005环孢素滴眼液稳定性长期试验考察
1 前言
环孢素（CyclosporineCS）种真菌源性11氨基酸组成亲脂性环状肽类物质种高效免疫抑制剂广泛应器官移植种身免疫性疾病治疗中[1]国际认治疗干眼症处方药[2]药理作通选择性逆性抑制T淋巴细胞实现通转导作作T细胞活化程中信号抑制神钙蛋白进抑制T细胞增长分化[3]终达免疫抑制效果床治疗器官移植免疫排斥反应类风湿性关节炎[4]等身免疫疾病提高存活率环孢素眼表疾病具显著疗效眼科应分全身药局部药两种方式然全身药受血眼屏障等素易进入眼会带严重良反应[5]眼局部药
角膜移植排斥反应供体角膜特殊抗原引起种炎性反应环孢素作种强效免疫抑制剂效抑制角膜移植免疫排斥反应[6]床治疗方面糖皮质激素环孢素长时间应激素会产生种良反应环孢素抑制T细胞G0期G1期转变抑制T淋巴细胞抗原呈递抑制白介素2γ干扰素产生减轻术排斥反应[7]
蚕蚀性角膜溃疡名Mooren＇s溃疡种慢性进行性疼痛性角膜溃疡初发角膜周边部位角膜周边部延伸角膜中央匍行发展终累全角膜术常规应激素环孢素滴眼液环磷酰胺等免疫抑制剂药物治疗该术药物维持治疗研究结果[8]证明局部环孢素滴眼液单独联合板层角膜移植术效治疗难治性蚕蚀性角膜溃疡
腺病毒感染引起流行性角膜结膜炎（Epidemic keratitis conjunctivitisEKC）种世界性广泛流行眼部传染病通身免疫系统建立快愈床特点急性滤泡性假膜性结膜炎伴角膜皮浸润常免疫反应引起通常需历时定时间会吸收长达数月甚数年溃疡会形成[9]果瞳孔区发生病变定会该病视力造成伤害较严重Jeng[10]等报道应环孢素联合糖皮质激素点眼进行治疗较理想应环孢素进行治疗会显更加效安全副作
外环孢素治疗床中常见干眼症(DES)[11]干眼症种复杂原致泪液质量动力学异常导致泪膜稳定性眼表面异常伴眼部适症状类疾病床方面药效果较效缓解干眼等适症状良反应长期干眼症名角结膜干燥症(KCS) 眼表泪液减少黏液分泌异常等原引发泪液蒸发较分布异常综合征致分四种类型：①泪腺功低致水样夜缺乏性干眼病②沙眼化学伤致黏性蛋白缺乏性干眼病③眼睑缺损配带角膜接触镜等导致泪液分布均匀引起泪液动力学异常④睑板腺功障碍引起脂质缺乏性干眼症普通群中发病率03[12]干眼症治疗应着手病减少眼表泪腺炎症改善泪膜结构功
DES发病率种素关中50岁女性患病率约男性2倍 某疾病中发病率更高糖尿病患者风湿性关节炎患者中分543467[13]环孢素滴眼液疗效全身性良反应年欧美国家床广泛应斯耶格伦氏综合征(Sjorgren＇s syndrome)类炎症相关干眼症环孢素等消炎药进行治疗[14]类床试验证明环孢素滴眼液增加患者眼泪量环孢素较造眼泪疗效某患者造眼泪治疗数月效环孢素效果显著增强患者角膜结膜知觉敏感度[15]患家族性淀粉样发性神病变患者通环孢素治疗干眼症状明显减轻良反应[16]环孢素作效缓解慢性干眼症潜炎症程局部应环孢素阻止某患者干眼进程治疗干眼症良疗效
滴眼剂眼病治疗常途径环孢素具脂溶性易溶植物油中现环孢素眼剂型普通乳剂型滴眼剂环孢素相分子质量呈疏水性眼通透性差难达治疗水影响疗效
微乳（microemulsion ME）系指粒径10～100nm乳滴分散种液体介质形成热力学稳定胶体溶液微乳般定条件发（轻度振摇）形成乳滴较均匀球形呈透明半透明状微乳油相表面活性剂（SF）助表面活性剂（CoSF）水相组成定温度长时间放置离心(1300 rmin30min)均较稳定
中国药典关溶液颜色检查法方法澄清度检查法制剂稳定性指导原求该制剂稳定性进行长期试验考察药物制剂稳定性重点考察项目考察滴眼液性状见异物含量PH值关物质菌情况005环孢素滴眼液生产包装贮存条件提供科学
2 仪器试药
21 仪器
数显极恒速搅拌器 （巩义市英峪予华仪器厂）
日岛津产LC10AVP型高效液相色谱仪
SPD10AVP型紫外检测器
LC10AVP泵
CTO10AVP柱温箱
Classup工作站
ShimpackvpODS色谱柱（150mm*46mm）
日岛津产紫外分光光度计UV2450
隔膜真空泵GM033 (天津市津腾实验设备限公司）
电子分析天AG135 (梅特勒托利仪器限公司）
实验室pH计FE20 (梅特勒托利仪器限公司）
Model C3860A超声仪 (CBL Photoelectron Technology Co．Lid．)
