实训41盐析沉淀法纯化血浆中免疫球蛋白
实训目
1掌握盐析原理
2掌握盐析操作技术
实训原理
原理蛋白质高浓度盐溶液中盐浓度逐渐增高蛋白质表面电荷中水化膜破坏蛋白质分子相互聚集溶液中沉淀析出
实训设备材料试剂
1器材
离心机
2试剂
血浆磷酸盐缓液（02molLPH80）Na2SO4
实训程
1血浆清蛋白球蛋白分离
①取血浆10ml置100ml烧杯中加磷酸盐缓液10ml搅拌10min
②搅拌慢慢加36g Na2SO4终浓度达18
③加完Na2SO4继续搅拌2030 min充分沉淀蛋白质
④3500rmin离心20min弃清液（含清蛋白）沉淀中含种球蛋白
2IgG分离
①8ml磷酸盐缓液溶解述沉淀中种球蛋白转移50ml烧杯中搅拌20 min
②3500rmin离心1020min取清液（杂质）
③述清液中缓慢加入096g Na2SO4终浓度达12搅拌20min
④3500rmin离心1020min弃清液
⑤沉淀溶解4ml缓液搅拌20 min
⑥3500rmin离心1020min取清液
⑦清液中缓慢加入048g Na2SO4终浓度达12搅拌20min
⑧3500rmin离心1020min弃清液（含α球蛋白β球蛋白）沉淀IgG
思考题
1盐析产物IgG中含少量Na2SO4？
2测定盐析产物IgG含量？
3什方法检测盐析产物IgG相分子质量？
磷酸盐缓液（Phosphate Buffer PB）
试剂： NaH2PO4•2H2O Na2HPO4•12H2O
配制方法：配制时常先配制02molL NaH2PO402molL Na2HPO4两者定例混合成02molL磷酸盐缓液（PB）根需配制浓度PBPBS
（1）02molL NaH2PO4称取NaH2PO42H2O 312g( NaH2PO4•H2O 276g)加重蒸水1000ml溶解
（2）02molL Na2HPO4：称取 Na2HPO412H2O 71632g（ Na2HPO4•7H2O 536g Na2HPO4•2H2O 356g）加重蒸水1000ml溶解
（3）02molL pH74PB配制：取19ml 02molL NaH2PO481ml 02molL Na2HPO4•12H2O充分混合02molLPB（pH约74～75）pH偏高偏低通改变二者例加调整室温保存
02molL磷酸盐缓液（pH57～80）
pH 02molL NaH2PO4(ml) 02molL Na2HPO4(ml)
57 935 65
58 920 80
59 900 100
60 877 123
61 850 150
62 815 185
63 775 225
64 735 265
65 685 315
66 625 375
67 565 435
68 510 490
69 450 550
70 390 610
71 330 670
72 280 720
73 230 670
74 190 810
75 160 840
76 130 870
77 105 895
78 85 915
79 70 930
80 53 947
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原理蛋白质高浓度盐溶液中盐浓度逐渐增高蛋白质表面电荷中水化膜破坏蛋白质分子相互聚集溶液中沉淀析出
实训设备材料试剂
1器材
离心机
2试剂
血浆磷酸盐缓液（02molLPH80）Na2SO4
实训程
1血浆清蛋白球蛋白分离
①取血浆10ml置100ml烧杯中加磷酸盐缓液10ml搅拌10min
②搅拌慢慢加36g Na2SO4终浓度达18
③加完Na2SO4继续搅拌2030 min充分沉淀蛋白质
④3500rmin离心20min弃清液（含清蛋白）沉淀中含种球蛋白
2IgG分离
①8ml磷酸盐缓液溶解述沉淀中种球蛋白转移50ml烧杯中搅拌20 min
②3500rmin离心1020min取清液（杂质）
③述清液中缓慢加入096g Na2SO4终浓度达12搅拌20min
④3500rmin离心1020min弃清液
⑤沉淀溶解4ml缓液搅拌20 min
⑥3500rmin离心1020min取清液
⑦清液中缓慢加入048g Na2SO4终浓度达12搅拌20min
⑧3500rmin离心1020min弃清液（含α球蛋白β球蛋白）沉淀IgG
思考题
1盐析产物IgG中含少量Na2SO4？
2测定盐析产物IgG含量？
3什方法检测盐析产物IgG相分子质量？
磷酸盐缓液（Phosphate Buffer PB）
试剂： NaH2PO4•2H2O Na2HPO4•12H2O
配制方法：配制时常先配制02molL NaH2PO402molL Na2HPO4两者定例混合成02molL磷酸盐缓液（PB）根需配制浓度PBPBS
（1）02molL NaH2PO4称取NaH2PO42H2O 312g( NaH2PO4•H2O 276g)加重蒸水1000ml溶解
（2）02molL Na2HPO4：称取 Na2HPO412H2O 71632g（ Na2HPO4•7H2O 536g Na2HPO4•2H2O 356g）加重蒸水1000ml溶解
（3）02molL pH74PB配制：取19ml 02molL NaH2PO481ml 02molL Na2HPO4•12H2O充分混合02molLPB（pH约74～75）pH偏高偏低通改变二者例加调整室温保存
02molL磷酸盐缓液（pH57～80）
pH 02molL NaH2PO4(ml) 02molL Na2HPO4(ml)
57 935 65
58 920 80
59 900 100
60 877 123
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62 815 185
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66 625 375
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68 510 490
69 450 550
70 390 610
71 330 670
72 280 720
73 230 670
74 190 810
75 160 840
76 130 870
77 105 895
78 85 915
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