实验七血清胆固醇定量测定（磷硫铁法）
实验目：
掌握磷硫铁法测定血清胆固醇原理方法床意义
实验原理：
总胆固醇测定化学色法(磷硫铁法邻苯二甲醛法)酶学方法(试剂盒)两类实验采磷硫铁法测定血清胆固醇含量
水乙醇提取血清中胆固醇硫磷铁试剂作产生颜色反应呈色度胆固醇含量成正色法测定血清中胆固醇含量
血清水乙醇处理蛋白质沉淀胆固醇酯溶解水乙醇乙醇提取液中加磷硫铁试剂胆固醇酯试剂形成较稳定紫红色化合物物质560nm波长处特征吸收峰色法作胆固醇定量测定正常血清中胆固醇含量年龄增增加趋势均正常值110～220mg100ml
胆固醇含量400mg100mlA（OD）值呈良线性关系
实验讲授：
722型分光光度计
722型分光光度计
测量原理
分光光度法测量理伯郎—耳定律：容液中物质光射激发产生光吸收效应物质光吸收选择性种物质吸收光谱根定律束单色光通定浓度范围稀色溶液时溶液光吸收程度A溶液浓度c（gl）液层厚度b (cm) 成正定律表达式A abc（a例系数）c单位moll时A εbc例系数ε表示称摩尔吸光系数单位L·mol1·cm1色物质定波长特征常数
T (透光率) II0 A (吸光度) lgT A K·C·L (色皿厚度)
测定时入射光I 吸光系数溶液光径长度变时透光根溶液浓度变化K常数色皿厚度定LI0定测出A算出C分光光度计表头行透光率行吸光度
722型分光光度计
1灵敏度旋钮调1档（信号放倍率）
2开启电源指示灯亮 选择开关置T波长调测试波长仪器预热20分钟
3开试样室（光门动关闭）调节透光率零点旋钮数字显示0000（调节100T旋钮）盖试样室盖色皿架处蒸馏水校正位置光电受光调节透光率100旋钮数字显示1000显示1000适增加微电流放倍数（增加灵敏度档数时应重复（3）调节仪器透光率0位）量倍率置低档样仪器会更高稳定性
4预热（3）连续次调整透光率0位100位置稳定仪器进行测定工作
吸光度A测量
选择开关置A 调节吸光度调零旋钮数字显示零然测样品移入光路显示值测样品吸光度值
浓度C测量
选择开关A旋C已标定浓度样品放入光路调节浓度旋钮数字显示标定值测样品放入光路读出测样品浓度值
方法
（1）预热仪器 选择开关置T开电源开关仪器预热20分钟防止光电疲劳连续光预热仪器时测定时应试样室盖开光路切断
（2）选定波长 根实验求转动波长手轮调需单色波长
（3）固定灵敏度档 空白溶液调100情况采灵敏度较低挡时首先调1挡灵敏度够时逐渐升高换挡改变灵敏度须重新校正0100选灵敏度实验程中变动
（4）调节T0 轻轻旋动0旋钮数字显示000（时试样室开）
（5）调节T100 盛蒸馏水（空白溶液纯溶剂）色皿放入色皿座架中第格准光路试样室盖子轻轻盖调节透率100旋钮数字显示正1000
（6）吸光度测定 选择开关置A盖试样室盖子空白液置光路中调节吸光度调节旋钮数字显示000盛测溶液色皿放入色皿座架中格盖试样室盖轻轻拉动试样架拉手测溶液进入光路时数字显示值该测溶液吸光度值读数开试样室盖切断光路
重复述测定操作12次读取相应吸光度值取均值
（7）浓度测定 选择开关A旋置C已标定浓度样品放入光路调节浓度旋钮数字显示标定值测样品放入光路时数字显示值该测溶液浓度值
（8）关机 实验完毕切断电源色皿取出洗净色皿座架软纸擦净
注意事项：
1测量完毕速暗盒盖开关闭电源开关灵敏度旋钮调低档取出色皿装硅胶干燥剂袋放入暗盒关盖子色皿中溶液倒入烧杯中蒸馏水洗净放回色皿盒
2台仪器配套色皿仪器表面皿单调换
仪器：
722分光光度计台式离心机试试架刻度吸量移液器等
试剂：
（1）10％三氯化铁溶液：10gFeCl36H2O (AR) 溶磷酸 (AR)定容100ml储棕色瓶冷藏
（2）磷硫铁试剂：取10％FeCl3溶液15ml100ml棕色容量瓶加浓硫酸 (AR)刻度
