附件
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应（γ干扰素释放试验IGRAs）原理：受结核分枝杆菌抗原刺激致敏T淋巴细胞（T细胞）次遇相抗原时产生γ干扰素IGRAs通检测全血者分离全血外周血单核细胞（PBMC）结核分枝杆菌特异性抗原刺激产生γ干扰素判断受试者否存结核分枝杆菌感染目前国际较成熟IGRAs两种：采酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测全血中致敏T细胞次受结核分枝杆菌特异性抗原刺激释放γ干扰素水二采酶联免疫斑点技术（ELISPOT）方法测定结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单核细胞中够释放γ干扰素效应T细胞数量
述两种检测方法原理类似检测技术操作程序略采结核分枝杆菌特异性抗原存结核分枝杆菌复合群中卡介苗数非结核分枝杆菌中缺失
目前结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂指：利免疫学检测技术ELISAELISPOT技术等结核分枝杆菌特异抗原刺激T细胞产生γ干扰素检测靶标静脉全血中结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应进行体外检测试剂结核分枝杆菌感染检测结核病辅助诊断指导原述容针结核病辅助诊断预期途预期途结核分枝杆菌感染检测申报试剂申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
指导原技术求基ELISAELISPOT方法建立方法部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重预期途方法学检验原理结核分枝杆菌特异性刺激抗原低检测限等方面写明申报试剂目前市场已获批准类产品间区刺激抗原新发现结核分枝杆菌特异性抗原应详细述提高该类试剂灵敏度特异性科学提供充分支持资料
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号简称44号公告）相关求
（二）原材料研究资料
应提供原材料抗原肽重组抗原抗体阴性阳性标准品（γ干扰素）酶企业参考品等选择源制备程质量分析质量控制标准等研究资料原材料企业生产生产工艺必须相稳定原材料购供应商应提供资料包括：供应商提供质量标准出厂检定报告性指标证书该原材料货质量检验资料
企业参考品：申请应提供企业参考品详细源制备确定等资料
采ELISPOT方法申报试剂企业参考品少应包括：阴性参考品阳性参考品精密度参考品中阳性参考品建议采结核病患者（菌阴菌阳）全血阴性参考品建议采健康易混淆疾病患者全血精密度参考品建议采结核病患者全血申请采全血外样形式作企业参考品请提交申请采企业参考品组成源稳定性延续性性控性等详细理试验数
采ELISA方法申报试剂企业参考品少应包括：阴性参考品阳性参考品低检测限参考品线性参考品准确度参考品精密度参考品等中阴性参考品阳性参考品精密度参考品设置参考ELISPOT方法申报试剂相关求低检测限参考品准确度参考品线性参考品考察ELISA部分性采含γ干扰素溶液（建议采血浆作基质溶液）
阴性阳性：申报试剂质控体系通设置阳性阴性实现申报资料应详细描述种原料选择制备定值程等试验资料指导原技术求基ELISAELISPOT方法建立采述方法学结核细胞类检测试剂建议少设置阳性阴性阳性般采外周血单核细胞非特异性刺激物质控外周血单核细胞功否正常避免产生假阴性阴性控制细胞活化程中产生种子非特异性影响避免产生假阳性
标准品（适）选择质量标准：应详细描述标准品原料源制备纯度浓度（复溶浓度）分子量功活性等确定验证资料
肽重组抗原选择质量标准：应详细描述肽源（种抗原）重组抗原源组成分子量纯度浓度重组抗原毒素含量刺激活性特异性等确定验证资料冻干抗原应设置水分含量质控标准
抗体选择质量标准：应详细描述抗体源纯度浓度分子量刺激免疫原效价功活性等确定验证资料
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺包括：配制工作液分装包装等流程图表示应提供生产工艺确定包括试验方法数等
反应体系研究资料应产品说明书中检验方法部分涉基容样量试剂量反应条件等提供确定包括试验方法数等
（四）分析性评估资料
申请应提交申报试剂进行性验证研究资料包括具体试验方法控标准实验数统计分析等结核分枝杆菌细胞免疫反应检测试剂建议着重分析性进行研究
1采ELISA方法申报试剂
检验方法分两部分：（1）结核分枝杆菌特异性抗原全血样培养获含γ干扰素血浆样（2）γ干扰素标准品做标准曲线第（1）步血浆样采ELISA方法进行定量检测基该方法学分析性需述两方面性均进行验证
11低检测限
申请采合理方法确定验证申报试剂低检测限建议采含系列γ干扰素稀释浓度样浓度样进行次重复检测选取测定均OD值2SD0浓度测定均OD值+2SD浓度作低检测限浓度
