蛋白质含量测定（双缩脲法）

实验17 蛋白质含量测定（双缩脲法）
目
掌握双缩脲法测定蛋白质含量原理方法掌握分光光度计方法
二原理
碱性溶液中双缩脲（ NH 2 co NH co NH 2 ） Cu 2 + 产生紫红色络合物反应称双缩脲反应蛋白质分子中肽键铜离子发生双缩脲反应溶液紫红色深浅蛋白质含量定范围符合朗伯尔定律蛋白质氨基酸组成分子质量关测定范围 1 l0mg 蛋白质适精度求高蛋白质含量测定 Tris 氨基酸 EDTA 等会干扰该测定
三仪器试剂材料
1 ．仪器
（ 1) 分光光度计 （ 2 ）分析天 （ 3 ）振荡机 （ 4 ）刻度吸： 1m1X2 5m1X2 10m1 X 1
(5 ）具塞三角瓶： 1OOml （ 6 ）漏斗： 13
2 ．试剂
（ 1 ）双缩脲试剂：取硫酸铜（ Cu S0 4 5H 2 O ） 15g 酒石酸钾钠（ NaKC 4 H 4 O 6 4H 2 O ） 60g 溶 500m1 蒸馏水中搅拌时加入 300m1 10 NaOH 溶液定容 1000 ml 贮涂石蜡试剂瓶中
（ 2 ） 005molL NaOH
(3) 标准酪蛋溶液：准确称取酪蛋白 05g 溶 005mol L NaOH 溶液中定容 100m1 5mgm1 标准溶液
3 ．材料
麦玉米谷物样品风干磨碎通 100 目铜筛
四操作步骤
1 ．标准曲线绘制
取 6 支试编号表加入试剂：
试剂
号
1
2
3
4
5
6
标准酪蛋白溶液（ ml ）
0
02
04
06
08
10
H 2 O （ ml ）
1
08
06
04
02
0
双缩脲试剂（ ml ）
4
4
4
4
4
4
蛋白质含量（ mg ）
0
1
2
3
4
5
震荡 15min 室温静置 30min 54Onm 色蛋白质含量（ mg ）横坐标吸光度坐标绘制标准曲线
2 ．样品测定
（ 1 ）磨碎筛谷物样品 80 ℃烘恒重取出置燥器中冷
（ 2 ）称取烘干样品约 02g 两份分放入两干燥三角瓶中然瓶中分加入 5ml 0O5mol ／ L NaOH 溶液湿润加入 20ml 双缩脲试剂震荡 15min 室温静置反应 30min 分滤取滤液 540nm 波长色标准曲线查出相应蛋白质含量（ mg ）
标准曲线查蛋白质含量 (mg )
五结果处理

六注意事项
1 ．三角瓶定干燥勿样品粘瓶壁
2 ．酪蛋白需凯氏定氮法确定蛋白质含量
七思考题
双缩脲法测定蛋质含量原理什？




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