渗透压摩尔浓度测定仪SMC 30B (天河医疗仪器限公司）
针头式微孔滤膜滤器 (天津市双 吉色谱仪器营部）
次性菌注射器 (浙江京环医疗品限公司）
灯检装置
A．带遮光板日光灯光源
B．反光黑色背景
C．反光白色背景底部
D．反光白色背景（指遮光板侧）
药品光试验箱 温度 XMTA908 光强度XMTA808 （重庆汉瞻仪器限公司）
调温调湿箱 （天津天宇机电限公司）
22 试药
环孢素 (福建科瑞药业限公司批号：140201（N）)
环孢素品 （中国药品生物制品鉴定含量988）
豆油 (新兴（铁岭）药业限公司批号：15050106201)
聚乙二醇PEG400 （江西益普生药业限公司批号：20141001）
聚山梨酯80 （四川金山制药限公司批号：150502）
羟苯乙酯 （广州市广谱医药限公司批号：141102）
甲醇 （色谱纯天津市康科德科技限公司）
乙腈 （特级品天津市康科德科技限公司）
磷酸 （化学纯石家庄市试剂厂冀化学试剂限公司）
水纯化水
三乙胺分析纯
005环孢素滴眼液 （制三批：160203160204160205）
色谱试剂色谱纯试剂分析纯水注射水
3 方法
31 样品制备：
取羟苯乙酯03g加入700ml纯化水加热溶解加入60ml聚乙二醇400搅拌混匀取05g环孢素乳钵中加10 ml豆油80 ml聚山梨酯80充分研磨倒入述溶液中快速搅拌加纯化水1000ml混匀045µm微孔滤膜滤菌分装
32 色谱条件方法学研究：
321色谱条件：
色谱柱： ShimpackvpODS色谱柱（150mm*46mm）
流动相： 乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：05）磷酸调pH293
检验波长： 210nm
柱温： 65 °C
流速： 12 mlmin
进流量： 饱进样
进样量： 20μL
322样品预处理：
取C18固相萃取柱两串联活化（活化序：甲醇水水甲醇次5ml）5ml移液精密吸取样品5ml烧杯中注射器全部吸取缓慢入柱收集滤液注射器二次吸取完全次通柱弃滤液5ml纯化水洗杂质乙腈水混合液（1：1）洗脱样品10ml容量瓶中定容混匀滤（孔径045µm）作供试品
323系统适应性实验：
移液精密量取该样品5ml322处理方法操作321色谱条件进样记录色谱图计算理塔板数 分离度较标准品样品空白微乳色谱图
324标准曲线绘制：
精密称取环孢素品25mg50ml容量瓶中乙腈溶解稀释刻度成储备液分精密移取储备液34567ml10ml容量瓶中乙腈稀释刻度配成0150202503035µgml溶液述色谱条件分进样记录应峰面积峰面积（Y）品浓度（X）回观察否呈良线性关系计算回方程
33 制剂稳定性长期试验考察：
331溶液性状：
品淡黄色澄明液体中国药典溶液颜色检查法配制黄绿色调标准色液分取6℃±2℃条件0月1月2月3月环孢素滴眼液样品直接标准色液较样品标准色体积相等置白色背景前视观察
332鉴
含量测定项记录色谱图中供试品峰保留时间品峰保留时间分致
333菌情况检测：
取品005环孢素滴眼液采薄膜滤法处理01菌蛋白胨水溶液洗（膜少100ml）金黄色葡萄球菌阳性菌法检查（中国药典）应符合规定
334pH渗透压检查：
品pH值应50～65间渗透压摩尔浓度应290～430mOsmolkg范围分取6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液样品适量测定pH值渗透压观察制剂理化性质否稳定
335见异物检查：
分取6℃±2℃条件0月1月2月3月环孢素滴眼液样品20支容器标签容器外壁清洁干净调节光度2000~3000lx供试品置遮光板边缘处眼清晰观测距离（约25cm）分置黑色白色背景手持供试品颈部轻轻旋转翻转容器药液中存见异物悬浮（应避免产生气泡）轻轻翻摇目检视重复3次总时限20秒
样品制剂静置定时间轻轻旋转时应烟雾状微粒柱没检出金属屑玻璃屑长度粒径超2mm纤维块状物等明显见异物没检查出微细见异物（点状物2mm短纤维块状物等）根检测结果观察该005环孢素滴眼液样品见异物检查否符合标准
336样品含量测定：
取005环孢素滴眼液样品322样品预处理方法项操作供试品20µl进样外标法根峰面积计算样品含量求该制剂含环孢素（C62H111N11O12）含量应90～110范围