12线性范围
线性范围确定研究应高值样（采血浆基质采溯源国际校准品方法血浆样中γ干扰素进行定量）进行梯度稀释稀释液应血浆应包含接低检测限界值浓度通评价定范围线性关系确定申报试剂线性范围
13准确度
采方法进行评价：国际标准品偏差分析回收试验者方法学等方法申请根实际情况选择合理方法进行研究
14分析特异性
141交叉反应
交叉反应验证考虑全血身含细胞子全血刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应需进行交叉反应验证细胞子包括：IL1αIL1βIL2IL3IL4IL5IL6IL10IL12TNFαIFNαIFNβ等建议0浓度γ干扰素水中浓度γ干扰素水分进行交叉反应验证
时建议申请采定数量常见分枝杆菌感染患者全血样进行试验评价申报试剂特异性
142干扰物质
应全血样中常见干扰物质进行验证包括：抗凝剂甘油三酯血红蛋白胆红素类风湿子抗核抗体抗线粒体抗体免疫抑制剂等建议采含浓度γ干扰素血浆样分进行干扰物质验证出会γ干扰素检测值产生干扰高干扰物浓度
15精密度
151采全血样进行试验精密度：分采阳性全血样阴性全血样进行少10次重复检测判断检测结果阴阳性次重复检测结果应致
152采含γ干扰素血浆样进行试验精密度：建议γ干扰素低浓度中等浓度2浓度水分进行验证
1521低浓度样：γ干扰素浓度略高试剂盒低检测限（n≥20）
1522中等浓度样：采中等浓度样进行重复检测CV≤15（n≥20）
153申请应设置合理精密度评价周期便批批间操作者间精密度进行综合评价
16阴性参考品符合率
建议选择少15份健康易混淆疾病患者全血样进行试验述健康患者应包括等级结核菌素（PPD）皮试群
17阳性参考品符合率
建议选择少20份结核病患者（少10例菌阳少10例菌阴）全血样进行试验
18标准品溯源资料
γ干扰素具国际标准品建议检测结果量值溯源国际标准品申请应提供国际标准品产品标准品溯源链级赋值资料
2采ELISPOT方法申报试剂
检验方法：结核分枝杆菌特异性抗原分离外周血单核细胞（PBMC）培养活化刺激PBMC分泌γ干扰素微孔板包单克隆抗体捕获酶标记单克隆抗体进行反应显色斑点代表细胞计数斑点少判断否存结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应基该方法学分析性需述方面进行性验证
21分析特异性
211交叉反应
交叉反应验证考虑PBMC刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应需进行交叉反应验证细胞子包括：IL1αIL1βIL2IL3IL4IL5IL6IL10IL12TNFαIFNαIFNβ等建议0浓度γ干扰素水中浓度γ干扰素水分进行交叉反应验证
时建议申请采定数量常见分枝杆菌感染患者全血样进行试验评价申报试剂特异性
212干扰物质
应全血样中常见干扰物质进行验证包括：抗凝剂甘油三酯血红蛋白胆红素类风湿子抗核抗体抗线粒体抗体免疫抑制剂等建议采全血样进行干扰物质验证出产生干扰高干扰物浓度
22精密度
采全血样（包括高斑点数样中等斑点数低斑点数样）分进行精密度评价进行少10次重复试验判断检测结果阴阳性次重复检测结果应致时应计数检测孔斑点数计算CV值CV值应≤25
申请应设置合理精密度评价周期便批批间操作者间精密度进行综合评价
23阴性参考品符合率
建议选择少15份健康易混淆疾病患者全血样进行试验述健康患者应包括等级结核菌素（PPD）皮试群
24阳性参考品符合率
建议选择少20份结核病患者（少10例菌阳少10例菌阴）全血样进行试验
（五）阳性判断值研究资料
类试剂阳性判断值较复杂阳性判断值应产品说明书中检验结果解释部分容申请应产品说明书中检验结果解释部分涉数值提供详细确定验证资料该部分资料应采床样进行试验请注意床样选择应申报产品声称预期途相致建议采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行确定
（六）稳定性研究资料
稳定性包括申报试剂稳定性样稳定性（包括全血样稳定性血浆样稳定性）前者包括实时稳定性（效期）开封稳定性冻融次数限制（适）等稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床试验
床试验总体求床试验资料容应符合办法44号公告体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）规定仅结合结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂具体特点床试验中应重点关注容进行阐述
1床试验机构选择
申请应选定少3家（含3家）床试验机构法规求开展床试验
2试剂选择
预期结核病辅助诊断申报试剂申请选择境已批准市床普遍认质量较类产品作试剂采试验体外诊断试剂（称申报试剂）试剂进行较研究试验证明品已市产品等效