（3）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇80mg溶水乙醇定容100ml
（4）胆固醇标准溶液：储液水乙醇准确稀释10倍毫升含008mg胆固醇
（5）水乙醇 (AR)水乙醇 (AR)
操作
（1）吸取血清01ml干燥离心先加水乙醇04ml摇匀加水乙醇20 ml摇匀10分钟离心（3000rpm 离心5 min）清液备（分两次加入乙醇目作完全）
（2）取干燥试3支编号分加入水乙醇10ml（空白）胆固醇标准溶液10ml（标准）述乙醇提取液10ml（样品）皆加入磷硫铁试剂10ml摇匀10分钟分转移050 cm光径色杯分光光度计560nm色
号试剂
测 定
标 准
空 白
乙醇抽提液
1．0 ml
胆固醇标准应液
1．0 ml
水乙醇
1．0 ml
磷硫铁试剂
1．0 ml
1．0 ml
1．0 ml
A（OD）
硫磷铁试剂须壁缓缓加入乙醇液分成两层立迅速振摇20次放置10分钟（冷室温）560nm进行色空白调零读取吸光度
计算
（1）通制作标准曲线求血清胆固醇含量
（2）胆固醇含量400mg100mlA（OD）值呈良线性关系吸光值A值求含量实验法
（3）方法1血清样品根线性关系计算
血清胆固醇mg
A2标准液吸光值A1样品液吸光值
注意事项：
1颜色反应加硫磷铁试剂混合时产热程度关试口径厚度致：加硫磷铁试剂时必须乙醇分成两层然混合边加边摇否显色完全硫磷铁试剂加混合混合手法程度致混合时试发热注意勿液体溅出免损伤衣服皮肤眼睛
2试色杯均须干燥浓硫酸质量重放置日久吸收水分颜色反应降低
3空白应接色带橙黄色表示乙醇纯应醛处理
4血清胆固醇正常含量2859mmolL(110230mgdl)计算公式中0026mgdl转换成mmolL系数
容仅供参考果您需解决具体问题(尤法律医学等领域)建议您详细咨询相关领域专业士
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实验目：
掌握磷硫铁法测定血清胆固醇原理方法床意义
实验原理：
总胆固醇测定化学色法(磷硫铁法邻苯二甲醛法)酶学方法(试剂盒)两类实验采磷硫铁法测定血清胆固醇含量
水乙醇提取血清中胆固醇硫磷铁试剂作产生颜色反应呈色度胆固醇含量成正色法测定血清中胆固醇含量
血清水乙醇处理蛋白质沉淀胆固醇酯溶解水乙醇乙醇提取液中加磷硫铁试剂胆固醇酯试剂形成较稳定紫红色化合物物质560nm波长处特征吸收峰色法作胆固醇定量测定正常血清中胆固醇含量年龄增增加趋势均正常值110～220mg100ml
胆固醇含量400mg100mlA（OD）值呈良线性关系
实验讲授：
722型分光光度计
722型分光光度计
测量原理
分光光度法测量理伯郎—耳定律：容液中物质光射激发产生光吸收效应物质光吸收选择性种物质吸收光谱根定律束单色光通定浓度范围稀色溶液时溶液光吸收程度A溶液浓度c（gl）液层厚度b (cm) 成正定律表达式A abc（a例系数）c单位moll时A εbc例系数ε表示称摩尔吸光系数单位L·mol1·cm1色物质定波长特征常数
T (透光率) II0 A (吸光度) lgT A K·C·L (色皿厚度)
测定时入射光I 吸光系数溶液光径长度变时透光根溶液浓度变化K常数色皿厚度定LI0定测出A算出C分光光度计表头行透光率行吸光度
722型分光光度计
1灵敏度旋钮调1档（信号放倍率）
2开启电源指示灯亮 选择开关置T波长调测试波长仪器预热20分钟
3开试样室（光门动关闭）调节透光率零点旋钮数字显示0000（调节100T旋钮）盖试样室盖色皿架处蒸馏水校正位置光电受光调节透光率100旋钮数字显示1000显示1000适增加微电流放倍数（增加灵敏度档数时应重复（3）调节仪器透光率0位）量倍率置低档样仪器会更高稳定性
4预热（3）连续次调整透光率0位100位置稳定仪器进行测定工作
吸光度A测量