337关物质检测：
分取6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液样品适量进行精密称定322操作步骤完成样品预处理然乙腈定容制成1ml中含025mg溶液作供试品溶液理制成1ml中约25µg溶液作液含量测定项色谱条件取液20µl注入液相色谱仪调节灵敏度成分色谱峰峰高约满量程20精密量取供试品溶液品溶液20µl分进样记录色谱图成分峰保留时间2倍供试品溶液色谱图中单杂质峰面积液峰面积710 (07)测杂质峰面积液峰面积15倍（15）处方制备求制作出含环孢素空白微乳做空白供试品溶液中空白重合峰应扣
4 结果分析
41 系统适应性试验结果：
证明实验条件达环孢素制剂中组分分离环孢素峰保留时间峰宽计算出理塔板数n232830>600分离度R3018>15均符合药典求图414243
图41 环孢素色谱图
图42 空白色谱图
图43 标准品色谱图
42 标准曲线绘制：图44
图44标准曲线图
峰面积（Y）品浓度（X）回015035µg范围呈良线性关系回方程Y2×107x+2018935(r209996)
43稳定性考察结果：
取3批环孢素滴眼液置6℃±2℃环境中放置分第0123月取样检测考察性状见异物菌情况pH渗透压药物含量等指标
结果表明3批样品6℃±2℃环境中放置分第0123月取样检测指标均符合规定表46稳定性考察结果：
表46稳定性考察结果
44 样品含量测定
表46中数显示三批样品标示量百分含量分均900～1100范围该制剂含量符合相关规定
45 关物质检查：
6℃±2℃条件0月1月2月3月制005环孢素滴眼液关物质测定结果：表46长期试验观察测单杂质峰面积均液峰面积710杂质峰面积均液峰面积15倍符合规定
表47 关物质测定结果
综试验结果表明：005环孢素滴眼液6℃±2℃储存条件0月1月2月3月稳定性考察性状pH值渗透压关物质含量等理化性质均合格符合中国药典标准
5 讨
51 微乳型制剂确定：
眼部生理结构复杂具高度敏感性独特保护屏障眼部药存较差异眼部药物传递系统设计存困难微乳乳滴油相SFCoSF水相组成适合作水中溶解度较药物载体界面膜具两亲性利药物穿角膜屏障进入眼提高药物眼部生物利度环孢素眼制剂床通常005浓度低浓度环孢素眼部刺激患者耐受性较佳微乳种安全稳定刺激性新型药系统兼具制备方便易灭菌生产成低等优势正科研工作者投越越关注
微乳传统滴眼液相具显著优点传统眼制剂目前市场应然广泛传统剂型缺点眼部生物利度低眼球运动鼻泪系统作会导致药物角膜前停留时间变短药物跨角膜转运会药物身理化性质角膜屏障作受影响般情况5药物进入眼睛前房组织患者滴眼液重复次药术患者应更便研究新型眼部药物载体促进眼部吸收提高眼部生物利度相重制剂005环孢素滴眼液油性基质制成微乳型滴眼液具安全缓释稳定刺激性低优点
52 样品预处理原：
试验样品水包油型微乳加量辅料直接进样必须通破乳者固相萃取柱药物暴露出进行检测实验试乙腈破乳破乳效果良辅料聚山梨酯80药物溶解性相似易分离聚山梨酯80含量远远药物环孢素聚山梨酯80药物检测影响固相萃取柱水洗时部分辅料聚山梨酯80洗降低聚山梨酯80干扰防止萃取柱身样品吸附减少检测程中造成干扰需萃取柱进行活化5ml甲醇5ml纯化水分通萃取柱吹干通活化C18固相萃取柱先水部分辅料聚山梨酯80洗乙腈药物洗脱出进样样减少杂质造成干扰
53 流动相配：
实验试流动相乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（180：620：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（220：580：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：620：180：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：580：220：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（220：600：180：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（180：600：120：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：025）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：10）等等组流动相配终考虑基线保留时间峰形等方面素选择 乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：05）磷酸调流动相pH23间