3床试验象选择
预期结核病辅助诊断申报产品床试验象应满足：（1）床试验总病例少1000例（2）具结核病相关体征症状疑似结核病患者（3）终床诊断结核病患者病例中应包括肺结核患者肺外结核患者涂片阴性肺结核患者占肺结核患者例应50单纯肺外结核患者少30例（4）非结核呼吸道疾病患者易混淆疾病患者病例（终床诊断结核病）包括肺炎肺癌支气炎支气扩张非结核分枝杆菌病慢阻肺等中肺癌少50例（5）述群应包括PPD阴性阳性群选择PPD阴性群进行床试验（6）床试验机构样量样分布应相均衡
全血样冻融床试验应采新鲜样样采集保存等应满足申报试剂试剂说明书相关求
4床试验方法床原始数统计分析
41分申报试剂试剂说明书入组床样进行检测记录结果
42床报告中应明确：总样例数床诊断肺结核患者总例数说明涂片阴性涂片阳性肺结核患者例数肺外结核患者例数说明类肺外结核患者例数非结核呼吸道疾病患者易混淆疾病样例数详细说明类非结核疾病患者例数
43床原始数应列表方式表示包括病例样年龄性床诊断结果申报试剂结果试剂结果等
44床试验数统计应选择合适统计方法受试者工作特征（ROC）曲线分析阴性阳性符合率等常选择四格表形式总结两种试剂定性检测结果定性结果进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂定性结果致性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异
45申报试剂涂片阴性肺结核患者肺外结核患者均应定检出率
5结果差异样验证
两种试剂检测结果致样应采床公认较第三方试剂合理方法进行复核时结合患者床病情差异原结果进行分析
6床试验方案
床试验机构方案设置应保持致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床试验机构实验室实验室技术员操作完成申请技术员进行必技术指导外意干涉试验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格样入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原床试验机构选试剂应保持致便进行合理统计学分析
7问题
果申报试剂预期途结核分枝杆菌感染检测申请应法规求设置合理方法选择合适预期适群进行床试验
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定容包含产品性指标检验方法附录中明确原材料生产工艺半成品检定求
采ELISA方法申报试剂产品技术求性指标少应包括：外观阴性参考品符合率阳性参考品符合率线性准确度低检测限精密度等采ELISPOT方法申报试剂产品技术求性指标少应包括：外观阴性参考品符合率阳性参考品符合率精密度
（九）产品注册检验报告
根办法求首次申请注册第三类产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续三生产批次样品注册检测
（十）产品说明书
产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求境外试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂说明书重点容进行说明
1预期途
应少包括部分容：
11产品体外定性检测新鲜外周静脉抗凝血中结核分枝杆菌特异性T细胞免疫反应结核分枝杆菌感染检测者结核病辅助诊断（根床试验等研究资料确认预期途）
12说明预期途相关床适应症背景情况说明相关床实验室诊断方法
13测群特征介绍：具结核病相关体征症状疑似结核病患者域求年龄限制（）等
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量例浓度等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分应列出相关试剂耗材名称货号相关信息
23申报试剂注册单元应包含真空采血真空采血应相应法规申报注册
3检验原理
31说明试剂盒刺激抗原抗原肽（名称否肽抗原重组抗原）抗原抗原肽卡介苗非结核分枝杆菌中存情况
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性开封稳定性复融稳定性冻融次数求（适）等应明确具体储存条件效期
5样求
重点明确容：
51样采集：明确抗凝剂
52样保存：
521采ELISPOT方法申报试剂应明确：全血样进行外周血单核细胞分离前保存温度时间分离外周血单核细胞抗原孵育培养前保存温度时间
522采ELISA方法申报试剂应明确：全血样抗原孵育培养前保存温度时间
6检验方法
该类产品检测步骤繁应详细描述全血采集开始结果判读前步骤明确注意事项重点关注问题：采ELISPOT方法申报试剂明确培养时外周血单核细胞数量培养基类型
7检验结果解释
结合阳性阴性样检测结果列表形式出现结果组合相应解释进行详述明确灰区结果处理方式
