结核分支杆菌耐异烟肼分子机制范文
国外报道认结核分支杆菌耐异烟肼产生氧化氢酶氧化物酶编码基katg基缺失突变关inha基突变相关性[1]采采pcr单链构象态性分析(pcrsscp)方法检测95株肺结核患者痰标床分离株47例结核患者痰标直接进行katg基inha基突变检测现结果报告
1 材料方法
11 材料 95株结核分枝杆菌床分离株47例肺结核患者涂阳痰标95株床分离株结核病诊断细菌学规程进行菌种鉴定药敏实验证实结核分支杆菌 中51株异烟肼耐药44例异烟肼敏感 47例肺结核患者涂阳痰标根床症状涂片结果胸部x线培养结果确诊中18例异烟肼耐药29例异烟肼敏感
12 方法
121 dna提取 传统酚氯仿抽提法提取标中dna[2]
122 pcr扩增 采25ul反应体系4xdntps终浓度02 mm01l引物终浓度02 umoll扩增程序94℃变性1 min61℃退火1 min72℃延伸 l min循环30次72℃延伸l0 min扩增产物扩增产物2琼脂糖凝胶电泳紫外检测rpob出现258bp条带katg出现282bp条带rpsl出现267bp条带扩增阳性
123 sscp银染 pcr扩增阳性标进行sscp检测扩增产物加等量甲酰胺变性液95℃变性10 min
立冰浴5 min8非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳条件6℃＼100 v电压电泳约2~3 h电泳结束取凝胶板硝酸银染色观察结果相
2 结果
21 pcr扩增结核分支杆菌h37rv44株药物敏感
株51株耐inh分离株katginha基扩增均阳性47例耐inh肺结核患者痰标中katg基44例扩增阳性inha基40例扩增阳性(见表1)
22 应pcrsscp技术检测katginha基突变结果(见表12)44株药物敏感株katginha基突变率分45051株耐inh分离株中31株katg基发生突变突变率6083株inha基发生突变突变率59耐inh肺结核患者痰标中基突变检测率分47775
3 讨
年耐药结核病病情逐年升特异烟肼利福耐药耐药结核病(mdrtb)增影响结核病化疗效果原建立种新快速效药敏试验方法结核病早期治疗具重意义研究表明[3]结核分杆菌耐异烟肼产生氧化氢酶氧化物酶编码基katg基缺失突变关inha基相关性实验pcrsscp方法出耐异烟肼时katg基突变率608inha基突变率59 表明katg基突变结核分支杆菌耐异烟肼床分离株基突变类型说明katginh耐药中起导作某菌株耐inh形成katg关katg基突变inh耐药性重分子机制inha基inh耐药性相关性
9095耐利福株时耐inh样单独进行inh药物敏感性分析初步制定细菌耐药谱时检测47例耐inh肺结核患者痰标44例扩增阳性耐inh痰katg基突变率477inha基突变率75说明应pcr pctsscp技术简便快速直接检测未培养痰标中结核分支杆菌katg基突变床检测结核分支杆菌耐异烟肼耐药性提供初步
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国外报道认结核分支杆菌耐异烟肼产生氧化氢酶氧化物酶编码基katg基缺失突变关inha基突变相关性[1]采采pcr单链构象态性分析(pcrsscp)方法检测95株肺结核患者痰标床分离株47例结核患者痰标直接进行katg基inha基突变检测现结果报告
1 材料方法
11 材料 95株结核分枝杆菌床分离株47例肺结核患者涂阳痰标95株床分离株结核病诊断细菌学规程进行菌种鉴定药敏实验证实结核分支杆菌 中51株异烟肼耐药44例异烟肼敏感 47例肺结核患者涂阳痰标根床症状涂片结果胸部x线培养结果确诊中18例异烟肼耐药29例异烟肼敏感
12 方法
121 dna提取 传统酚氯仿抽提法提取标中dna[2]
122 pcr扩增 采25ul反应体系4xdntps终浓度02 mm01l引物终浓度02 umoll扩增程序94℃变性1 min61℃退火1 min72℃延伸 l min循环30次72℃延伸l0 min扩增产物扩增产物2琼脂糖凝胶电泳紫外检测rpob出现258bp条带katg出现282bp条带rpsl出现267bp条带扩增阳性
123 sscp银染 pcr扩增阳性标进行sscp检测扩增产物加等量甲酰胺变性液95℃变性10 min
立冰浴5 min8非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳条件6℃＼100 v电压电泳约2~3 h电泳结束取凝胶板硝酸银染色观察结果相
2 结果
21 pcr扩增结核分支杆菌h37rv44株药物敏感
株51株耐inh分离株katginha基扩增均阳性47例耐inh肺结核患者痰标中katg基44例扩增阳性inha基40例扩增阳性(见表1)
22 应pcrsscp技术检测katginha基突变结果(见表12)44株药物敏感株katginha基突变率分45051株耐inh分离株中31株katg基发生突变突变率6083株inha基发生突变突变率59耐inh肺结核患者痰标中基突变检测率分47775
3 讨
年耐药结核病病情逐年升特异烟肼利福耐药耐药结核病(mdrtb)增影响结核病化疗效果原建立种新快速效药敏试验方法结核病早期治疗具重意义研究表明[3]结核分杆菌耐异烟肼产生氧化氢酶氧化物酶编码基katg基缺失突变关inha基相关性实验pcrsscp方法出耐异烟肼时katg基突变率608inha基突变率59 表明katg基突变结核分支杆菌耐异烟肼床分离株基突变类型说明katginh耐药中起导作某菌株耐inh形成katg关katg基突变inh耐药性重分子机制inha基inh耐药性相关性
9095耐利福株时耐inh样单独进行inh药物敏感性分析初步制定细菌耐药谱时检测47例耐inh肺结核患者痰标44例扩增阳性耐inh痰katg基突变率477inha基突变率75说明应pcr pctsscp技术简便快速直接检测未培养痰标中结核分支杆菌katg基突变床检测结核分支杆菌耐异烟肼耐药性提供初步
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