54 柱温确定
实验柱温定65 ℃充分理实践意义柱温高会仪器稳定性降低产生基线漂移柱温低会严重影响峰形出峰时间环孢素相分子质量脂溶性高采色谱柱分离时需较高柱温效分离否峰形宽呈丘陵状实验分尝试5560657075 ℃ 柱温发现着柱温升高峰宽逐步减峰形改善明显考虑柱温太高会影响色谱柱寿命终确定柱温65 ℃试验证实65 ℃实验佳柱温
55 流速选择
流速决定出峰时间该实验程中进行三流速测定分10 mlmin12 mlmin15 mlmin流速低情况会出现出峰时间拖现象流速较高话分离度会受影响出峰时间控制1020 min间综合考虑终决定流速12 mlmin
56 药物制剂稳定性意义
药物制剂稳定性指药物制剂制备期间质量发生变化速度程度评价药物制剂质量重指标药物制剂稳定性通进行实验观察药物理化性质药品制备程中保存期间发生物理化学变化进行相关考察探讨影响素寻找避免延缓药物降解增加药物制剂稳定性种措施预测制剂贮存期间质量标准长时间药物制剂稳定性研究意义保证药品质量作安全效稳定指导新药剂型研制开发某种定程度减少济损失药物制剂稳定性研究保证产品质量安全疗效方面具重意义药物制剂稳定性研究提高药品质量应全面考虑种素药物制剂稳定性产生影响筛选出佳处方床提供安全稳定效药物制剂
57 pH稳定性观察
正常泪液pH值72～74间（患眼病时改变）滴眼液pH低会刺激量分泌泪液稀释药液药物出结膜囊影响药物作效果时偏酸药液凝固眼黏膜造成损害pH值高眼黏膜皮细胞硬化膨胀导致组织坏死配置滴眼液时常加入缓物质调节溶液pH值泪液体相减少刺激性正常眼耐受pH值范围50～90间通005环孢素滴眼液pH值稳定性观察发现pH值均50～65范围实验观察程中明显变化符合眼制剂求
58 渗透压稳定性观察
涉溶质扩散通生物膜生物膜液体转运种生物程中渗透压起着极重作制备眼液体制剂等药物制剂时需观察渗透压稳定性溶液渗透压赖溶液中溶质粒子数量溶液数性通常渗透压摩尔浓度表示实验SMC 30B渗透压摩尔浓度测定仪005环孢素滴眼液进行渗透压稳定性观察6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液分进行测定结果显示渗透压摩尔浓度值均290~430 mOsmolkg范围达滴眼剂质量标准次测量渗透压值保持稳定长期放置该药物稳定性较
59 高效液相色谱法测定药物含量
高效液相色谱法测定药物含量准确性高重现性年种眼科制剂均采种方法测定含量次实验证明该方法科学效测定结果稳定高效液相色谱法通常测定005环孢素滴眼液含量通高效液相色谱法测定005环孢素滴眼液制剂样品含量等指标均合医院制剂质量标准项理化性质检测指标均令满意
510 关物质考察
关物质考察中首先制剂样品环孢素322处理方法操作作供试品述方法制成品溶液浓度应低低检测限（001 mgml）采10倍浓度环孢素样品322处理方法操作作供试品更检测出环孢素滴眼剂产生杂峰
1月2月3月考察中出现12杂峰说明环孢素滴眼剂降解物文献报道环孢素含杂质：环孢素C环孢素B环孢素G环孢素H异环孢素H异环孢素A中环孢素H异环孢素H异环孢素A均降解产物通计算关杂质含量符合药典规定标准
6 结
干眼症眼科门诊常见病发病床005环孢素滴眼液进行治疗005环孢素滴眼液够效缓解干眼症症状提高患者生活质量种眼表疾病治疗具较治疗效果
试验通005环孢素滴眼液稳定性进行长期试验考察6℃±2℃储存条件通0月1月2月3月稳定性考察性状pH值渗透压关物质含量等理化性质均合格全符合中国药典标准充分说明005环孢素滴眼液稳定性较参数指标合格005环孢素滴眼液生产包装贮存条件提供科学
总环孢素滴眼液眼科医生治疗干眼症种较安全效药物
