受体（Epidermal Growth Factor Receptor简称EGFR）突变基检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原针EGFR突变基检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需详细阐明理科学合理性进行验证提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
指导原述EGFR突变基检测试剂指基核酸聚合酶链式反应（PCR法）EGFR突变基检测目标体外定性检测细胞学样病理组织学样外周血样体液样提取核酸组分中目标基序列
EGFR原癌基cerbB1表达产物表皮生长子受体（HER）家族成员HER家族EGFRHER1erbB1HER2neuerbB2HER3erbB3HER4erbB4四分子构成细胞生长增殖分化等生理程中发挥重调节作
EGFR种跨膜酪氨酸激酶受体该受体激酶域激活癌细胞增殖转移凋亡等种信号传导通路关肺腺癌患者EGFR基敏感突变亚裔群阳性率高高加索群EGFR突变发生胞酪氨酸激酶（TK）区域前四外显子（18～21）目前发现TK区域突变30种缺失突变发生外显子19常见del E746A750代突变常见发生外显子21L858R复制插入突变发生外显子20中外显子20T790M代突变代EGFR酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase InhibitorTKI）耐药突变外许类型突变床意义尚明确EGFR作癌症治疗分子靶标受普遍关注已陆续开发出吉非尼（Gefitinib）厄洛尼（Erlotinib）埃克尼（Icotinib）等TKI
肿瘤组织样获取肿瘤基相关信息源部分晚期肺癌患者已失手术机会种种原获取肿瘤组织样研究结果表明实体肿瘤患者外周血中存源凋亡坏死肿瘤细胞游离DNA晚期肺癌患者获取肺癌组织样时选择外周血样进行EGFR突变基检测获病理组织时建议病理组织提取检测结果优先考虑肿瘤组织难获取时外周血样EGFR突变基检测方式重补充手段
指导原相关技术求基荧光探针PCR方法EGFR突变基试剂进行评价基荧光探针PCR原理类试剂适指导原部分相关技术求申请应阐述适理结合身产品特性提出科学合理评价方法申请根实际产品特性选择适合方法结合指导原补充需评价验证分子生物学检测技术适申请参考指导原部分相关技术求进行性评价
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品指导原适EGFR基拷贝数变化检测核酸序列测定免疫组化技术荧光原位杂交法
EGFR病理组织学样外周血样检测中存较差异参考品质控品设置分析性评估床评价求产品技术求产品说明书等方面均存求便申请指导原进行理解产品预期途组织学样检测预期途外周血样检测试剂申报求进行分开说明需说明申请申报产品时包括外周血样组织学样相部分申请合提交注册申报资料原注册产品预期途中仅组织样类型需增加外周血样类型考虑外周血样类型组织样类型中EGFR片段长度样中突变例等差异申请完成许事项变更申报资料求应提交扩增反应体系性评价外周血分析性评价外周血样保存处理床评价等研究资料
申报试剂作肿瘤体化伴检测试剂非细胞肺癌（NSCLC）体化治疗申请EGFR申报试剂运癌症类型研究申请参指导原适研究体系应强调肿瘤药物体化检测试剂治疗药物具关联性申请需结合EGFR突变基检测治疗药物预期途限定癌症类型进行联合评价研究
二注册申报资料求
（）综述资料
1产品预期途描述产品预期途预期途相关床背景情况EGFR突变基群间关联药物EGFR突变类型患者治疗效果描述适应症发生率易感群等相关床实验室诊断方法等
2产品描述描述产品采技术原理原材料源制备方法生产工艺程质控品校准品制备方法情况
3关生物安全性方面说明体外诊断试剂中原材料种动物病原体源组织体液等生物材料处理者添加某物质制备成源性材料须关传染病（HIVHBVHCV等）病原体检测予说明提供相关证明文件动物源微生物源材料应提供相应说明文件证明产品运输程中者环境安全述原材料采灭活等试验方法予说明
4关产品研究结果总结评价
5包括类产品国外批准市情况相关产品采技术方法床应情况申请注册产品国外类产品异等新研制体外诊断试剂产品需提供测物预期适床适应症间关系文献资料
（二）原材料研究资料
类产品原材料应包括EGFR突变基检测试剂组成成分引物探针酶反应缓液提取成分（包含）等申请行研制原材料申请应EGFR目基序列确定引物探针选择酶选择验证等实验程予详述提供原材料性研究资料：外观纯度蛋白浓度功性研究等制备完成原料成品应进行质量检验确认符合标准求整生产工艺应稳定控申请外购原材料应详述原材料外购方源提交外购方出具原材料性指标质量控制资料详述申请外购原材料指标质量求确定该原材料作产品原材料详细
1核酸分离纯化组分（）组成原理介绍相关验证资料
2PCR组分原料（包括引物探针种酶原料）选择制备质量标准实验研究资料包括容：
21脱氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸组成成分包括：dATPdUTPdGTPdCTPdTTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料
22引物
应优化单突变基专引物相浓度避免核酸靶序列时扩增时出现相互影响竞争引物设计时应反应体系中引物进行筛选避免引物二聚体形成保证靶序列检测准确性EGFR检测试剂中突变基引物浓度必须进行优化应根靶序列突变性质C+G含量等确定突变基引物长度浓度单引物适浓度应考虑引物浓度间相互影响定数量碱基构成特定序列通常采DNA合成仪工合成合成聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）适宜方法纯化需提供引物分子量纯度稳定性功性实验等验证资料外购应提供合成机构出具合成产物质检证明PAGE结果高效液相色谱法（HPLC）分析图谱应引物结构进行引物扩增区段应重复序列
23探针
特定带示踪物（标记物）已知核酸片段（寡聚核苷酸片段）互补核酸序列退火杂交特定核酸序列探测合成PAGE适宜方法纯化5＇端（3＇端）进行标记HPLC适宜方法纯化纯度应达HPLC纯应提供合成机构出具合成产物质检证明HPLC分析图谱应探针分子量纯度标记荧光基团进行核实进行功性试验验证
24酶
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性：94℃保温1时保持50活性尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性逆转录酶具逆转录酶活性核酸切酶活性应酶活性进行合理验证
3核酸类检测试剂包装材料耗材应脱氧核糖核酸酶（DNase）核糖核酸酶（RNase）污染
4企业部参考品
企业部参考品保证产品性稳定性检测值溯源重构成参考品研究应包括原料选择制备程定值研究评价指标统计学分析等申请应部参考品源基序列设置等信息进行精确实验验证提供参考品溯源程测量程序参考方法相关信息详细验证资料申请应根产品性验证实际情况行设定部参考品阳性参考品应着重考虑EGFR突变基型求阴性参考品涉分析特异性（交叉反应）验证情况该类产品国家标准品低国家参考品求前提申请结合实际情况设置合理部参考品具体求：
41组织样参考品设置求
411阳性参考品
阳性参考品中常见基突变位点建议采床样提取DNA储备液细胞系作原料突变位点采DNA储备液细胞系EGFR突变扩增产物模拟样作原料采EGFR突变扩增产物作阳性参考品应模拟真实样需样基质进行基质效应研究
试剂盒（分型分型）覆盖突变位点均应设置相应阳性参考品突变位点设置突变百分率梯度中少应包括高浓度低浓度阳性参考品阳性参考品突变形式拷贝数需采效方法（测序方法数字化PCR等）进行确认明确接受标准
412阴性参考品
采确认相应靶突变序列DNA储存液野生型基组DNAHER家族DNA等
413检测限参考品
检测限参考品原料求参考阳性参考品需包括突变类型进行低检测限性评估时应设置梯度扩增反应终体系总核酸浓度突变序列占百分率两方面进行评价建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
414精密度参考品
精密度参考品原料求参考阳性参考品需少包括弱阳性中强阳性水精密度验证中强阳性精密度参考品常见突变类型理较难测突变序列时设置阴性参考品精密度验证
42外周血样参考品设置求
421阳性参考品
阳性参考品中常见突变基位点建议采床样提取DNA储备液细胞系作原料考虑外周血中EGFR突变基DNA含量较低突变位点采DNA储备液细胞系EGFR突变基扩增产物模拟样样基质应血浆工模拟样血浆时应提前确认血浆中DNA背景浓度工模拟样时应模拟真实样模拟样进行基质效应研究
试剂盒（分型分型）覆盖突变位点均应设置相应阳性参考品突变位点设置突变百分率梯度中需少包括弱阳性参考品阳性参考品突变形式拷贝数需采效方法（测序方法数字PCR等）进行确认明确接受标准
422阴性参考品
采确认相应靶突变序列DNA储存液野生型基组DNAHER家族DNA等
423检测限参考品
检测限参考品原料求参考阳性参考品需包括突变类型进行低检测限性评估时应设置梯度建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
424精密度参考品
精密度参考品原料求参考阳性参考品需少包括弱阳性中强阳性水精密度验证中强阳性精密度参考品常见突变类型理较难测突变序列时设置阴性参考品精密度验证
5试剂盒品（质控品）
试剂盒质控体系通设置种试剂盒品实现质控体系需考虑样核酸分离纯化配液加样试剂仪器性扩增反应抑制物（抑制）交叉污染靶核酸降解等素造成假阴性假阳性结果进行合理质量控制品采质粒假病毒床样核酸提取液等进行配置申报资料应试剂盒品关原料选择制备定值程等试验资料详细说明申请应视申报产品具体情况设置合理试剂盒品（质控品）试剂盒质控体系考虑方面求：
51阳性品（质控品）
申请应阳性品（质控品）Ct值提出明确范围求样反应覆盖种突变序列检测（分型分型）相应阳性应选择较常见突变序列理较难测突变序列作阳性
52阴性
阴性含野生型核酸序列核酸溶液空白交叉污染导致假阳性结果进行质控阴性品应参样核酸行提取
53（标）
（标）抑制导致假阴性结果进行质量控制申请应（标）引物探针模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线量降低靶基检测造成抑制
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺反应体系研究资料应反应体系涉基容：床样量试剂量反应条件质控体系设置阈值循环数（Ct）值界值确定等提供确切配制工作液种原材料配应符合求原材料应混合均匀配制程应pH电导率离子浓度等关键参数进行效控制包括容：
1生产工艺介绍图表方式表示
2反应原理介绍
3基位点选择方法学特性介绍
4确定佳PCR反应体系研究资料包括酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度等
5确定PCR反应阶段温度时间循环数研究资料反应体系相突变基相反应条件核酸扩增效率否存差
6基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）确定研究资料应明确相反应条件基类型Ct否相
7适机型反应条件果差异应分详述
8申报产品包含核酸分离纯化试剂应提交核酸分离纯化程进行工艺优化研究资料
（四）分析性评估资料
分析性评估反映产品原材料选择生产工艺反应体系等方面素设置否合理客观评价指标检测试剂性研究方案应结合产品反应原理床途条件等综合素进行设计性研究应涵盖产品研制阶段试剂盒进行性验证研究资料包括具体研究方法控标准实验数统计分析等详细资料
1病理组织学样类型评价求
11低检测限
病理组织学样类型低检测限研究应包括扩增反应终体系中突变序列百分率申报产品反应体系中总核酸浓度两素