8检验方法局限性
81试剂盒检测结果仅供床参考患者床诊治应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
82关假阴性结果性分析：某免疫功受损患者导致假阴性
83关假阳性结果性分析：分枝杆菌否存交叉反应
9产品性指标
91低检测限（适）：说明试剂低检出浓度简单介绍低检测限试验方法结果
92企业阴阳性参考品检测符合情况：简单介绍阴阳性参考品组成符合率结果等信息
93精密度：明确精密度参考品组成结果
94分析特异性
941交叉反应：明确产生交叉反应细胞子验证情况
942干扰物质：明确样中常见干扰物质检测结果影响
95试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
96境外（适）境床试验数总结
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册技术审查指导原编制说明
编制背景
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂指利免疫学检测技术ELISAELISPOT技术等结核分枝杆菌特异抗原刺激T细胞产生γ干扰素检测靶标静脉全血中结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应进行体外检测试剂结核分枝杆菌感染检测结核病辅助诊断
指导原述容针结核病辅助诊断预期途预期途结核分枝杆菌感染检测申报试剂申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
二重点问题说明
（）企业参考品组成样类型
目前该类试剂采全血样作检测样类型涉方法学包括：ELISPOTELISA针企业参考品样类型考虑全血样冻存性该类试剂质控关键点指导原建议：申请采全血外样形式作企业参考品应提交申请采企业参考品组成源稳定性延续性性控性等详细理试验数
针企业参考品组成ELISPOT方法全血细胞培养直接固体基质表面形成斑点计数斑点判断结果理计数斑点实践时难保证获取全血样刚形成斑点采该方法学试剂仅需设置阴性参考品阳性参考品精密度参考品ELISA方法全血培养吸出血浆清检测清中干扰素含量采该方法学类试剂需设置培养阶段干扰素ELISA检测阶段参考品包括：阴性参考品阳性参考品线性参考品低检测限参考品精密度参考品等
（二）分析性评估相关问题
1低检测限求方法
采ELISPOT方法试剂理计数斑点理低检测限1斑点现实中通试验证明该类试剂低检测限1斑点具困难难实现参考美国FDA已批准类试剂求讨ELISPOT方法学类试剂需进行低检测限验证
采ELISA方法试剂低检测限检测血浆样中干扰素低含量指导原建议申请根研发台设置科学合理方法进行低检测限试验
2精密度求方法
采ELISPOT方法试剂精密度必须采全血进行试验方模拟整检测程讨日间精密度时企业相关专家均提出全血样法冻存法然天进行日间精密度研究时现认知水科学合理代方法进行日间精密度研究类试剂做日间精密度求
采ELISA方法试剂精密度仅需考察全血培养阶段精密度需考察ELISA检测部分干扰素含量检测精密度前者参考ELISPOT方法相关求方法者参考常见ELISA方法检测试剂求方法
3交叉反应求方法
采ELISPOT方法ELISA方法试剂结果判读方式存差异检验原理均采特异性γ干扰素抗体检测T细胞刺激活化分泌γ干扰素类试剂交叉反应性考虑全血身含细胞子全血刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应
果全血样培养程中加入产生交叉反应细胞子势必会影响T细胞培养程中功活性终影响T细胞分泌γ干扰素力影响结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测该类试剂采种方法交叉反应研究采血浆基质检测细胞子γ干扰素抗体交叉反应性
（三）产品预期途
该类试剂检测原理检测结核分枝杆菌感染包括活动性结核感染（结核病）潜伏感染潜伏感染诊断全世界均金标准中国出生接种卡介苗导致潜伏感染预期途床验证目前缺乏效方法目前申请申报该类试剂预期途基结核病辅助诊断指导原针结核病辅助诊断预期途床试验求出较详细建议专家企业讨达成致意见
时指导原明确果申请该类试剂预期途设定结核分枝杆菌感染检测需提供足够床证支持该声称
（四）床试验相关问题
1样入组相关求
针结核病辅助诊断预期途指导原床试验样入组方面做较详细说明申报试剂应选择疑似结核患者进行检测模拟床实际情况床中该类试剂仅肺结核辅助诊断肺外结核辅助诊断指导原单纯肺外结核样例数出低求鉴床实践研究证明肺癌患者类γ干扰素相关癌症规定肺癌患者低样例数考察该类试剂特异性
2床特异性相关求
指导原初稿时申报试剂床特异性做出低75求专家企业反复讨删求原点：第该类试剂已类产品国外批准市法规求选择已市类试剂验证该类试剂检测准确性第二该类试剂床特异性受床试验受试群年龄性区域影响较目前量流行病学调查数支持75声称床特异性法出具体求