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
1 前言
环孢素（CyclosporineCS）种真菌源性11氨基酸组成亲脂性环状肽类物质种高效免疫抑制剂广泛应器官移植种身免疫性疾病治疗中[1]国际认治疗干眼症处方药[2]药理作通选择性逆性抑制T淋巴细胞实现通转导作作T细胞活化程中信号抑制神钙蛋白进抑制T细胞增长分化[3]终达免疫抑制效果床治疗器官移植免疫排斥反应类风湿性关节炎[4]等身免疫疾病提高存活率环孢素眼表疾病具显著疗效眼科应分全身药局部药两种方式然全身药受血眼屏障等素易进入眼会带严重良反应[5]眼局部药
角膜移植排斥反应供体角膜特殊抗原引起种炎性反应环孢素作种强效免疫抑制剂效抑制角膜移植免疫排斥反应[6]床治疗方面糖皮质激素环孢素长时间应激素会产生种良反应环孢素抑制T细胞G0期G1期转变抑制T淋巴细胞抗原呈递抑制白介素2γ干扰素产生减轻术排斥反应[7]
蚕蚀性角膜溃疡名Mooren＇s溃疡种慢性进行性疼痛性角膜溃疡初发角膜周边部位角膜周边部延伸角膜中央匍行发展终累全角膜术常规应激素环孢素滴眼液环磷酰胺等免疫抑制剂药物治疗该术药物维持治疗研究结果[8]证明局部环孢素滴眼液单独联合板层角膜移植术效治疗难治性蚕蚀性角膜溃疡
腺病毒感染引起流行性角膜结膜炎（Epidemic keratitis conjunctivitisEKC）种世界性广泛流行眼部传染病通身免疫系统建立快愈床特点急性滤泡性假膜性结膜炎伴角膜皮浸润常免疫反应引起通常需历时定时间会吸收长达数月甚数年溃疡会形成[9]果瞳孔区发生病变定会该病视力造成伤害较严重Jeng[10]等报道应环孢素联合糖皮质激素点眼进行治疗较理想应环孢素进行治疗会显更加效安全副作
外环孢素治疗床中常见干眼症(DES)[11]干眼症种复杂原致泪液质量动力学异常导致泪膜稳定性眼表面异常伴眼部适症状类疾病床方面药效果较效缓解干眼等适症状良反应长期干眼症名角结膜干燥症(KCS) 眼表泪液减少黏液分泌异常等原引发泪液蒸发较分布异常综合征致分四种类型：①泪腺功低致水样夜缺乏性干眼病②沙眼化学伤致黏性蛋白缺乏性干眼病③眼睑缺损配带角膜接触镜等导致泪液分布均匀引起泪液动力学异常④睑板腺功障碍引起脂质缺乏性干眼症普通群中发病率03[12]干眼症治疗应着手病减少眼表泪腺炎症改善泪膜结构功
DES发病率种素关中50岁女性患病率约男性2倍 某疾病中发病率更高糖尿病患者风湿性关节炎患者中分543467[13]环孢素滴眼液疗效全身性良反应年欧美国家床广泛应斯耶格伦氏综合征(Sjorgren＇s syndrome)类炎症相关干眼症环孢素等消炎药进行治疗[14]类床试验证明环孢素滴眼液增加患者眼泪量环孢素较造眼泪疗效某患者造眼泪治疗数月效环孢素效果显著增强患者角膜结膜知觉敏感度[15]患家族性淀粉样发性神病变患者通环孢素治疗干眼症状明显减轻良反应[16]环孢素作效缓解慢性干眼症潜炎症程局部应环孢素阻止某患者干眼进程治疗干眼症良疗效
滴眼剂眼病治疗常途径环孢素具脂溶性易溶植物油中现环孢素眼剂型普通乳剂型滴眼剂环孢素相分子质量呈疏水性眼通透性差难达治疗水影响疗效
微乳（microemulsion ME）系指粒径10～100nm乳滴分散种液体介质形成热力学稳定胶体溶液微乳般定条件发（轻度振摇）形成乳滴较均匀球形呈透明半透明状微乳油相表面活性剂（SF）助表面活性剂（CoSF）水相组成定温度长时间放置离心(1300 rmin30min)均较稳定
中国药典关溶液颜色检查法方法澄清度检查法制剂稳定性指导原求该制剂稳定性进行长期试验考察药物制剂稳定性重点考察项目考察滴眼液性状见异物含量PH值关物质菌情况005环孢素滴眼液生产包装贮存条件提供科学
2 仪器试药
21 仪器
数显极恒速搅拌器 （巩义市英峪予华仪器厂）
日岛津产LC10AVP型高效液相色谱仪
SPD10AVP型紫外检测器
LC10AVP泵
CTO10AVP柱温箱
Classup工作站
ShimpackvpODS色谱柱（150mm*46mm）
日岛津产紫外分光光度计UV2450
隔膜真空泵GM033 (天津市津腾实验设备限公司）
电子分析天AG135 (梅特勒托利仪器限公司）
实验室pH计FE20 (梅特勒托利仪器限公司）