常见突变基类型建议采EGFR突变型非细胞肺癌（NSCLC）福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）EGFR野生型NSCLC FFPE样细胞系制备DNA存储液罕见突变基类型建议采DNA储备液细胞系质粒EGFR野生型NSCLC FFPE样制备DNA存储液
EGFR突变基类型例混合应注意事项：种突变基类型样储存液突变序列占例进行混合结合PCR方法检测灵敏度病理组织学样类型处针EGFR突变基类型低例情况进行配108起始例混合少应包括目标检测限检测限少2梯度例范围研究资料例混合样建议采数字化PCR高通量测序法等方法检测样实际混合例实际混合例作EGFR突变基低检测限进行续研究时EGFR突变基例研究程中应设置EGFR野生型样作空白
确定反应体系总样加样量反应体系中需DNA总量申请需说明uLDNA加样量总DNA浓度确定方法进行混合稀释时FFPE样应原混合配置样类型相建议申请设计显著高反应体系高DNA加样量DNA存储浓度实际EGFR突变例进行梯度DNA浓度检测DNA浓度检测少3次梯度DNA浓度范围应涵盖申报产品反应体系中设定高DNA浓度低DNA浓度确定组织中低检测限组织样低检测限水附额外检测部分接低检测限样确认低检测限DNA浓度
111申报产品适核酸提取方法种核酸提取方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
112申报产品适适机型种适机型应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
113病理组织切片提取方法应说明书致申报产品适种病理组织切片制作方法低检测限应种病理组织切片制作方法进行验证
12分析特异性
121交叉反应
该类产品肺部肿瘤存较强关联性申请设计交叉反应研究时应点纳入考虑
1211申请应考虑靶序列核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列交叉反应建议交叉反应验证考虑素：EGFR基序列HER家族基浓度野生型DNA样非类基组基肺部相关感染微生物等
1212产生交叉反应病原体需床意义相关浓度进行检测细菌浓度水建议少106 cfumL病毒浓度水建议少105 pfumL需明确进行交叉反应病原体类型滴度野生型DNA少包含100ngμL野生型核酸样应提供交叉反应验证突变野生型序列源序列确认浓度选择等试验资料
122干扰物质
1221申请应根试剂盒采样类型确定潜干扰物质：常见治疗药物病理组织处理程样穿刺程缓液处理液等
1222干扰试验样建议选择医学相关水干扰物质浓度少EGFR突变基弱阳性样进行验证
123关分析特异性信息应产品说明书产品性指标项中体现
13精密度
申请应项精密度指标评价标准做出合理求具体实验方法参考国际国关体外诊断产品性评估文件进行针类产品精密度评价包括求：
131影响检测精密度变量进行验证申报试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应PCR分析仪操作者点等素进行相关验证
132合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间精密度进行评价
133精密度评价样应考虑部分EGFR常见突变基类型床样阳性精密度参考品阴性精密度参考品等
14阳性阴性参考品符合率
水突变位点阳性参考品均应求检出阳性考虑浓度梯度应水阳性参考品设置相应Ct值限制阴性参考品引物探针组合检测条件均应检出阴性野生型参考品设置相应引物探针组合检测应阳性
15样稳定性
151样提取前核酸序列稳定性
福尔马林固定石蜡包埋组织切片样申请应组织样保存温度保存年限进行限定建议明确组织切片样规范采集标准验证时间段保存组织样检测结果影响
新鲜冰冻切片样应限定新鲜冰冻切片样检测时限明确新鲜冰冻切片切片求
152样核酸提取评价求
申请需设置评价方案（：NSCLC FFPE组织样中段部分行切10份切片样等）评价指标评价样核酸提取程重复性
样核酸分离纯化目：富集靶核酸浓度保证靶核酸序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物样核酸分离纯化决定续核酸扩增程成败素石蜡包埋组织样福尔马林固定程中会样品中核酸核酸间核酸蛋白间发生交联组织蛋白种类含量存差异组织核酸提取试剂效率申报产品否含核酸分离纯化组分申请应核酸分离纯化环节做充分验证量分离出目核酸外应相应纯化步骤PCR抑制物常见核酸分离纯化方法均优势足申请应结合申报产品特性合理选择核酸分离纯化试剂提供详细验证资料
153样提取核酸序列稳定性
应检测核酸含量设置反应体系需核酸含量限限反应体系中起始DNA浓度高导致反应体系发生非特异性扩增产生假阳性结果反应体系中起始DNA浓度低导致反应体系靶序列扩增反应产生假阴性结果采紫外见分光光度计DNA浓度进行定量通260 nm280 nm处吸光度值（OD260OD280）方法评价纯度设置反应体系需初始DNA含量范围单位体积DNA浓度超需浓度限限应提供相应改进措施时应核酸提取物保存时间保存温度进行验证评价冻融次数储存条件等样提取核酸序列稳定性影响
154样完整性
样提取前提取程提取储存期间核酸会发生程度降解降解降低低程度（提取前提取）应避免样品次冷冻融化必时申请应评价提取前提取冻融次数储存条件等素长时间储存应前评价核酸完整性较检测结果储存前检测结果致性采琼脂糖凝胶电泳者参基PCR检测等方法
2外周血类型评价求
21低检测限
EGFR外周血中含量较低片段较短易降解评价该部分低检测限时建议拟定量DNA储备液细胞系EGFR突变扩增产物放入确定体积血浆中然逐步稀释稀释浓度重复检测3次确定外周血中低检测限外周血低检测限水附额外检测部分接低检测限样确认低检测限DNA浓度申请设置基础浓度范围50pgL浓度进行稀释少包括目标检测限检测限少2梯度例范围研究资料应试剂检测基型述方法验证低检测限申请时需说明总DNA浓度确定方法
211申报产品适核酸提取方法种核酸提取方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
212申报产品适适机型种适机型应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
213申报产品适外周血采血采集方法保存方法种外周血采集方法保存方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
22分析特异性
221交叉反应
该类产品肺部肿瘤存较强关联性申请设计交叉反应研究时应点纳入考虑
2211申请应考虑靶序列核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列交叉反应建议交叉反应验证考虑素：EGFR基序列HER家族基等浓度野生型DNA样非类基组基等
2212产生交叉反应病原体需床意义相关浓度进行检测细菌浓度水建议少106 cfumL病毒浓度水建议少105 pfumL需明确进行交叉反应病原体类型滴度野生型DNA少包含100ngμL野生型核酸样应提供交叉反应验证突变野生型序列源序列确认浓度选择等试验资料
222干扰物质
2221申请应根试剂盒采样类型确定潜干扰物质：外周血中干扰成分类DNA样采集保存中活性成分常见治疗药物等
2222干扰试验样建议选择医学相关水干扰物质浓度少EGFR突变基弱阳性样进行验证
223关分析特异性信息应产品说明书产品性指标项中体现
23精密度
申请应项精密度指标评价标准做出合理求具体实验方法参考国际国关体外诊断产品性评估文件进行针类产品精密度评价包括求：
231影响检测精密度变量进行验证申报试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应PCR分析仪操作者点等素进行相关验证
232合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间精密度进行评价
233精密度评价样应考虑血浆基质部分EGFR常见突变基类型样阳性精密度参考品阴性精密度参考品等
24阳性阴性参考品符合率
水突变位点阳性参考品均应求检出阳性考虑浓度梯度应水阳性参考品设置相应Ct值限制阴性参考品引物探针组合检测条件均应检出阴性相应引物探针组合检测应阳性
25样稳定性
251样提取前核酸序列稳定性
外周血采集应外周血存放条件存放时限温度设置等进行验证包括采抗核酸降解防细胞裂解采血求采样防腐剂抗凝剂保护剂相关试剂材料应核酸扩增检测程造成干扰申请需抗凝剂防腐剂保护剂等成分进行验证
外周血样晚期肺癌患者外周血样中EGFR含量相较少基片段较短半衰期短建议明确少外周血提取总量必时增加外周血提取总量增外周血中EGFR基片段提取机率时核酸提取程中应量减少核酸损耗降解申请应外周血样保存时间温度离心参数设置等进行验证
外周血样满足述求外应注意全血中血浆血清中均分离出循环游离DNA（cfDNAcell free DNA）通源性血清样较血浆中cfDNA更高检出率血浆cfDNA通常片段较短血液中浓度非常低抽血延迟血浆分离会导致血细胞裂解释放出基组DNA（gDNA）血浆中量增加gDNA会稀释肿瘤源cfDNA突变难检出标采集运输储存程中防止游离DNA降解首考虑素次应防止血液中白细胞裂解避免野生型DNA增加导致cfDNA中EGFR突变基法检测
cfDNA含量低提高EGFR突变基检出率床允许情况推荐增加血浆量采集佳血浆标续提取游离DNA进行EGFR突变基检测推荐采血中加入保护剂：游离DNA保护剂防细胞裂解保护剂等全血采集建议快离心分离出含细胞成分血浆
252核酸提取评价求
样核酸分离纯化目：富集靶核酸浓度保证靶核酸序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物样核酸分离纯化决定续核酸扩增程成败素般言相单靶序列检测基序列检测样核酸浓度质量更敏感核酸提取步骤成功获结果关重应确保具满足检测反应体系数量质量核酸检测提取方法产出核酸浓度质量（：分子量纯度单链双链pH值变化）种提取方法样品基质推荐检测应确保反应体系中基片段品提取效率相申报产品否含核酸分离纯化组分申请应核酸分离纯化环节做充分验证量分离出目核酸外应相应纯化步骤PCR抑制物常见核酸分离纯化均优势足申请应结合申报产品特性合理选择核酸分离纯化试剂提供详细验证资料
253样提取核酸序列稳定性
应检测核酸含量设置反应体系需初始DNA含量范围单位体积DNA浓度低需浓度应提供相应改进措施通荧光染料法方法评价纯度时应核酸提取物保存时间保存温度进行验证
254样完整性
样提取前提取程提取储存期间核酸会发生程度降解降解降低低程度（提取前提取）应避免样品次冷冻融化必时申请应评价提取前提取冻融次数储存条件等素长时间储存应前评价核酸完整性较检测结果储存前检测结果致性采琼脂糖凝胶电泳者参基PCR检测等方法
（五）阳性判断值确定资料
设定申报试剂检测结果cutoff值确定时应包括cutoff值研究方案设定评价标准研究程研究原始数等方案应考虑影响检测结果素群流行病学信息疾病类型等应列举cutoff值计算程中采统计学方法果试剂存灰区应解释说明确定灰区范围明确界值样类型否差异应独立样群中研究拟确定cutoff值进行充分验证
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉申报试剂稳定性包括效期稳定性（效期）开瓶稳定性复溶稳定性机载稳定性（适）运输稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结效期稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
（七）床评价资料
申请应符合求床机构满足床试验低样量求前提根产品床预期途相关疾病流行率统计学求制定够证明床性床试验方案时限度控制试验误差提高试验质量试验结果进行科学合理分析
1床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报机构技术员进行必技术指导外意干涉实验进程尤数收集程
方案中床样信息应明确信息：采集时间求标类型求采样质量求该类求应产品说明书中规定求致产品说明书中未列明应床方案中进行列明