三编写单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂
注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
范围
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应（γ干扰素释放试验IGRAs）原理：受结核分枝杆菌抗原刺激致敏T淋巴细胞（T细胞）次遇相抗原时产生γ干扰素IGRAs通检测全血者分离全血外周血单核细胞（PBMC）结核分枝杆菌特异性抗原刺激产生γ干扰素判断受试者否存结核分枝杆菌感染目前国际较成熟IGRAs两种：采酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测全血中致敏T细胞次受结核分枝杆菌特异性抗原刺激释放γ干扰素水二采酶联免疫斑点技术（ELISPOT）方法测定结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单核细胞中够释放γ干扰素效应T细胞数量
述两种检测方法原理类似检测技术操作程序略采结核分枝杆菌特异性抗原存结核分枝杆菌复合群中卡介苗数非结核分枝杆菌中缺失
目前结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂指：利免疫学检测技术ELISAELISPOT技术等结核分枝杆菌特异抗原刺激T细胞产生γ干扰素检测靶标静脉全血中结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应进行体外检测试剂结核分枝杆菌感染检测结核病辅助诊断指导原述容针结核病辅助诊断预期途预期途结核分枝杆菌感染检测申报试剂申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
指导原技术求基ELISAELISPOT方法建立方法部分求完全适文述技术指标够全面申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证需阐述适理验证代方法科学合理性指导原适进行首次注册申报相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价国外类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重预期途方法学检验原理结核分枝杆菌特异性刺激抗原低检测限等方面写明申报试剂目前市场已获批准类产品间区刺激抗原新发现结核分枝杆菌特异性抗原应详细述提高该类试剂灵敏度特异性科学提供充分支持资料
综述资料应符合体外诊断试剂注册理办法（国家食品药品监督理总局令第5号简称办法）关公布体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式公告（国家食品药品监督理总局公告2014年第44号简称44号公告）相关求
（二）原材料研究资料
应提供原材料抗原肽重组抗原抗体阴性阳性标准品（γ干扰素）酶企业参考品等选择源制备程质量分析质量控制标准等研究资料原材料企业生产生产工艺必须相稳定原材料购供应商应提供资料包括：供应商提供质量标准出厂检定报告性指标证书该原材料货质量检验资料
企业参考品：申请应提供企业参考品详细源制备确定等资料
采ELISPOT方法申报试剂企业参考品少应包括：阴性参考品阳性参考品精密度参考品中阳性参考品建议采结核病患者（菌阴菌阳）全血阴性参考品建议采健康易混淆疾病患者全血精密度参考品建议采结核病患者全血申请采全血外样形式作企业参考品请提交申请采企业参考品组成源稳定性延续性性控性等详细理试验数
采ELISA方法申报试剂企业参考品少应包括：阴性参考品阳性参考品低检测限参考品线性参考品准确度参考品精密度参考品等中阴性参考品阳性参考品精密度参考品设置参考ELISPOT方法申报试剂相关求低检测限参考品准确度参考品线性参考品考察ELISA部分性采含γ干扰素溶液（建议采血浆作基质溶液）
阴性阳性：申报试剂质控体系通设置阳性阴性实现申报资料应详细描述种原料选择制备定值程等试验资料指导原技术求基ELISAELISPOT方法建立采述方法学结核细胞类检测试剂建议少设置阳性阴性阳性般采外周血单核细胞非特异性刺激物质控外周血单核细胞功否正常避免产生假阴性阴性控制细胞活化程中产生种子非特异性影响避免产生假阳性
标准品（适）选择质量标准：应详细描述标准品原料源制备纯度浓度（复溶浓度）分子量功活性等确定验证资料
肽重组抗原选择质量标准：应详细描述肽源（种抗原）重组抗原源组成分子量纯度浓度重组抗原毒素含量刺激活性特异性等确定验证资料冻干抗原应设置水分含量质控标准
抗体选择质量标准：应详细描述抗体源纯度浓度分子量刺激免疫原效价功活性等确定验证资料
（三）生产工艺反应体系研究资料