Model C3860A超声仪 (CBL Photoelectron Technology Co．Lid．)
渗透压摩尔浓度测定仪SMC 30B (天河医疗仪器限公司）
针头式微孔滤膜滤器 (天津市双 吉色谱仪器营部）
次性菌注射器 (浙江京环医疗品限公司）
灯检装置
A．带遮光板日光灯光源
B．反光黑色背景
C．反光白色背景底部
D．反光白色背景（指遮光板侧）
药品光试验箱 温度 XMTA908 光强度XMTA808 （重庆汉瞻仪器限公司）
调温调湿箱 （天津天宇机电限公司）
22 试药
环孢素 (福建科瑞药业限公司批号：140201（N）)
环孢素品 （中国药品生物制品鉴定含量988）
豆油 (新兴（铁岭）药业限公司批号：15050106201)
聚乙二醇PEG400 （江西益普生药业限公司批号：20141001）
聚山梨酯80 （四川金山制药限公司批号：150502）
羟苯乙酯 （广州市广谱医药限公司批号：141102）
甲醇 （色谱纯天津市康科德科技限公司）
乙腈 （特级品天津市康科德科技限公司）
磷酸 （化学纯石家庄市试剂厂冀化学试剂限公司）
水纯化水
三乙胺分析纯
005环孢素滴眼液 （制三批：160203160204160205）
色谱试剂色谱纯试剂分析纯水注射水
3 方法
31 样品制备：
取羟苯乙酯03g加入700ml纯化水加热溶解加入60ml聚乙二醇400搅拌混匀取05g环孢素乳钵中加10 ml豆油80 ml聚山梨酯80充分研磨倒入述溶液中快速搅拌加纯化水1000ml混匀045µm微孔滤膜滤菌分装
32 色谱条件方法学研究：
321色谱条件：
色谱柱： ShimpackvpODS色谱柱（150mm*46mm）
流动相： 乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：05）磷酸调pH293
检验波长： 210nm
柱温： 65 °C
流速： 12 mlmin
进流量： 饱进样
进样量： 20μL
322样品预处理：
取C18固相萃取柱两串联活化（活化序：甲醇水水甲醇次5ml）5ml移液精密吸取样品5ml烧杯中注射器全部吸取缓慢入柱收集滤液注射器二次吸取完全次通柱弃滤液5ml纯化水洗杂质乙腈水混合液（1：1）洗脱样品10ml容量瓶中定容混匀滤（孔径045µm）作供试品
323系统适应性实验：
移液精密量取该样品5ml322处理方法操作321色谱条件进样记录色谱图计算理塔板数 分离度较标准品样品空白微乳色谱图
324标准曲线绘制：
精密称取环孢素品25mg50ml容量瓶中乙腈溶解稀释刻度成储备液分精密移取储备液34567ml10ml容量瓶中乙腈稀释刻度配成0150202503035µgml溶液述色谱条件分进样记录应峰面积峰面积（Y）品浓度（X）回观察否呈良线性关系计算回方程
33 制剂稳定性长期试验考察：
331溶液性状：
品淡黄色澄明液体中国药典溶液颜色检查法配制黄绿色调标准色液分取6℃±2℃条件0月1月2月3月环孢素滴眼液样品直接标准色液较样品标准色体积相等置白色背景前视观察
332鉴
含量测定项记录色谱图中供试品峰保留时间品峰保留时间分致
333菌情况检测：
取品005环孢素滴眼液采薄膜滤法处理01菌蛋白胨水溶液洗（膜少100ml）金黄色葡萄球菌阳性菌法检查（中国药典）应符合规定
334pH渗透压检查：
品pH值应50～65间渗透压摩尔浓度应290～430mOsmolkg范围分取6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液样品适量测定pH值渗透压观察制剂理化性质否稳定
335见异物检查：
分取6℃±2℃条件0月1月2月3月环孢素滴眼液样品20支容器标签容器外壁清洁干净调节光度2000~3000lx供试品置遮光板边缘处眼清晰观测距离（约25cm）分置黑色白色背景手持供试品颈部轻轻旋转翻转容器药液中存见异物悬浮（应避免产生气泡）轻轻翻摇目检视重复3次总时限20秒
样品制剂静置定时间轻轻旋转时应烟雾状微粒柱没检出金属屑玻璃屑长度粒径超2mm纤维块状物等明显见异物没检查出微细见异物（点状物2mm短纤维块状物等）根检测结果观察该005环孢素滴眼液样品见异物检查否符合标准
336样品含量测定：