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究时应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究机构选参试剂应完全致便进行合理统计学分析床方案中应明确复核试剂方法外考核试剂适样类型检测突变基类型应超越参试剂相应检测范围种情况发生应选择合理参方法额外样类型突变基类型进行验证
2床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见受试者知情意书例外情况客观获受试者知情意该床试验受试者没风险伦理委员会审查批准免受试者知情意
3床研究机构选择
建议申请选择床机构时应国区域选择床机构量机构床样定区域代表性床研究机构进行EGFR突变基检测应建立PCR标准实验室建立实验室质量理体系确保检测结果准确性PCR实验室技术员应接受PCR岗培训技熟练操作员必须接受良培训技术员实验操作员应足够时间熟悉检测系统环节（仪器试剂质控操作程序等）熟悉评价方案整实验中考核试剂参方法应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
4考核试剂适样类型设置求
科学研究表明NSCLC病理组织样外周血样EGFR突变基阳性检出率存差异EGFRTKIs药物床研究中两类样类型EGFRTKIs药效学评价方式存差异部分病理组织样类型床研究求外周血样类型床研究求分进行说明中病理组织样总床样例数少1000例包含41项中致性评价床例数求5项中EGFR突变基体化治疗相关床例数求外周血样总床样例数少1000例包含42项中致性评价床例数求5项中EGFR突变基体化治疗相关床例数求
41 NSCLC病理组织样类型具体求
411方法选择
4111申报试剂已类市产品床研究选择已批准市床普遍认质量较类产品作试剂时应充分解产品方法学床预期途性指标阳性判断值突变基位点选择等便试验结果进行科学分析采拟申报产品（称考核试剂）进行试验研究少证明品已市产品等效已市类试剂应具相突变位点试剂检测结果应区分突变型确保考核试剂试剂具明确性
4112选择核酸序列测定方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
申请应提供关测序部分详细试验资料床试验机构签章确认
41121测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
41122测序方法引物相关信息基区段选择分子量纯度功性实验等资料引物设计应区分基型需避开考核试剂扩增靶核酸区段
41123应选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法申报试剂相关性进行适分析
41124测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
41125应选择代表性样测序图谱结果分析资料
412病例选择
床试验应非细胞肺癌肿瘤患者研究象中应涵盖考核试剂声称基型种突变型应定量阳性病例阴性病例选择应考虑交叉反应验证需床角度考察分析特异性产品适种样类型应样类型均进行床验证具体求：
4121床样类型肺腺癌应包括定数量类型肺癌肺部肿瘤初治复发群等
4122申报试剂样类型适冰冻新鲜样应完成少200例冰冻新鲜样
42外周血样类型具体求
421方法学选择
4211申报试剂已类市产品床研究选择已批准市床普遍认质量较类产品作试剂时应充分解产品方法学床预期途性指标阳性判断值突变基位点选择等便试验结果进行科学分析采考核试剂进行试验研究证明品已市产品等效已市类试剂应具相突变位点试剂检测结果应区分突变型确保考核试剂试剂具明确性
4212选择核酸序列测定方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
4213外周血中EGFR突变基片段较短含量较低外周血检测EGFR突变基片段中选择高通量核酸序列测定方法灵敏度较高检测方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
申请应提供关测序部分详细试验资料床试验机构签章确认
42131测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
42132测序文库构建组分组成原理介绍
42133数库（参考序列）类型数库溯源信息完整性等信息
42134生物信息学分析软件数存储中心异常情况处置方案等信息
42135测序方法引物探针接头连接酶聚合酶逆转录酶限制性切酶相关信息序列选择分子量纯度保存稳定性功性实验酶酶活性等资料引物设计应区分基型需避开考核试剂扩增靶核酸区段
42136应选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法申报试剂相关性进行适分析
42137测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
42138应选择代表性样测序数注释文件资料
422病例选择
床试验应非细胞肺癌肿瘤患者研究象中应涵盖考核试剂声称基型种突变型均应定量阳性病例阴性病例选择应考虑交叉反应验证需床角度考察分析特异性具体求：
4221床样类型肺腺癌应包括定数量类型肺癌肺部肿瘤初治复发群等
4222床样类型方式
应包括少200例肿瘤患者源性外周血样组织学样床研究资料
4223考核试剂检测系统适类型外周血保存方法建议种外周血保存方法应配合申报检测系统完成少200例源性床研究
5EGFR突变基体化治疗相关床研究求
EGFRTKI靶治疗床需求申请完成类产品致性床研究外需提供EGFR突变基检测试剂盒相关肿瘤药物关联床研究资料表明考核试剂特定肿瘤药物伴患者床获益客观证考虑种情况：
51考核试剂应满足床需求申请采基特定药物研究观察终点前瞻性队列回顾性队列床研究床研究方法采床研究方法时床研究方案应考虑包括该产品预期目标群特定肿瘤药物治疗患者群时保证床研究效应考虑选已联合特定肿瘤药物床研究体外诊断试剂作全部部分考核试剂检测结果方法
着肿瘤体化药物研究持续深入基肿瘤患者直接床获益证EGFR部分突变基位点（耐药突变基位点）赋予新床意义申请采基新市药物研究观察终点前瞻性队列回顾性队列床研究床研究方法采床研究方法时床研究方案应考虑包括该产品预期目标群新市肿瘤药物治疗患者群时保证床研究效应考虑选已联合新市肿瘤药物床研究体外诊断试剂作全部部分考核试剂检测结果方法
52考核试剂部分突变基类型中国境属首次申报EGFR突变基种族中群易感性申请应考虑EGFR突变基群中差异注册申报时应提供突变类中国群中突变例等床评价资料
53 EGFR突变基体化治疗相关床研究床样量受研究疾病研究目研究终点影响样量估计应根治疗作预期变异程度预估统计分析方法等确定5EGFR突变基体化治疗相关床研究求中样量统计方法（七）床评价资料部分床样量统计方法存区申请需合理选择该项样量计算方法
EGFR突变基检测试剂盒联合药物床研究疗效存差异该部分EGFR突变基检测试剂床评价指标设置需药物床部分评价指标进行联合设置应明确抗肿瘤药物床试验终点：总生存期（Overall SurvivalOS）基肿瘤测量终点病生存期（DFS）客观缓解率（ORR）疾病进展时间（TTP）进展生存期（PFS）治疗失败时间（TTF）等基症状评价终点等该部分研究中申请应提交患者相关床诊疗信息治疗前肿瘤生物学标志物CTPETCT等影检查结果汇总分析相关药物治疗非细胞肺癌患者前床效果
54考核试剂适样类型包括组织学样外周血样组织学样外周血样需分进行相关床研究考核试剂样类型预期途该部分床试验求原参51项求执行
6统计学分析
采实验进行致性研究时床试验结果统计应选择合适统计方法检测结果致性分析阴性阳性符合率阳性预测值阴性预测值kappa检验等统计分析应证明方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设设置a值P值假设条件评价考核试剂参试剂否等效标准
建议采四格表考核试剂方法学统计分析统计突变类阳性符合率阳性病例中占例次床研究中群基特征进行分析例：年龄性疾病类型等建议进行统计分析表1
表1 群基特征统计表
素
占总数例
考核试剂
方法
性
年龄
疾病类型
癌症分期
7床试验总结报告撰写
根体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
71床试验总体设计方案描述
711床试验整体理情况床研究机构选择床研究员简介等基情况介绍
712病例纳入排标准年龄段群预期选择例数标准
713样类型样收集处理保存等
714统计学方法统计软件评价统计结果标准
72具体床试验情况
721床研究产品名称批号效期机型等信息试验产品注册情况
722研究机构病例数年龄分布情况进行综合分析建议列表图示方式出具体例数百分
723质量控制试验员培训仪器日常维护质控品运行情况检测精密度质控品测量值抽查结果评估
724具体试验程样检测数收集样保存结果致样校验等
73统计学分析
731数预处理差异数重新检测第三方验证否纳入终数统计异常值缺失值处理研究程否涉方案修改等
732方法学间突变基型阳性符合率阴性符合率总体符合率
733统计分析应证明方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设设置a值P值假设条件评价考核试剂参试剂否等效标准
样类型年龄段群检测结果存定差异建议样类型年龄段群分进行统计分析考核试剂床性进行综合分析
74讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品技术求
应符合医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）求明确产品项性评价求试验方法申报产品原材料生产工艺半成品检定等容作附录附产品技术求正文附录中应测靶基基位点引物探针设计源参考品设置源验证情况种酶源特性验证等重点容予明确
1病理组织样类型EGFR突变基检测试剂产品技术求应包括性指标：物理性状试剂盒阴阳性品（质控品）Ct值求（包括标）阴阳性参考品符合率精密度低检测限等
2外周血样类型EGFR突变基检测试剂产品技术求应包括性指标：试剂盒阴阳性品（质控品）Ct值求（包括标）阴阳性参考品符合率精密度低检测限等
果申报试剂相应国家行业标准发布企业标准产品技术求低国家行业标准求
（九）产品注册检验报告
根体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）求首次申请注册第三类体外诊断试剂产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品注册检验已国家标准品检验项目注册检验时应采相应国家标准品进行目前尚国家标准品项目生产企业应建立参考品体系提供相应部参考品
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书撰写应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致产品说明书中部分容引参考文献应规范格式容进行标注列明引文献信息
结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面EGFR突变基检测试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申请更合理完成说明书编制
1预期途
11产品体外定性检测非细胞肺癌（NSCLC）中肿瘤病理组织外周血体液样EGFR突变基
12建议列表表述EGFR突变基型列明外显子中突变基排列序少明确产品外显子突变位点cosmic ID突变位点床意义EGFR基信息数库
13 EGFR突变基检测目标群：推荐病理诊断转移性进展期肺腺癌含腺癌成分具腺癌分化分型NSCLC患者吸烟活检标较混合组织学形态鳞癌患者必进行分子检测鳞癌患者肺癌体化诊疗发展研究断深入该目标群着体化药物试剂发展研究发生微调建议申请参新肺癌研究指南专家识
14申报试剂应伴特定肿瘤治疗药物联合进行床试验研究证明两者伴具显著床治疗意义说明书中需明确具体药物通名称简介绍相关床患者受益情况