生产工艺包括：配制工作液分装包装等流程图表示应提供生产工艺确定包括试验方法数等
反应体系研究资料应产品说明书中检验方法部分涉基容样量试剂量反应条件等提供确定包括试验方法数等
（四）分析性评估资料
申请应提交申报试剂进行性验证研究资料包括具体试验方法控标准实验数统计分析等结核分枝杆菌细胞免疫反应检测试剂建议着重分析性进行研究
1采ELISA方法申报试剂
检验方法分两部分：（1）结核分枝杆菌特异性抗原全血样培养获含γ干扰素血浆样（2）γ干扰素标准品做标准曲线第（1）步血浆样采ELISA方法进行定量检测基该方法学分析性需述两方面性均进行验证
11低检测限
申请采合理方法确定验证申报试剂低检测限建议采含系列γ干扰素稀释浓度样浓度样进行次重复检测选取测定均OD值2SD0浓度测定均OD值+2SD浓度作低检测限浓度
12线性范围
线性范围确定研究应高值样（采血浆基质采溯源国际校准品方法血浆样中γ干扰素进行定量）进行梯度稀释稀释液应血浆应包含接低检测限界值浓度通评价定范围线性关系确定申报试剂线性范围
13准确度
采方法进行评价：国际标准品偏差分析回收试验者方法学等方法申请根实际情况选择合理方法进行研究
14分析特异性
141交叉反应
交叉反应验证考虑全血身含细胞子全血刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应需进行交叉反应验证细胞子包括：IL1αIL1βIL2IL3IL4IL5IL6IL10IL12TNFαIFNαIFNβ等建议0浓度γ干扰素水中浓度γ干扰素水分进行交叉反应验证
时建议申请采定数量常见分枝杆菌感染患者全血样进行试验评价申报试剂特异性
142干扰物质
应全血样中常见干扰物质进行验证包括：抗凝剂甘油三酯血红蛋白胆红素类风湿子抗核抗体抗线粒体抗体免疫抑制剂等建议采含浓度γ干扰素血浆样分进行干扰物质验证出会γ干扰素检测值产生干扰高干扰物浓度
15精密度
151采全血样进行试验精密度：分采阳性全血样阴性全血样进行少10次重复检测判断检测结果阴阳性次重复检测结果应致
152采含γ干扰素血浆样进行试验精密度：建议γ干扰素低浓度中等浓度2浓度水分进行验证
1521低浓度样：γ干扰素浓度略高试剂盒低检测限（n≥20）
1522中等浓度样：采中等浓度样进行重复检测CV≤15（n≥20）
153申请应设置合理精密度评价周期便批批间操作者间精密度进行综合评价
16阴性参考品符合率
建议选择少15份健康易混淆疾病患者全血样进行试验述健康患者应包括等级结核菌素（PPD）皮试群
17阳性参考品符合率
建议选择少20份结核病患者（少10例菌阳少10例菌阴）全血样进行试验
18标准品溯源资料
γ干扰素具国际标准品建议检测结果量值溯源国际标准品申请应提供国际标准品产品标准品溯源链级赋值资料
2采ELISPOT方法申报试剂
检验方法：结核分枝杆菌特异性抗原分离外周血单核细胞（PBMC）培养活化刺激PBMC分泌γ干扰素微孔板包单克隆抗体捕获酶标记单克隆抗体进行反应显色斑点代表细胞计数斑点少判断否存结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应基该方法学分析性需述方面进行性验证
21分析特异性
211交叉反应
交叉反应验证考虑PBMC刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应需进行交叉反应验证细胞子包括：IL1αIL1βIL2IL3IL4IL5IL6IL10IL12TNFαIFNαIFNβ等建议0浓度γ干扰素水中浓度γ干扰素水分进行交叉反应验证
时建议申请采定数量常见分枝杆菌感染患者全血样进行试验评价申报试剂特异性
212干扰物质
应全血样中常见干扰物质进行验证包括：抗凝剂甘油三酯血红蛋白胆红素类风湿子抗核抗体抗线粒体抗体免疫抑制剂等建议采全血样进行干扰物质验证出产生干扰高干扰物浓度
22精密度
采全血样（包括高斑点数样中等斑点数低斑点数样）分进行精密度评价进行少10次重复试验判断检测结果阴阳性次重复检测结果应致时应计数检测孔斑点数计算CV值CV值应≤25
申请应设置合理精密度评价周期便批批间操作者间精密度进行综合评价
23阴性参考品符合率
建议选择少15份健康易混淆疾病患者全血样进行试验述健康患者应包括等级结核菌素（PPD）皮试群
24阳性参考品符合率
建议选择少20份结核病患者（少10例菌阳少10例菌阴）全血样进行试验
（五）阳性判断值研究资料
类试剂阳性判断值较复杂阳性判断值应产品说明书中检验结果解释部分容申请应产品说明书中检验结果解释部分涉数值提供详细确定验证资料该部分资料应采床样进行试验请注意床样选择应申报产品声称预期途相致建议采受试者工作特征（ROC）曲线方式进行确定
（六）稳定性研究资料
稳定性包括申报试剂稳定性样稳定性（包括全血样稳定性血浆样稳定性）前者包括实时稳定性（效期）开封稳定性冻融次数限制（适）等稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床试验