选择开关置A 调节吸光度调零旋钮数字显示零然测样品移入光路显示值测样品吸光度值
浓度C测量
选择开关A旋C已标定浓度样品放入光路调节浓度旋钮数字显示标定值测样品放入光路读出测样品浓度值
方法
（1）预热仪器 选择开关置T开电源开关仪器预热20分钟防止光电疲劳连续光预热仪器时测定时应试样室盖开光路切断
（2）选定波长 根实验求转动波长手轮调需单色波长
（3）固定灵敏度档 空白溶液调100情况采灵敏度较低挡时首先调1挡灵敏度够时逐渐升高换挡改变灵敏度须重新校正0100选灵敏度实验程中变动
（4）调节T0 轻轻旋动0旋钮数字显示000（时试样室开）
（5）调节T100 盛蒸馏水（空白溶液纯溶剂）色皿放入色皿座架中第格准光路试样室盖子轻轻盖调节透率100旋钮数字显示正1000
（6）吸光度测定 选择开关置A盖试样室盖子空白液置光路中调节吸光度调节旋钮数字显示000盛测溶液色皿放入色皿座架中格盖试样室盖轻轻拉动试样架拉手测溶液进入光路时数字显示值该测溶液吸光度值读数开试样室盖切断光路
重复述测定操作12次读取相应吸光度值取均值
（7）浓度测定 选择开关A旋置C已标定浓度样品放入光路调节浓度旋钮数字显示标定值测样品放入光路时数字显示值该测溶液浓度值
（8）关机 实验完毕切断电源色皿取出洗净色皿座架软纸擦净
注意事项：
1测量完毕速暗盒盖开关闭电源开关灵敏度旋钮调低档取出色皿装硅胶干燥剂袋放入暗盒关盖子色皿中溶液倒入烧杯中蒸馏水洗净放回色皿盒
2台仪器配套色皿仪器表面皿单调换
仪器：
722分光光度计台式离心机试试架刻度吸量移液器等
试剂：
（1）10％三氯化铁溶液：10gFeCl36H2O (AR) 溶磷酸 (AR)定容100ml储棕色瓶冷藏
（2）磷硫铁试剂：取10％FeCl3溶液15ml100ml棕色容量瓶加浓硫酸 (AR)刻度
（3）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇80mg溶水乙醇定容100ml
（4）胆固醇标准溶液：储液水乙醇准确稀释10倍毫升含008mg胆固醇
（5）水乙醇 (AR)水乙醇 (AR)
操作
（1）吸取血清01ml干燥离心先加水乙醇04ml摇匀加水乙醇20 ml摇匀10分钟离心（3000rpm 离心5 min）清液备（分两次加入乙醇目作完全）
（2）取干燥试3支编号分加入水乙醇10ml（空白）胆固醇标准溶液10ml（标准）述乙醇提取液10ml（样品）皆加入磷硫铁试剂10ml摇匀10分钟分转移050 cm光径色杯分光光度计560nm色
号试剂
测 定
标 准
空 白
乙醇抽提液
1．0 ml
胆固醇标准应液
1．0 ml
水乙醇
1．0 ml
磷硫铁试剂
1．0 ml
1．0 ml
1．0 ml
A（OD）
硫磷铁试剂须壁缓缓加入乙醇液分成两层立迅速振摇20次放置10分钟（冷室温）560nm进行色空白调零读取吸光度
计算
（1）通制作标准曲线求血清胆固醇含量
（2）胆固醇含量400mg100mlA（OD）值呈良线性关系吸光值A值求含量实验法
（3）方法1血清样品根线性关系计算
血清胆固醇mg
A2标准液吸光值A1样品液吸光值
注意事项：
1颜色反应加硫磷铁试剂混合时产热程度关试口径厚度致：加硫磷铁试剂时必须乙醇分成两层然混合边加边摇否显色完全硫磷铁试剂加混合混合手法程度致混合时试发热注意勿液体溅出免损伤衣服皮肤眼睛
2试色杯均须干燥浓硫酸质量重放置日久吸收水分颜色反应降低
3空白应接色带橙黄色表示乙醇纯应醛处理
4血清胆固醇正常含量2859mmolL(110230mgdl)计算公式中0026mgdl转换成mmolL系数
容仅供参考果您需解决具体问题(尤法律医学等领域)建议您详细咨询相关领域专业士
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