15研究显示部分（非全部）晚期NSCLC患者血液中存cfDNA血液游离DNA片段通常较短晚期癌症患者血液中浓度极低外周血样群需限定晚期NSCLC患者作易获取NSCLC组织样时补充手段获病理组织时建议病理组织提取结果优先考虑外周血检测EGFR检测结果怀疑假阴性时建议量采集该患者肿瘤组织样进行检测
16应介绍相关床背景包括相关适群特征肿瘤组织类型适样类型测靶基序列特征选择靶基表达蛋白恶性肿瘤发生发展程中起作相关药物治疗技术作机理测突变位点存关系等
17明确说明该试剂盒仅特定肿瘤患者靶基序列检测检测结果仅供床参考应作患者体化治疗唯床医生应结合患者病情药物适应症治疗反应实验室检测指标等素检测结果进行综合判断
2检验原理
21试剂盒检测够覆盖突变位点突变类型进行详细描述（靶序列长度基座位突变类型相关特征等）引物探针设计样品反应组合品设置荧光信号检测原理等进行逐项介绍
22详细介绍核酸分离纯化方法原理等
23试剂盒技术原理进行详细介绍建议结合适图示进行说明添加相关防污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶UDGUNG等）应作机理作适介绍
3组成成分
31详细说明试剂盒组分名称数量容物例浓度等信息阴性阳性品（质控品）含生物源性物质组分应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
32明确试剂盒中包含该项检测必须组分注明验证推荐配合采血核酸分离纯化试剂盒生产企业产品名称该产品医疗器械注册证号备案号（）等详细信息包含新鲜冰冻样应明确穿刺工具标处理试剂等信息
4储存条件效期
介绍试剂盒效期稳定性开瓶稳定性复溶稳定性运输稳定性机载稳定性（适）冻融次数求等
5适仪器
列明适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
EGFR突变基检测样般采肿瘤部位手术切样活检组织细胞学样床取材方法包括手术纤维支气镜活检皮肺穿刺活检胸水胸腔镜淋巴结穿刺活检支气超声引导细针穿刺活检等法获取足够肿瘤组织细胞学样晚期肺腺癌患者血液样进行EGFR突变基检测原发灶转移灶均适合检测
61组织学样类型作详细介绍明确组织样采集标准肿瘤组织突变基检测标进行分子检测前须肿瘤细胞进行评估果转移肿瘤组织标形态学必须原发灶形态学致肿瘤细胞占例需达扩增检测方法求
62外周血样作详细介绍包括样源采血求采集量保存方式样处理方式采集求防腐剂抗凝剂保护剂相关试剂材料等
63申报产品适样类型中包括体液样新鲜组织样等应详细描述样类型样采集器具采集方式样处理求注意事项等
64明确样处理保存条件：核酸分离纯化前样预处理保存条件期限（短期长期）运输条件等
65核酸分离纯化程结束应采适方法分离纯化核酸储备液进行质量控制采分光光度计法荧光染料法方法分离纯化核酸储备液进行浓度纯度检测性验证结果出扩增试验核酸溶液浓度范围求分离纯化核酸储备液质量（浓度范围）符合求应重新取材扩样量进行核酸分离纯化
66明确操作程中种制备液稳定性求类混合液（Mix）DNA储备液反应终体系等（常温冷藏冷冻冻融次数限制等）
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71 FFPE组织样脱蜡程应分描述封固载玻片未封固载玻片（）脱蜡步骤
72试剂配制方法注意事项
73核酸分离纯化条件步骤注意事项品（质控品）应参样核酸行提取（适）核酸分离纯化环节进行合理质量控制
74扩增反应前准备：组分加样体积序相关注意事项等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相关注意事项
76仪器软件设置：特殊参数测基标品荧光通道选择等
8阳性判断值
阳性判断值描述包括基线确定方法阈值循环数（Ct）求Ct值求外建议结合否出现典型S形曲线结果进行判断
9检验结果解释
结合阳性阴性样中靶基标检测结果（Ct值）出现结果组合相应解释进行详述存检测灰区应灰区结果处理方式详述
10检验方法局限性
101试剂盒检测结果仅供床参考患者体化治疗选择应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
102阴性结果完全排靶基突变存样中肿瘤细胞少核酸度降解扩增反应体系中靶基浓度低检测限造成阴性结果
103肿瘤组织（细胞）存较异质性部位取样会检测结果
104合理样采集转运处理试验操作实验环境均导致假阴性假阳性结果
105明确该检测仅限规定样类型检测系统（包括适机型核酸分离纯化试剂检测方法等）
106罕见EGFR突变基检测结果阳性床药指导应结合床体化药研究成果综合进行评价
107检测试剂适EGFR拷贝数表达量检测
108检测试剂检测范围仅包括检测试剂声称基突变位点范围包括检测试剂盒声明外基突变位点检测
11产品性指标
详述性指标：
111病理组织样类型性指标
1111相应国家参考品（）检测符合情况
1112企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
1113低检测限：说明试剂盒规定检测条件扩增体系中试剂盒够覆盖突变类低检出浓度重点考虑原始模板中突变基百分率扩增终体系中核酸浓度两素低检测限影响简单介绍低检测限确定方法
1114精密度：精密度参考品组成源浓度梯度求评价标准浓度精密度参考品检测结果
1115分析特异性
11151分析性评估中特异性研究容进行纳核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列间交叉反应EGFR野生型DNA验证非类组基验证等信息
11152潜干扰物质验证
果验证发现某序列靶序列交叉反应出现阳性结果应该存交叉反应核酸序列浓度进行验证产品说明书中表明种假阳性发生做出相关提示
1116试验研究（）：简介绍参试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
112外周血样类型性指标
1121相应国家参考品（）检测符合情况
1122低检测限：说明试剂盒规定检测条件扩增体系中试剂盒够覆盖突变类低检出浓度简单介绍低检测限确定方法
1123企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
1124精密度：精密度参考品组成源浓度梯度求评价标准浓度精密度参考品检测结果
1125分析特异性
11251分析性评估中特异性存容进行纳核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列间交叉反应EGFR野生型DNA验证非类组基验证等信息
11252潜干扰物质验证
果验证发现某序列靶序列交叉反应出现阳性结果应该存交叉反应核酸序列浓度进行验证产品说明书中表明种假阳性发生做出相关提示
1126试验研究（）：简介绍参试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
12注意事项
应少包括容：
121该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
122床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
123标处理检测标容器检验程中材料处理符合医疗废物理条例医疗卫生机构医疗废物理办法国家区相关求
三参考文献
1国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）2014年7月
2国家食品药品监督理总局体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）2014年9月
3国家食品药品监督理总局体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）2014年9月
4国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）2014年9月
5国家食品药品监督理总局肿瘤体化治疗相关基突变检测试剂技术审查指导原2014年3月
6国家食品药品监督理总局药物床试验般考虑指导原2017年1月
7国家食品药品监督理总局抗肿瘤药物床试验技术指导原2012年5月
8国家食品药品监督理总局抗肿瘤药物床试验终点技术指导原2012年5月
9国家食品药品监督理总局已市抗肿瘤药物增加新适应症技术指导原2012年5月
10国家卫生计划生育委员会药物代谢酶药物作靶点基检测技术指南（试行）2015年7月
11国家卫生计划生育委员会肿瘤体化治疗检测技术指南（试行）2015年7月
12中国食品药品检定研究院第二代测序技术检测试剂质量评价通技术指导原2016年08月
13中国医师协会肿瘤医师分会中国抗癌协会肿瘤床化疗专业委员会中国表皮生长子受体基敏感突变间变淋巴瘤激酶融合基阳性非细胞肺癌诊断治疗指南（2014版）中华肿瘤杂志2014年7月第36卷第7期：555557
14中华医学会呼吸病学分会肺癌学组中国肺癌防治联盟晚期非细胞肺癌分子靶治疗专家识（2013版）中华结合呼吸杂志2014年3月第37卷第3期：177183
15中国医师协会肿瘤医师分会中国抗癌协会肿瘤床化疗专业委员会中国表皮生长子受体基敏感突变间变淋巴瘤激酶融合基阳性非细胞肺癌诊断治疗指南（2014版）中国肿瘤科进展中国肿瘤医师教育2014
16中国床肿瘤学会（CSCO）肿瘤标志物专家委员会中国间变性淋巴瘤激酶（ALK）阳性非细胞肺癌诊疗指南中华病理学杂志2015年10月第44卷第10期：696703
17中国抗癌协会肺癌专业委员会非细胞肺癌分子靶药物耐药处理识循证医学2013年4月第13卷第2期
18非细胞肺癌血液EGFR基突变检测中国专家识制定专家组非细胞肺癌血液EGFR基突变检测中国专家识中华医学杂志2015年12月8日第95卷第46期
19浙江省抗癌协会抗癌药物专业委员会专家组浙江省非细胞肺癌血液EGFR基突变检测专家识浙江医学2016年第4期
20吴龙廖美琳蒋国樑等局部晚期非细胞肺癌诊断治疗识中华肿瘤杂志2002年11月第24卷第6期
21石远凯孙燕金明等中国晚期原发性肺癌诊治专家识（2016年版）中国肺癌杂志2016年1月第19卷第1期114
22中国原发性肺癌诊疗规范（2015年版）中华肿瘤杂志2015年1月第37卷第1期
23YYT 15912017类EGFR基突变检测试剂盒
24ACMGClinical Laboratory Standards for NextGeneration SequencingGenetics in Medicine201315（9）
25FDAIn Vitro Companion Diagnostic DevicesGuidance for Industry and Food and Drug Administration Staff20140806
26HHSFDA Clinical Trial Endpoints for the Approval of Non Small Cell Lung Cancer Drugs and Biologics Guidance for Industrys201508
27FDAInfectious Disease Next Generation Sequencing Based Diagnostic Devices：Microbial Identification and Detection of Antimicrobial Resistance and Virulence Markers Draft Guidance for Industry and Food and Drug Administration Staff
28Clinical and Laboratory Standards InstituteVerification and Validation of Multiplex Nucleic Acid Assay：Approved Guideline MM17AVol28 No9ISBN 1562386611