取005环孢素滴眼液样品322样品预处理方法项操作供试品20µl进样外标法根峰面积计算样品含量求该制剂含环孢素（C62H111N11O12）含量应90～110范围
337关物质检测：
分取6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液样品适量进行精密称定322操作步骤完成样品预处理然乙腈定容制成1ml中含025mg溶液作供试品溶液理制成1ml中约25µg溶液作液含量测定项色谱条件取液20µl注入液相色谱仪调节灵敏度成分色谱峰峰高约满量程20精密量取供试品溶液品溶液20µl分进样记录色谱图成分峰保留时间2倍供试品溶液色谱图中单杂质峰面积液峰面积710 (07)测杂质峰面积液峰面积15倍（15）处方制备求制作出含环孢素空白微乳做空白供试品溶液中空白重合峰应扣
4 结果分析
41 系统适应性试验结果：
证明实验条件达环孢素制剂中组分分离环孢素峰保留时间峰宽计算出理塔板数n232830>600分离度R3018>15均符合药典求图414243
图41 环孢素色谱图
图42 空白色谱图
图43 标准品色谱图
42 标准曲线绘制：图44
图44标准曲线图
峰面积（Y）品浓度（X）回015035µg范围呈良线性关系回方程Y2×107x+2018935(r209996)
43稳定性考察结果：
取3批环孢素滴眼液置6℃±2℃环境中放置分第0123月取样检测考察性状见异物菌情况pH渗透压药物含量等指标
结果表明3批样品6℃±2℃环境中放置分第0123月取样检测指标均符合规定表46稳定性考察结果：
表46稳定性考察结果
44 样品含量测定
表46中数显示三批样品标示量百分含量分均900～1100范围该制剂含量符合相关规定
45 关物质检查：
6℃±2℃条件0月1月2月3月制005环孢素滴眼液关物质测定结果：表46长期试验观察测单杂质峰面积均液峰面积710杂质峰面积均液峰面积15倍符合规定
表47 关物质测定结果
综试验结果表明：005环孢素滴眼液6℃±2℃储存条件0月1月2月3月稳定性考察性状pH值渗透压关物质含量等理化性质均合格符合中国药典标准
5 讨
51 微乳型制剂确定：
眼部生理结构复杂具高度敏感性独特保护屏障眼部药存较差异眼部药物传递系统设计存困难微乳乳滴油相SFCoSF水相组成适合作水中溶解度较药物载体界面膜具两亲性利药物穿角膜屏障进入眼提高药物眼部生物利度环孢素眼制剂床通常005浓度低浓度环孢素眼部刺激患者耐受性较佳微乳种安全稳定刺激性新型药系统兼具制备方便易灭菌生产成低等优势正科研工作者投越越关注
微乳传统滴眼液相具显著优点传统眼制剂目前市场应然广泛传统剂型缺点眼部生物利度低眼球运动鼻泪系统作会导致药物角膜前停留时间变短药物跨角膜转运会药物身理化性质角膜屏障作受影响般情况5药物进入眼睛前房组织患者滴眼液重复次药术患者应更便研究新型眼部药物载体促进眼部吸收提高眼部生物利度相重制剂005环孢素滴眼液油性基质制成微乳型滴眼液具安全缓释稳定刺激性低优点
52 样品预处理原：
试验样品水包油型微乳加量辅料直接进样必须通破乳者固相萃取柱药物暴露出进行检测实验试乙腈破乳破乳效果良辅料聚山梨酯80药物溶解性相似易分离聚山梨酯80含量远远药物环孢素聚山梨酯80药物检测影响固相萃取柱水洗时部分辅料聚山梨酯80洗降低聚山梨酯80干扰防止萃取柱身样品吸附减少检测程中造成干扰需萃取柱进行活化5ml甲醇5ml纯化水分通萃取柱吹干通活化C18固相萃取柱先水部分辅料聚山梨酯80洗乙腈药物洗脱出进样样减少杂质造成干扰
53 流动相配：
实验试流动相乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（180：620：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（220：580：200：10）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：620：180：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：580：220：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（220：600：180：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（180：600：120：05）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：025）乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：10）等等组流动相配终考虑基线保留时间峰形等方面素选择 乙腈：甲醇：水：三乙胺（200：600：200：05）磷酸调流动相pH23间