床试验总体求床试验资料容应符合办法44号公告体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）规定仅结合结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂具体特点床试验中应重点关注容进行阐述
1床试验机构选择
申请应选定少3家（含3家）床试验机构法规求开展床试验
2试剂选择
预期结核病辅助诊断申报试剂申请选择境已批准市床普遍认质量较类产品作试剂采试验体外诊断试剂（称申报试剂）试剂进行较研究试验证明品已市产品等效
3床试验象选择
预期结核病辅助诊断申报产品床试验象应满足：（1）床试验总病例少1000例（2）具结核病相关体征症状疑似结核病患者（3）终床诊断结核病患者病例中应包括肺结核患者肺外结核患者涂片阴性肺结核患者占肺结核患者例应50单纯肺外结核患者少30例（4）非结核呼吸道疾病患者易混淆疾病患者病例（终床诊断结核病）包括肺炎肺癌支气炎支气扩张非结核分枝杆菌病慢阻肺等中肺癌少50例（5）述群应包括PPD阴性阳性群选择PPD阴性群进行床试验（6）床试验机构样量样分布应相均衡
全血样冻融床试验应采新鲜样样采集保存等应满足申报试剂试剂说明书相关求
4床试验方法床原始数统计分析
41分申报试剂试剂说明书入组床样进行检测记录结果
42床报告中应明确：总样例数床诊断肺结核患者总例数说明涂片阴性涂片阳性肺结核患者例数肺外结核患者例数说明类肺外结核患者例数非结核呼吸道疾病患者易混淆疾病样例数详细说明类非结核疾病患者例数
43床原始数应列表方式表示包括病例样年龄性床诊断结果申报试剂结果试剂结果等
44床试验数统计应选择合适统计方法受试者工作特征（ROC）曲线分析阴性阳性符合率等常选择四格表形式总结两种试剂定性检测结果定性结果进行四格表卡方kappa检验验证两种试剂定性结果致性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异
45申报试剂涂片阴性肺结核患者肺外结核患者均应定检出率
5结果差异样验证
两种试剂检测结果致样应采床公认较第三方试剂合理方法进行复核时结合患者床病情差异原结果进行分析
6床试验方案
床试验机构方案设置应保持致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动整试验程应床试验机构实验室实验室技术员操作完成申请技术员进行必技术指导外意干涉试验进程尤数收集程
试验方案中应确定严格样入选排标准已入选样排出床试验应记录案明确说明原床试验机构选试剂应保持致便进行合理统计学分析
7问题
果申报试剂预期途结核分枝杆菌感染检测申请应法规求设置合理方法选择合适预期适群进行床试验
（八）产品技术求
产品技术求应符合办法医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）相关规定容包含产品性指标检验方法附录中明确原材料生产工艺半成品检定求
采ELISA方法申报试剂产品技术求性指标少应包括：外观阴性参考品符合率阳性参考品符合率线性准确度低检测限精密度等采ELISPOT方法申报试剂产品技术求性指标少应包括：外观阴性参考品符合率阳性参考品符合率精密度
（九）产品注册检验报告
根办法求首次申请注册第三类产品应具相应医疗器械检验资质承检范围医疗器械检验机构进行连续三生产批次样品注册检测
（十）产品说明书
产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求境外试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致结合体外诊断试剂说明书编写指导原求面结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂说明书重点容进行说明
1预期途
应少包括部分容：
11产品体外定性检测新鲜外周静脉抗凝血中结核分枝杆菌特异性T细胞免疫反应结核分枝杆菌感染检测者结核病辅助诊断（根床试验等研究资料确认预期途）
12说明预期途相关床适应症背景情况说明相关床实验室诊断方法
13测群特征介绍：具结核病相关体征症状疑似结核病患者域求年龄限制（）等
2组成成分
21说明试剂盒包含组分名称数量例浓度等信息说明批号试剂盒中组分否互换
22试剂盒中包含该项检测必须组分应列出相关试剂耗材名称货号相关信息
23申报试剂注册单元应包含真空采血真空采血应相应法规申报注册
3检验原理
31说明试剂盒刺激抗原抗原肽（名称否肽抗原重组抗原）抗原抗原肽卡介苗非结核分枝杆菌中存情况
32试剂盒技术原理详细介绍建议结合适图示进行说明
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性开封稳定性复融稳定性冻融次数求（适）等应明确具体储存条件效期
5样求
重点明确容：
51样采集：明确抗凝剂