四起草单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
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表皮生长子受体（EGFR）突变基检测
试剂（PCR法）注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请表皮生长子受体（Epidermal Growth Factor Receptor简称EGFR）突变基检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原针EGFR突变基检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需详细阐明理科学合理性进行验证提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
指导原述EGFR突变基检测试剂指基核酸聚合酶链式反应（PCR法）EGFR突变基检测目标体外定性检测细胞学样病理组织学样外周血样体液样提取核酸组分中目标基序列
EGFR原癌基cerbB1表达产物表皮生长子受体（HER）家族成员HER家族EGFRHER1erbB1HER2neuerbB2HER3erbB3HER4erbB4四分子构成细胞生长增殖分化等生理程中发挥重调节作
EGFR种跨膜酪氨酸激酶受体该受体激酶域激活癌细胞增殖转移凋亡等种信号传导通路关肺腺癌患者EGFR基敏感突变亚裔群阳性率高高加索群EGFR突变发生胞酪氨酸激酶（TK）区域前四外显子（18～21）目前发现TK区域突变30种缺失突变发生外显子19常见del E746A750代突变常见发生外显子21L858R复制插入突变发生外显子20中外显子20T790M代突变代EGFR酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase InhibitorTKI）耐药突变外许类型突变床意义尚明确EGFR作癌症治疗分子靶标受普遍关注已陆续开发出吉非尼（Gefitinib）厄洛尼（Erlotinib）埃克尼（Icotinib）等TKI
肿瘤组织样获取肿瘤基相关信息源部分晚期肺癌患者已失手术机会种种原获取肿瘤组织样研究结果表明实体肿瘤患者外周血中存源凋亡坏死肿瘤细胞游离DNA晚期肺癌患者获取肺癌组织样时选择外周血样进行EGFR突变基检测获病理组织时建议病理组织提取检测结果优先考虑肿瘤组织难获取时外周血样EGFR突变基检测方式重补充手段
指导原相关技术求基荧光探针PCR方法EGFR突变基试剂进行评价基荧光探针PCR原理类试剂适指导原部分相关技术求申请应阐述适理结合身产品特性提出科学合理评价方法申请根实际产品特性选择适合方法结合指导原补充需评价验证分子生物学检测技术适申请参考指导原部分相关技术求进行性评价
指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品指导原适EGFR基拷贝数变化检测核酸序列测定免疫组化技术荧光原位杂交法
EGFR病理组织学样外周血样检测中存较差异参考品质控品设置分析性评估床评价求产品技术求产品说明书等方面均存求便申请指导原进行理解产品预期途组织学样检测预期途外周血样检测试剂申报求进行分开说明需说明申请申报产品时包括外周血样组织学样相部分申请合提交注册申报资料原注册产品预期途中仅组织样类型需增加外周血样类型考虑外周血样类型组织样类型中EGFR片段长度样中突变例等差异申请完成许事项变更申报资料求应提交扩增反应体系性评价外周血分析性评价外周血样保存处理床评价等研究资料
申报试剂作肿瘤体化伴检测试剂非细胞肺癌（NSCLC）体化治疗申请EGFR申报试剂运癌症类型研究申请参指导原适研究体系应强调肿瘤药物体化检测试剂治疗药物具关联性申请需结合EGFR突变基检测治疗药物预期途限定癌症类型进行联合评价研究
二注册申报资料求
（）综述资料
1产品预期途描述产品预期途预期途相关床背景情况EGFR突变基群间关联药物EGFR突变类型患者治疗效果描述适应症发生率易感群等相关床实验室诊断方法等
2产品描述描述产品采技术原理原材料源制备方法生产工艺程质控品校准品制备方法情况
3关生物安全性方面说明体外诊断试剂中原材料种动物病原体源组织体液等生物材料处理者添加某物质制备成源性材料须关传染病（HIVHBVHCV等）病原体检测予说明提供相关证明文件动物源微生物源材料应提供相应说明文件证明产品运输程中者环境安全述原材料采灭活等试验方法予说明
4关产品研究结果总结评价
5包括类产品国外批准市情况相关产品采技术方法床应情况申请注册产品国外类产品异等新研制体外诊断试剂产品需提供测物预期适床适应症间关系文献资料
（二）原材料研究资料
类产品原材料应包括EGFR突变基检测试剂组成成分引物探针酶反应缓液提取成分（包含）等申请行研制原材料申请应EGFR目基序列确定引物探针选择酶选择验证等实验程予详述提供原材料性研究资料：外观纯度蛋白浓度功性研究等制备完成原料成品应进行质量检验确认符合标准求整生产工艺应稳定控申请外购原材料应详述原材料外购方源提交外购方出具原材料性指标质量控制资料详述申请外购原材料指标质量求确定该原材料作产品原材料详细
1核酸分离纯化组分（）组成原理介绍相关验证资料
2PCR组分原料（包括引物探针种酶原料）选择制备质量标准实验研究资料包括容：
21脱氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸组成成分包括：dATPdUTPdGTPdCTPdTTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料
22引物
应优化单突变基专引物相浓度避免核酸靶序列时扩增时出现相互影响竞争引物设计时应反应体系中引物进行筛选避免引物二聚体形成保证靶序列检测准确性EGFR检测试剂中突变基引物浓度必须进行优化应根靶序列突变性质C+G含量等确定突变基引物长度浓度单引物适浓度应考虑引物浓度间相互影响定数量碱基构成特定序列通常采DNA合成仪工合成合成聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）适宜方法纯化需提供引物分子量纯度稳定性功性实验等验证资料外购应提供合成机构出具合成产物质检证明PAGE结果高效液相色谱法（HPLC）分析图谱应引物结构进行引物扩增区段应重复序列
23探针
特定带示踪物（标记物）已知核酸片段（寡聚核苷酸片段）互补核酸序列退火杂交特定核酸序列探测合成PAGE适宜方法纯化5＇端（3＇端）进行标记HPLC适宜方法纯化纯度应达HPLC纯应提供合成机构出具合成产物质检证明HPLC分析图谱应探针分子量纯度标记荧光基团进行核实进行功性试验验证
24酶
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性：94℃保温1时保持50活性尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性逆转录酶具逆转录酶活性核酸切酶活性应酶活性进行合理验证
3核酸类检测试剂包装材料耗材应脱氧核糖核酸酶（DNase）核糖核酸酶（RNase）污染
4企业部参考品
企业部参考品保证产品性稳定性检测值溯源重构成参考品研究应包括原料选择制备程定值研究评价指标统计学分析等申请应部参考品源基序列设置等信息进行精确实验验证提供参考品溯源程测量程序参考方法相关信息详细验证资料申请应根产品性验证实际情况行设定部参考品阳性参考品应着重考虑EGFR突变基型求阴性参考品涉分析特异性（交叉反应）验证情况该类产品国家标准品低国家参考品求前提申请结合实际情况设置合理部参考品具体求：
41组织样参考品设置求
411阳性参考品
阳性参考品中常见基突变位点建议采床样提取DNA储备液细胞系作原料突变位点采DNA储备液细胞系EGFR突变扩增产物模拟样作原料采EGFR突变扩增产物作阳性参考品应模拟真实样需样基质进行基质效应研究
试剂盒（分型分型）覆盖突变位点均应设置相应阳性参考品突变位点设置突变百分率梯度中少应包括高浓度低浓度阳性参考品阳性参考品突变形式拷贝数需采效方法（测序方法数字化PCR等）进行确认明确接受标准
412阴性参考品
采确认相应靶突变序列DNA储存液野生型基组DNAHER家族DNA等
413检测限参考品
检测限参考品原料求参考阳性参考品需包括突变类型进行低检测限性评估时应设置梯度扩增反应终体系总核酸浓度突变序列占百分率两方面进行评价建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
414精密度参考品
精密度参考品原料求参考阳性参考品需少包括弱阳性中强阳性水精密度验证中强阳性精密度参考品常见突变类型理较难测突变序列时设置阴性参考品精密度验证
42外周血样参考品设置求
421阳性参考品
阳性参考品中常见突变基位点建议采床样提取DNA储备液细胞系作原料考虑外周血中EGFR突变基DNA含量较低突变位点采DNA储备液细胞系EGFR突变基扩增产物模拟样样基质应血浆工模拟样血浆时应提前确认血浆中DNA背景浓度工模拟样时应模拟真实样模拟样进行基质效应研究
试剂盒（分型分型）覆盖突变位点均应设置相应阳性参考品突变位点设置突变百分率梯度中需少包括弱阳性参考品阳性参考品突变形式拷贝数需采效方法（测序方法数字PCR等）进行确认明确接受标准
422阴性参考品
采确认相应靶突变序列DNA储存液野生型基组DNAHER家族DNA等
423检测限参考品
检测限参考品原料求参考阳性参考品需包括突变类型进行低检测限性评估时应设置梯度建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
424精密度参考品
精密度参考品原料求参考阳性参考品需少包括弱阳性中强阳性水精密度验证中强阳性精密度参考品常见突变类型理较难测突变序列时设置阴性参考品精密度验证
5试剂盒品（质控品）
试剂盒质控体系通设置种试剂盒品实现质控体系需考虑样核酸分离纯化配液加样试剂仪器性扩增反应抑制物（抑制）交叉污染靶核酸降解等素造成假阴性假阳性结果进行合理质量控制品采质粒假病毒床样核酸提取液等进行配置申报资料应试剂盒品关原料选择制备定值程等试验资料详细说明申请应视申报产品具体情况设置合理试剂盒品（质控品）试剂盒质控体系考虑方面求：
51阳性品（质控品）
申请应阳性品（质控品）Ct值提出明确范围求样反应覆盖种突变序列检测（分型分型）相应阳性应选择较常见突变序列理较难测突变序列作阳性
52阴性
阴性含野生型核酸序列核酸溶液空白交叉污染导致假阳性结果进行质控阴性品应参样核酸行提取
53（标）
（标）抑制导致假阴性结果进行质量控制申请应（标）引物探针模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线量降低靶基检测造成抑制
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺反应体系研究资料应反应体系涉基容：床样量试剂量反应条件质控体系设置阈值循环数（Ct）值界值确定等提供确切配制工作液种原材料配应符合求原材料应混合均匀配制程应pH电导率离子浓度等关键参数进行效控制包括容：
1生产工艺介绍图表方式表示
2反应原理介绍
3基位点选择方法学特性介绍
4确定佳PCR反应体系研究资料包括酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度等
5确定PCR反应阶段温度时间循环数研究资料反应体系相突变基相反应条件核酸扩增效率否存差
6基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）确定研究资料应明确相反应条件基类型Ct否相
7适机型反应条件果差异应分详述
8申报产品包含核酸分离纯化试剂应提交核酸分离纯化程进行工艺优化研究资料
（四）分析性评估资料