54 柱温确定
实验柱温定65 ℃充分理实践意义柱温高会仪器稳定性降低产生基线漂移柱温低会严重影响峰形出峰时间环孢素相分子质量脂溶性高采色谱柱分离时需较高柱温效分离否峰形宽呈丘陵状实验分尝试5560657075 ℃ 柱温发现着柱温升高峰宽逐步减峰形改善明显考虑柱温太高会影响色谱柱寿命终确定柱温65 ℃试验证实65 ℃实验佳柱温
55 流速选择
流速决定出峰时间该实验程中进行三流速测定分10 mlmin12 mlmin15 mlmin流速低情况会出现出峰时间拖现象流速较高话分离度会受影响出峰时间控制1020 min间综合考虑终决定流速12 mlmin
56 药物制剂稳定性意义
药物制剂稳定性指药物制剂制备期间质量发生变化速度程度评价药物制剂质量重指标药物制剂稳定性通进行实验观察药物理化性质药品制备程中保存期间发生物理化学变化进行相关考察探讨影响素寻找避免延缓药物降解增加药物制剂稳定性种措施预测制剂贮存期间质量标准长时间药物制剂稳定性研究意义保证药品质量作安全效稳定指导新药剂型研制开发某种定程度减少济损失药物制剂稳定性研究保证产品质量安全疗效方面具重意义药物制剂稳定性研究提高药品质量应全面考虑种素药物制剂稳定性产生影响筛选出佳处方床提供安全稳定效药物制剂
57 pH稳定性观察
正常泪液pH值72～74间（患眼病时改变）滴眼液pH低会刺激量分泌泪液稀释药液药物出结膜囊影响药物作效果时偏酸药液凝固眼黏膜造成损害pH值高眼黏膜皮细胞硬化膨胀导致组织坏死配置滴眼液时常加入缓物质调节溶液pH值泪液体相减少刺激性正常眼耐受pH值范围50～90间通005环孢素滴眼液pH值稳定性观察发现pH值均50～65范围实验观察程中明显变化符合眼制剂求
58 渗透压稳定性观察
涉溶质扩散通生物膜生物膜液体转运种生物程中渗透压起着极重作制备眼液体制剂等药物制剂时需观察渗透压稳定性溶液渗透压赖溶液中溶质粒子数量溶液数性通常渗透压摩尔浓度表示实验SMC 30B渗透压摩尔浓度测定仪005环孢素滴眼液进行渗透压稳定性观察6℃±2℃条件0月1月2月3月005环孢素滴眼液分进行测定结果显示渗透压摩尔浓度值均290~430 mOsmolkg范围达滴眼剂质量标准次测量渗透压值保持稳定长期放置该药物稳定性较
59 高效液相色谱法测定药物含量
高效液相色谱法测定药物含量准确性高重现性年种眼科制剂均采种方法测定含量次实验证明该方法科学效测定结果稳定高效液相色谱法通常测定005环孢素滴眼液含量通高效液相色谱法测定005环孢素滴眼液制剂样品含量等指标均合医院制剂质量标准项理化性质检测指标均令满意
510 关物质考察
关物质考察中首先制剂样品环孢素322处理方法操作作供试品述方法制成品溶液浓度应低低检测限（001 mgml）采10倍浓度环孢素样品322处理方法操作作供试品更检测出环孢素滴眼剂产生杂峰
1月2月3月考察中出现12杂峰说明环孢素滴眼剂降解物文献报道环孢素含杂质：环孢素C环孢素B环孢素G环孢素H异环孢素H异环孢素A中环孢素H异环孢素H异环孢素A均降解产物通计算关杂质含量符合药典规定标准
6 结
干眼症眼科门诊常见病发病床005环孢素滴眼液进行治疗005环孢素滴眼液够效缓解干眼症症状提高患者生活质量种眼表疾病治疗具较治疗效果
试验通005环孢素滴眼液稳定性进行长期试验考察6℃±2℃储存条件通0月1月2月3月稳定性考察性状pH值渗透压关物质含量等理化性质均合格全符合中国药典标准充分说明005环孢素滴眼液稳定性较参数指标合格005环孢素滴眼液生产包装贮存条件提供科学
总环孢素滴眼液眼科医生治疗干眼症种较安全效药物
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