分析性评估反映产品原材料选择生产工艺反应体系等方面素设置否合理客观评价指标检测试剂性研究方案应结合产品反应原理床途条件等综合素进行设计性研究应涵盖产品研制阶段试剂盒进行性验证研究资料包括具体研究方法控标准实验数统计分析等详细资料
1病理组织学样类型评价求
11低检测限
病理组织学样类型低检测限研究应包括扩增反应终体系中突变序列百分率申报产品反应体系中总核酸浓度两素
常见突变基类型建议采EGFR突变型非细胞肺癌（NSCLC）福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）EGFR野生型NSCLC FFPE样细胞系制备DNA存储液罕见突变基类型建议采DNA储备液细胞系质粒EGFR野生型NSCLC FFPE样制备DNA存储液
EGFR突变基类型例混合应注意事项：种突变基类型样储存液突变序列占例进行混合结合PCR方法检测灵敏度病理组织学样类型处针EGFR突变基类型低例情况进行配108起始例混合少应包括目标检测限检测限少2梯度例范围研究资料例混合样建议采数字化PCR高通量测序法等方法检测样实际混合例实际混合例作EGFR突变基低检测限进行续研究时EGFR突变基例研究程中应设置EGFR野生型样作空白
确定反应体系总样加样量反应体系中需DNA总量申请需说明uLDNA加样量总DNA浓度确定方法进行混合稀释时FFPE样应原混合配置样类型相建议申请设计显著高反应体系高DNA加样量DNA存储浓度实际EGFR突变例进行梯度DNA浓度检测DNA浓度检测少3次梯度DNA浓度范围应涵盖申报产品反应体系中设定高DNA浓度低DNA浓度确定组织中低检测限组织样低检测限水附额外检测部分接低检测限样确认低检测限DNA浓度
111申报产品适核酸提取方法种核酸提取方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
112申报产品适适机型种适机型应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
113病理组织切片提取方法应说明书致申报产品适种病理组织切片制作方法低检测限应种病理组织切片制作方法进行验证
12分析特异性
121交叉反应
该类产品肺部肿瘤存较强关联性申请设计交叉反应研究时应点纳入考虑
1211申请应考虑靶序列核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列交叉反应建议交叉反应验证考虑素：EGFR基序列HER家族基浓度野生型DNA样非类基组基肺部相关感染微生物等
1212产生交叉反应病原体需床意义相关浓度进行检测细菌浓度水建议少106 cfumL病毒浓度水建议少105 pfumL需明确进行交叉反应病原体类型滴度野生型DNA少包含100ngμL野生型核酸样应提供交叉反应验证突变野生型序列源序列确认浓度选择等试验资料
122干扰物质
1221申请应根试剂盒采样类型确定潜干扰物质：常见治疗药物病理组织处理程样穿刺程缓液处理液等
1222干扰试验样建议选择医学相关水干扰物质浓度少EGFR突变基弱阳性样进行验证
123关分析特异性信息应产品说明书产品性指标项中体现
13精密度
申请应项精密度指标评价标准做出合理求具体实验方法参考国际国关体外诊断产品性评估文件进行针类产品精密度评价包括求：
131影响检测精密度变量进行验证申报试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应PCR分析仪操作者点等素进行相关验证
132合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间精密度进行评价
133精密度评价样应考虑部分EGFR常见突变基类型床样阳性精密度参考品阴性精密度参考品等
14阳性阴性参考品符合率
水突变位点阳性参考品均应求检出阳性考虑浓度梯度应水阳性参考品设置相应Ct值限制阴性参考品引物探针组合检测条件均应检出阴性野生型参考品设置相应引物探针组合检测应阳性
15样稳定性
151样提取前核酸序列稳定性
福尔马林固定石蜡包埋组织切片样申请应组织样保存温度保存年限进行限定建议明确组织切片样规范采集标准验证时间段保存组织样检测结果影响
新鲜冰冻切片样应限定新鲜冰冻切片样检测时限明确新鲜冰冻切片切片求
152样核酸提取评价求
申请需设置评价方案（：NSCLC FFPE组织样中段部分行切10份切片样等）评价指标评价样核酸提取程重复性
样核酸分离纯化目：富集靶核酸浓度保证靶核酸序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物样核酸分离纯化决定续核酸扩增程成败素石蜡包埋组织样福尔马林固定程中会样品中核酸核酸间核酸蛋白间发生交联组织蛋白种类含量存差异组织核酸提取试剂效率申报产品否含核酸分离纯化组分申请应核酸分离纯化环节做充分验证量分离出目核酸外应相应纯化步骤PCR抑制物常见核酸分离纯化方法均优势足申请应结合申报产品特性合理选择核酸分离纯化试剂提供详细验证资料
153样提取核酸序列稳定性
应检测核酸含量设置反应体系需核酸含量限限反应体系中起始DNA浓度高导致反应体系发生非特异性扩增产生假阳性结果反应体系中起始DNA浓度低导致反应体系靶序列扩增反应产生假阴性结果采紫外见分光光度计DNA浓度进行定量通260 nm280 nm处吸光度值（OD260OD280）方法评价纯度设置反应体系需初始DNA含量范围单位体积DNA浓度超需浓度限限应提供相应改进措施时应核酸提取物保存时间保存温度进行验证评价冻融次数储存条件等样提取核酸序列稳定性影响
154样完整性
样提取前提取程提取储存期间核酸会发生程度降解降解降低低程度（提取前提取）应避免样品次冷冻融化必时申请应评价提取前提取冻融次数储存条件等素长时间储存应前评价核酸完整性较检测结果储存前检测结果致性采琼脂糖凝胶电泳者参基PCR检测等方法
2外周血类型评价求
21低检测限
EGFR外周血中含量较低片段较短易降解评价该部分低检测限时建议拟定量DNA储备液细胞系EGFR突变扩增产物放入确定体积血浆中然逐步稀释稀释浓度重复检测3次确定外周血中低检测限外周血低检测限水附额外检测部分接低检测限样确认低检测限DNA浓度申请设置基础浓度范围50pgL浓度进行稀释少包括目标检测限检测限少2梯度例范围研究资料应试剂检测基型述方法验证低检测限申请时需说明总DNA浓度确定方法
211申报产品适核酸提取方法种核酸提取方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
212申报产品适适机型种适机型应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
213申报产品适外周血采血采集方法保存方法种外周血采集方法保存方法应配套检测试剂进行突变基类型低检测限验证
22分析特异性
221交叉反应
该类产品肺部肿瘤存较强关联性申请设计交叉反应研究时应点纳入考虑
2211申请应考虑靶序列核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列交叉反应建议交叉反应验证考虑素：EGFR基序列HER家族基等浓度野生型DNA样非类基组基等
2212产生交叉反应病原体需床意义相关浓度进行检测细菌浓度水建议少106 cfumL病毒浓度水建议少105 pfumL需明确进行交叉反应病原体类型滴度野生型DNA少包含100ngμL野生型核酸样应提供交叉反应验证突变野生型序列源序列确认浓度选择等试验资料
222干扰物质
2221申请应根试剂盒采样类型确定潜干扰物质：外周血中干扰成分类DNA样采集保存中活性成分常见治疗药物等
2222干扰试验样建议选择医学相关水干扰物质浓度少EGFR突变基弱阳性样进行验证
223关分析特异性信息应产品说明书产品性指标项中体现
23精密度
申请应项精密度指标评价标准做出合理求具体实验方法参考国际国关体外诊断产品性评估文件进行针类产品精密度评价包括求：
231影响检测精密度变量进行验证申报试剂（包括核酸分离纯化组分）身影响外应PCR分析仪操作者点等素进行相关验证
232合理精密度评价周期批批间日日间操作者间精密度进行综合评价条件申请应选择实验室进行重复实验室间精密度进行评价
233精密度评价样应考虑血浆基质部分EGFR常见突变基类型样阳性精密度参考品阴性精密度参考品等
24阳性阴性参考品符合率
水突变位点阳性参考品均应求检出阳性考虑浓度梯度应水阳性参考品设置相应Ct值限制阴性参考品引物探针组合检测条件均应检出阴性相应引物探针组合检测应阳性
25样稳定性
251样提取前核酸序列稳定性
外周血采集应外周血存放条件存放时限温度设置等进行验证包括采抗核酸降解防细胞裂解采血求采样防腐剂抗凝剂保护剂相关试剂材料应核酸扩增检测程造成干扰申请需抗凝剂防腐剂保护剂等成分进行验证
外周血样晚期肺癌患者外周血样中EGFR含量相较少基片段较短半衰期短建议明确少外周血提取总量必时增加外周血提取总量增外周血中EGFR基片段提取机率时核酸提取程中应量减少核酸损耗降解申请应外周血样保存时间温度离心参数设置等进行验证
外周血样满足述求外应注意全血中血浆血清中均分离出循环游离DNA（cfDNAcell free DNA）通源性血清样较血浆中cfDNA更高检出率血浆cfDNA通常片段较短血液中浓度非常低抽血延迟血浆分离会导致血细胞裂解释放出基组DNA（gDNA）血浆中量增加gDNA会稀释肿瘤源cfDNA突变难检出标采集运输储存程中防止游离DNA降解首考虑素次应防止血液中白细胞裂解避免野生型DNA增加导致cfDNA中EGFR突变基法检测
cfDNA含量低提高EGFR突变基检出率床允许情况推荐增加血浆量采集佳血浆标续提取游离DNA进行EGFR突变基检测推荐采血中加入保护剂：游离DNA保护剂防细胞裂解保护剂等全血采集建议快离心分离出含细胞成分血浆
252核酸提取评价求
样核酸分离纯化目：富集靶核酸浓度保证靶核酸序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物样核酸分离纯化决定续核酸扩增程成败素般言相单靶序列检测基序列检测样核酸浓度质量更敏感核酸提取步骤成功获结果关重应确保具满足检测反应体系数量质量核酸检测提取方法产出核酸浓度质量（：分子量纯度单链双链pH值变化）种提取方法样品基质推荐检测应确保反应体系中基片段品提取效率相申报产品否含核酸分离纯化组分申请应核酸分离纯化环节做充分验证量分离出目核酸外应相应纯化步骤PCR抑制物常见核酸分离纯化均优势足申请应结合申报产品特性合理选择核酸分离纯化试剂提供详细验证资料
253样提取核酸序列稳定性
应检测核酸含量设置反应体系需初始DNA含量范围单位体积DNA浓度低需浓度应提供相应改进措施通荧光染料法方法评价纯度时应核酸提取物保存时间保存温度进行验证
254样完整性
样提取前提取程提取储存期间核酸会发生程度降解降解降低低程度（提取前提取）应避免样品次冷冻融化必时申请应评价提取前提取冻融次数储存条件等素长时间储存应前评价核酸完整性较检测结果储存前检测结果致性采琼脂糖凝胶电泳者参基PCR检测等方法
（五）阳性判断值确定资料
设定申报试剂检测结果cutoff值确定时应包括cutoff值研究方案设定评价标准研究程研究原始数等方案应考虑影响检测结果素群流行病学信息疾病类型等应列举cutoff值计算程中采统计学方法果试剂存灰区应解释说明确定灰区范围明确界值样类型否差异应独立样群中研究拟确定cutoff值进行充分验证
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉申报试剂稳定性包括效期稳定性（效期）开瓶稳定性复溶稳定性机载稳定性（适）运输稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结效期稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
（七）床评价资料
申请应符合求床机构满足床试验低样量求前提根产品床预期途相关疾病流行率统计学求制定够证明床性床试验方案时限度控制试验误差提高试验质量试验结果进行科学合理分析
1床试验方案
床试验实施前研究员应流行病学统计学床医学检验医学等方面考虑设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床研究机构实验室实验室技术员操作完成申报机构技术员进行必技术指导外意干涉实验进程尤数收集程
方案中床样信息应明确信息：采集时间求标类型求采样质量求该类求应产品说明书中规定求致产品说明书中未列明应床方案中进行列明
试验方案中应确定严格病例纳入排标准已入选病例排出床研究时应记录案明确说明原试验操作程中判定试验结果时应采盲法保证试验结果客观性研究机构选参试剂应完全致便进行合理统计学分析床方案中应明确复核试剂方法外考核试剂适样类型检测突变基类型应超越参试剂相应检测范围种情况发生应选择合理参方法额外样类型突变基类型进行验证
2床试验必须符合赫尔辛基宣言伦理学准必须获床试验机构伦理委员会意研究者应考虑床试验样获试验结果受试者风险性应提交伦理委员会审查意见受试者知情意书例外情况客观获受试者知情意该床试验受试者没风险伦理委员会审查批准免受试者知情意
3床研究机构选择
建议申请选择床机构时应国区域选择床机构量机构床样定区域代表性床研究机构进行EGFR突变基检测应建立PCR标准实验室建立实验室质量理体系确保检测结果准确性PCR实验室技术员应接受PCR岗培训技熟练操作员必须接受良培训技术员实验操作员应足够时间熟悉检测系统环节（仪器试剂质控操作程序等）熟悉评价方案整实验中考核试剂参方法应处效质量控制限度保证试验数准确性重复性
4考核试剂适样类型设置求
科学研究表明NSCLC病理组织样外周血样EGFR突变基阳性检出率存差异EGFRTKIs药物床研究中两类样类型EGFRTKIs药效学评价方式存差异部分病理组织样类型床研究求外周血样类型床研究求分进行说明中病理组织样总床样例数少1000例包含41项中致性评价床例数求5项中EGFR突变基体化治疗相关床例数求外周血样总床样例数少1000例包含42项中致性评价床例数求5项中EGFR突变基体化治疗相关床例数求
41 NSCLC病理组织样类型具体求
411方法选择
4111申报试剂已类市产品床研究选择已批准市床普遍认质量较类产品作试剂时应充分解产品方法学床预期途性指标阳性判断值突变基位点选择等便试验结果进行科学分析采拟申报产品（称考核试剂）进行试验研究少证明品已市产品等效已市类试剂应具相突变位点试剂检测结果应区分突变型确保考核试剂试剂具明确性
4112选择核酸序列测定方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
申请应提供关测序部分详细试验资料床试验机构签章确认
41121测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
41122测序方法引物相关信息基区段选择分子量纯度功性实验等资料引物设计应区分基型需避开考核试剂扩增靶核酸区段
41123应选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法申报试剂相关性进行适分析
41124测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
41125应选择代表性样测序图谱结果分析资料
412病例选择
床试验应非细胞肺癌肿瘤患者研究象中应涵盖考核试剂声称基型种突变型应定量阳性病例阴性病例选择应考虑交叉反应验证需床角度考察分析特异性产品适种样类型应样类型均进行床验证具体求：
4121床样类型肺腺癌应包括定数量类型肺癌肺部肿瘤初治复发群等
4122申报试剂样类型适冰冻新鲜样应完成少200例冰冻新鲜样
42外周血样类型具体求
421方法学选择
4211申报试剂已类市产品床研究选择已批准市床普遍认质量较类产品作试剂时应充分解产品方法学床预期途性指标阳性判断值突变基位点选择等便试验结果进行科学分析采考核试剂进行试验研究证明品已市产品等效已市类试剂应具相突变位点试剂检测结果应区分突变型确保考核试剂试剂具明确性
4212选择核酸序列测定方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
4213外周血中EGFR突变基片段较短含量较低外周血检测EGFR突变基片段中选择高通量核酸序列测定方法灵敏度较高检测方法作类试剂床试验研究方法验证考核试剂检测结果核酸序列测定（测序）结果间致性情况床研究报告中应选测序方法作详细介绍
申请应提供关测序部分详细试验资料床试验机构签章确认
42131测序方法原理测序仪型号测序试剂消耗品相关信息
42132测序文库构建组分组成原理介绍
42133数库（参考序列）类型数库溯源信息完整性等信息
42134生物信息学分析软件数存储中心异常情况处置方案等信息
42135测序方法引物探针接头连接酶聚合酶逆转录酶限制性切酶相关信息序列选择分子量纯度保存稳定性功性实验酶酶活性等资料引物设计应区分基型需避开考核试剂扩增靶核酸区段
42136应选测序方法分析性进行合理验证尤低检测限确认建议选测序方法申报试剂相关性进行适分析
42137测序方法应建立合理阳性质控品阴性质控品床样检测结果进行质量控制
42138应选择代表性样测序数注释文件资料
422病例选择
床试验应非细胞肺癌肿瘤患者研究象中应涵盖考核试剂声称基型种突变型均应定量阳性病例阴性病例选择应考虑交叉反应验证需床角度考察分析特异性具体求：
4221床样类型肺腺癌应包括定数量类型肺癌肺部肿瘤初治复发群等
4222床样类型方式
应包括少200例肿瘤患者源性外周血样组织学样床研究资料
4223考核试剂检测系统适类型外周血保存方法建议种外周血保存方法应配合申报检测系统完成少200例源性床研究
5EGFR突变基体化治疗相关床研究求
EGFRTKI靶治疗床需求申请完成类产品致性床研究外需提供EGFR突变基检测试剂盒相关肿瘤药物关联床研究资料表明考核试剂特定肿瘤药物伴患者床获益客观证考虑种情况：
51考核试剂应满足床需求申请采基特定药物研究观察终点前瞻性队列回顾性队列床研究床研究方法采床研究方法时床研究方案应考虑包括该产品预期目标群特定肿瘤药物治疗患者群时保证床研究效应考虑选已联合特定肿瘤药物床研究体外诊断试剂作全部部分考核试剂检测结果方法
着肿瘤体化药物研究持续深入基肿瘤患者直接床获益证EGFR部分突变基位点（耐药突变基位点）赋予新床意义申请采基新市药物研究观察终点前瞻性队列回顾性队列床研究床研究方法采床研究方法时床研究方案应考虑包括该产品预期目标群新市肿瘤药物治疗患者群时保证床研究效应考虑选已联合新市肿瘤药物床研究体外诊断试剂作全部部分考核试剂检测结果方法
52考核试剂部分突变基类型中国境属首次申报EGFR突变基种族中群易感性申请应考虑EGFR突变基群中差异注册申报时应提供突变类中国群中突变例等床评价资料
53 EGFR突变基体化治疗相关床研究床样量受研究疾病研究目研究终点影响样量估计应根治疗作预期变异程度预估统计分析方法等确定5EGFR突变基体化治疗相关床研究求中样量统计方法（七）床评价资料部分床样量统计方法存区申请需合理选择该项样量计算方法
EGFR突变基检测试剂盒联合药物床研究疗效存差异该部分EGFR突变基检测试剂床评价指标设置需药物床部分评价指标进行联合设置应明确抗肿瘤药物床试验终点：总生存期（Overall SurvivalOS）基肿瘤测量终点病生存期（DFS）客观缓解率（ORR）疾病进展时间（TTP）进展生存期（PFS）治疗失败时间（TTF）等基症状评价终点等该部分研究中申请应提交患者相关床诊疗信息治疗前肿瘤生物学标志物CTPETCT等影检查结果汇总分析相关药物治疗非细胞肺癌患者前床效果
54考核试剂适样类型包括组织学样外周血样组织学样外周血样需分进行相关床研究考核试剂样类型预期途该部分床试验求原参51项求执行
6统计学分析
采实验进行致性研究时床试验结果统计应选择合适统计方法检测结果致性分析阴性阳性符合率阳性预测值阴性预测值kappa检验等统计分析应证明方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设设置a值P值假设条件评价考核试剂参试剂否等效标准
建议采四格表考核试剂方法学统计分析统计突变类阳性符合率阳性病例中占例次床研究中群基特征进行分析例：年龄性疾病类型等建议进行统计分析表1
表1 群基特征统计表
素
占总数例
考核试剂
方法
性
年龄
疾病类型
癌症分期
7床试验总结报告撰写
根体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求床试验报告应该试验整体设计关键点予清晰完整阐述应该整床试验实施程结果分析结等进行条理分明描述应包括必基础数统计分析方法建议床总结报告中容进行详述
71床试验总体设计方案描述
711床试验整体理情况床研究机构选择床研究员简介等基情况介绍
712病例纳入排标准年龄段群预期选择例数标准
713样类型样收集处理保存等
714统计学方法统计软件评价统计结果标准
72具体床试验情况
721床研究产品名称批号效期机型等信息试验产品注册情况
722研究机构病例数年龄分布情况进行综合分析建议列表图示方式出具体例数百分
723质量控制试验员培训仪器日常维护质控品运行情况检测精密度质控品测量值抽查结果评估
724具体试验程样检测数收集样保存结果致样校验等
73统计学分析
731数预处理差异数重新检测第三方验证否纳入终数统计异常值缺失值处理研究程否涉方案修改等
732方法学间突变基型阳性符合率阴性符合率总体符合率
733统计分析应证明方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设设置a值P值假设条件评价考核试剂参试剂否等效标准
样类型年龄段群检测结果存定差异建议样类型年龄段群分进行统计分析考核试剂床性进行综合分析
74讨结
总体结果进行总结性描述简分析试验结果次床研究特说明出床试验结
（八）产品技术求
应符合医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）求明确产品项性评价求试验方法申报产品原材料生产工艺半成品检定等容作附录附产品技术求正文附录中应测靶基基位点引物探针设计源参考品设置源验证情况种酶源特性验证等重点容予明确
1病理组织样类型EGFR突变基检测试剂产品技术求应包括性指标：物理性状试剂盒阴阳性品（质控品）Ct值求（包括标）阴阳性参考品符合率精密度低检测限等
2外周血样类型EGFR突变基检测试剂产品技术求应包括性指标：试剂盒阴阳性品（质控品）Ct值求（包括标）阴阳性参考品符合率精密度低检测限等
果申报试剂相应国家行业标准发布企业标准产品技术求低国家行业标准求
（九）产品注册检验报告
根体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）求首次申请注册第三类体外诊断试剂产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品注册检验已国家标准品检验项目注册检验时应采相应国家标准品进行目前尚国家标准品项目生产企业应建立参考品体系提供相应部参考品
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书撰写应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致产品说明书中部分容引参考文献应规范格式容进行标注列明引文献信息
结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面EGFR突变基检测试剂说明书重点容进行详细说明指导注册申请更合理完成说明书编制
1预期途
11产品体外定性检测非细胞肺癌（NSCLC）中肿瘤病理组织外周血体液样EGFR突变基
12建议列表表述EGFR突变基型列明外显子中突变基排列序少明确产品外显子突变位点cosmic ID突变位点床意义EGFR基信息数库
13 EGFR突变基检测目标群：推荐病理诊断转移性进展期肺腺癌含腺癌成分具腺癌分化分型NSCLC患者吸烟活检标较混合组织学形态鳞癌患者必进行分子检测鳞癌患者肺癌体化诊疗发展研究断深入该目标群着体化药物试剂发展研究发生微调建议申请参新肺癌研究指南专家识
14申报试剂应伴特定肿瘤治疗药物联合进行床试验研究证明两者伴具显著床治疗意义说明书中需明确具体药物通名称简介绍相关床患者受益情况
15研究显示部分（非全部）晚期NSCLC患者血液中存cfDNA血液游离DNA片段通常较短晚期癌症患者血液中浓度极低外周血样群需限定晚期NSCLC患者作易获取NSCLC组织样时补充手段获病理组织时建议病理组织提取结果优先考虑外周血检测EGFR检测结果怀疑假阴性时建议量采集该患者肿瘤组织样进行检测
16应介绍相关床背景包括相关适群特征肿瘤组织类型适样类型测靶基序列特征选择靶基表达蛋白恶性肿瘤发生发展程中起作相关药物治疗技术作机理测突变位点存关系等
17明确说明该试剂盒仅特定肿瘤患者靶基序列检测检测结果仅供床参考应作患者体化治疗唯床医生应结合患者病情药物适应症治疗反应实验室检测指标等素检测结果进行综合判断
2检验原理
21试剂盒检测够覆盖突变位点突变类型进行详细描述（靶序列长度基座位突变类型相关特征等）引物探针设计样品反应组合品设置荧光信号检测原理等进行逐项介绍
22详细介绍核酸分离纯化方法原理等
23试剂盒技术原理进行详细介绍建议结合适图示进行说明添加相关防污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶UDGUNG等）应作机理作适介绍
3组成成分
31详细说明试剂盒组分名称数量容物例浓度等信息阴性阳性品（质控品）含生物源性物质组分应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
32明确试剂盒中包含该项检测必须组分注明验证推荐配合采血核酸分离纯化试剂盒生产企业产品名称该产品医疗器械注册证号备案号（）等详细信息包含新鲜冰冻样应明确穿刺工具标处理试剂等信息
4储存条件效期
介绍试剂盒效期稳定性开瓶稳定性复溶稳定性运输稳定性机载稳定性（适）冻融次数求等
5适仪器
列明适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
EGFR突变基检测样般采肿瘤部位手术切样活检组织细胞学样床取材方法包括手术纤维支气镜活检皮肺穿刺活检胸水胸腔镜淋巴结穿刺活检支气超声引导细针穿刺活检等法获取足够肿瘤组织细胞学样晚期肺腺癌患者血液样进行EGFR突变基检测原发灶转移灶均适合检测
61组织学样类型作详细介绍明确组织样采集标准肿瘤组织突变基检测标进行分子检测前须肿瘤细胞进行评估果转移肿瘤组织标形态学必须原发灶形态学致肿瘤细胞占例需达扩增检测方法求
62外周血样作详细介绍包括样源采血求采集量保存方式样处理方式采集求防腐剂抗凝剂保护剂相关试剂材料等
63申报产品适样类型中包括体液样新鲜组织样等应详细描述样类型样采集器具采集方式样处理求注意事项等
64明确样处理保存条件：核酸分离纯化前样预处理保存条件期限（短期长期）运输条件等
65核酸分离纯化程结束应采适方法分离纯化核酸储备液进行质量控制采分光光度计法荧光染料法方法分离纯化核酸储备液进行浓度纯度检测性验证结果出扩增试验核酸溶液浓度范围求分离纯化核酸储备液质量（浓度范围）符合求应重新取材扩样量进行核酸分离纯化
66明确操作程中种制备液稳定性求类混合液（Mix）DNA储备液反应终体系等（常温冷藏冷冻冻融次数限制等）
7检验方法
详细说明实验操作步骤包括：
71 FFPE组织样脱蜡程应分描述封固载玻片未封固载玻片（）脱蜡步骤
72试剂配制方法注意事项
73核酸分离纯化条件步骤注意事项品（质控品）应参样核酸行提取（适）核酸分离纯化环节进行合理质量控制
74扩增反应前准备：组分加样体积序相关注意事项等
75 PCR阶段温度时间设置循环数设置相关注意事项
76仪器软件设置：特殊参数测基标品荧光通道选择等
8阳性判断值
阳性判断值描述包括基线确定方法阈值循环数（Ct）求Ct值求外建议结合否出现典型S形曲线结果进行判断
9检验结果解释
结合阳性阴性样中靶基标检测结果（Ct值）出现结果组合相应解释进行详述存检测灰区应灰区结果处理方式详述
10检验方法局限性
101试剂盒检测结果仅供床参考患者体化治疗选择应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
102阴性结果完全排靶基突变存样中肿瘤细胞少核酸度降解扩增反应体系中靶基浓度低检测限造成阴性结果
103肿瘤组织（细胞）存较异质性部位取样会检测结果
104合理样采集转运处理试验操作实验环境均导致假阴性假阳性结果
105明确该检测仅限规定样类型检测系统（包括适机型核酸分离纯化试剂检测方法等）
106罕见EGFR突变基检测结果阳性床药指导应结合床体化药研究成果综合进行评价
107检测试剂适EGFR拷贝数表达量检测
108检测试剂检测范围仅包括检测试剂声称基突变位点范围包括检测试剂盒声明外基突变位点检测
11产品性指标
详述性指标：
111病理组织样类型性指标
1111相应国家参考品（）检测符合情况
1112企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
1113低检测限：说明试剂盒规定检测条件扩增体系中试剂盒够覆盖突变类低检出浓度重点考虑原始模板中突变基百分率扩增终体系中核酸浓度两素低检测限影响简单介绍低检测限确定方法
1114精密度：精密度参考品组成源浓度梯度求评价标准浓度精密度参考品检测结果
1115分析特异性
11151分析性评估中特异性研究容进行纳核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列间交叉反应EGFR野生型DNA验证非类组基验证等信息
11152潜干扰物质验证
果验证发现某序列靶序列交叉反应出现阳性结果应该存交叉反应核酸序列浓度进行验证产品说明书中表明种假阳性发生做出相关提示
1116试验研究（）：简介绍参试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
112外周血样类型性指标
1121相应国家参考品（）检测符合情况
1122低检测限：说明试剂盒规定检测条件扩增体系中试剂盒够覆盖突变类低检出浓度简单介绍低检测限确定方法
1123企业部阳性阴性参考品符合率阳性阴性参考品组成源浓度梯度设置评价标准等信息
1124精密度：精密度参考品组成源浓度梯度求评价标准浓度精密度参考品检测结果
1125分析特异性
11251分析性评估中特异性存容进行纳核酸序列相具源性易引起交叉反应野生型突变类型序列间交叉反应EGFR野生型DNA验证非类组基验证等信息
11252潜干扰物质验证
果验证发现某序列靶序列交叉反应出现阳性结果应该存交叉反应核酸序列浓度进行验证产品说明书中表明种假阳性发生做出相关提示
1126试验研究（）：简介绍参试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
12注意事项
应少包括容：
121该产品含源动物源性物质应出具潜感染性警告
122床实验室应严格医疗机构床基扩增实验室理办法（卫办医政发〔2010〕194号现行效版）等关分子生物学实验室床基扩增实验室理规范执行
123标处理检测标容器检验程中材料处理符合医疗废物理条例医疗卫生机构医疗废物理办法国家区相关求
三参考文献
1国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号）2014年7月
2国家食品药品监督理总局体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）2014年9月
3国家食品药品监督理总局体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）2014年9月
4国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号）2014年9月
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6国家食品药品监督理总局药物床试验般考虑指导原2017年1月
7国家食品药品监督理总局抗肿瘤药物床试验技术指导原2012年5月
8国家食品药品监督理总局抗肿瘤药物床试验终点技术指导原2012年5月
9国家食品药品监督理总局已市抗肿瘤药物增加新适应症技术指导原2012年5月
10国家卫生计划生育委员会药物代谢酶药物作靶点基检测技术指南（试行）2015年7月
11国家卫生计划生育委员会肿瘤体化治疗检测技术指南（试行）2015年7月
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14中华医学会呼吸病学分会肺癌学组中国肺癌防治联盟晚期非细胞肺癌分子靶治疗专家识（2013版）中华结合呼吸杂志2014年3月第37卷第3期：177183
15中国医师协会肿瘤医师分会中国抗癌协会肿瘤床化疗专业委员会中国表皮生长子受体基敏感突变间变淋巴瘤激酶融合基阳性非细胞肺癌诊断治疗指南（2014版）中国肿瘤科进展中国肿瘤医师教育2014
16中国床肿瘤学会（CSCO）肿瘤标志物专家委员会中国间变性淋巴瘤激酶（ALK）阳性非细胞肺癌诊疗指南中华病理学杂志2015年10月第44卷第10期：696703
17中国抗癌协会肺癌专业委员会非细胞肺癌分子靶药物耐药处理识循证医学2013年4月第13卷第2期
18非细胞肺癌血液EGFR基突变检测中国专家识制定专家组非细胞肺癌血液EGFR基突变检测中国专家识中华医学杂志2015年12月8日第95卷第46期
19浙江省抗癌协会抗癌药物专业委员会专家组浙江省非细胞肺癌血液EGFR基突变检测专家识浙江医学2016年第4期
20吴龙廖美琳蒋国樑等局部晚期非细胞肺癌诊断治疗识中华肿瘤杂志2002年11月第24卷第6期
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22中国原发性肺癌诊疗规范（2015年版）中华肿瘤杂志2015年1月第37卷第1期
23YYT 15912017类EGFR基突变检测试剂盒
24ACMGClinical Laboratory Standards for NextGeneration SequencingGenetics in Medicine201315（9）
25FDAIn Vitro Companion Diagnostic DevicesGuidance for Industry and Food and Drug Administration Staff20140806
26HHSFDA Clinical Trial Endpoints for the Approval of Non Small Cell Lung Cancer Drugs and Biologics Guidance for Industrys201508
27FDAInfectious Disease Next Generation Sequencing Based Diagnostic Devices：Microbial Identification and Detection of Antimicrobial Resistance and Virulence Markers Draft Guidance for Industry and Food and Drug Administration Staff
28Clinical and Laboratory Standards InstituteVerification and Validation of Multiplex Nucleic Acid Assay：Approved Guideline MM17AVol28 No9ISBN 1562386611
四起草单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
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