52样保存：
521采ELISPOT方法申报试剂应明确：全血样进行外周血单核细胞分离前保存温度时间分离外周血单核细胞抗原孵育培养前保存温度时间
522采ELISA方法申报试剂应明确：全血样抗原孵育培养前保存温度时间
6检验方法
该类产品检测步骤繁应详细描述全血采集开始结果判读前步骤明确注意事项重点关注问题：采ELISPOT方法申报试剂明确培养时外周血单核细胞数量培养基类型
7检验结果解释
结合阳性阴性样检测结果列表形式出现结果组合相应解释进行详述明确灰区结果处理方式
8检验方法局限性
81试剂盒检测结果仅供床参考患者床诊治应结合症状体征病史实验室检查治疗反应等情况综合考虑
82关假阴性结果性分析：某免疫功受损患者导致假阴性
83关假阳性结果性分析：分枝杆菌否存交叉反应
9产品性指标
91低检测限（适）：说明试剂低检出浓度简单介绍低检测限试验方法结果
92企业阴阳性参考品检测符合情况：简单介绍阴阳性参考品组成符合率结果等信息
93精密度：明确精密度参考品组成结果
94分析特异性
941交叉反应：明确产生交叉反应细胞子验证情况
942干扰物质：明确样中常见干扰物质检测结果影响
95试验研究（）：简介绍试剂（方法）信息采统计学方法统计分析结果
96境外（适）境床试验数总结
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册技术审查指导原编制说明
编制背景
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂指利免疫学检测技术ELISAELISPOT技术等结核分枝杆菌特异抗原刺激T细胞产生γ干扰素检测靶标静脉全血中结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应进行体外检测试剂结核分枝杆菌感染检测结核病辅助诊断
指导原述容针结核病辅助诊断预期途预期途结核分枝杆菌感染检测申报试剂申请根产品特性适部分进行修订补充评价验证
二重点问题说明
（）企业参考品组成样类型
目前该类试剂采全血样作检测样类型涉方法学包括：ELISPOTELISA针企业参考品样类型考虑全血样冻存性该类试剂质控关键点指导原建议：申请采全血外样形式作企业参考品应提交申请采企业参考品组成源稳定性延续性性控性等详细理试验数
针企业参考品组成ELISPOT方法全血细胞培养直接固体基质表面形成斑点计数斑点判断结果理计数斑点实践时难保证获取全血样刚形成斑点采该方法学试剂仅需设置阴性参考品阳性参考品精密度参考品ELISA方法全血培养吸出血浆清检测清中干扰素含量采该方法学类试剂需设置培养阶段干扰素ELISA检测阶段参考品包括：阴性参考品阳性参考品线性参考品低检测限参考品精密度参考品等
（二）分析性评估相关问题
1低检测限求方法
采ELISPOT方法试剂理计数斑点理低检测限1斑点现实中通试验证明该类试剂低检测限1斑点具困难难实现参考美国FDA已批准类试剂求讨ELISPOT方法学类试剂需进行低检测限验证
采ELISA方法试剂低检测限检测血浆样中干扰素低含量指导原建议申请根研发台设置科学合理方法进行低检测限试验
2精密度求方法
采ELISPOT方法试剂精密度必须采全血进行试验方模拟整检测程讨日间精密度时企业相关专家均提出全血样法冻存法然天进行日间精密度研究时现认知水科学合理代方法进行日间精密度研究类试剂做日间精密度求
采ELISA方法试剂精密度仅需考察全血培养阶段精密度需考察ELISA检测部分干扰素含量检测精密度前者参考ELISPOT方法相关求方法者参考常见ELISA方法检测试剂求方法
3交叉反应求方法
采ELISPOT方法ELISA方法试剂结果判读方式存差异检验原理均采特异性γ干扰素抗体检测T细胞刺激活化分泌γ干扰素类试剂交叉反应性考虑全血身含细胞子全血刺激培养程中产生细胞子申报试剂γ干扰素抗体否存交叉反应
果全血样培养程中加入产生交叉反应细胞子势必会影响T细胞培养程中功活性终影响T细胞分泌γ干扰素力影响结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测该类试剂采种方法交叉反应研究采血浆基质检测细胞子γ干扰素抗体交叉反应性
（三）产品预期途
该类试剂检测原理检测结核分枝杆菌感染包括活动性结核感染（结核病）潜伏感染潜伏感染诊断全世界均金标准中国出生接种卡介苗导致潜伏感染预期途床验证目前缺乏效方法目前申请申报该类试剂预期途基结核病辅助诊断指导原针结核病辅助诊断预期途床试验求出较详细建议专家企业讨达成致意见
时指导原明确果申请该类试剂预期途设定结核分枝杆菌感染检测需提供足够床证支持该声称
（四）床试验相关问题
1样入组相关求
针结核病辅助诊断预期途指导原床试验样入组方面做较详细说明申报试剂应选择疑似结核患者进行检测模拟床实际情况床中该类试剂仅肺结核辅助诊断肺外结核辅助诊断指导原单纯肺外结核样例数出低求鉴床实践研究证明肺癌患者类γ干扰素相关癌症规定肺癌患者低样例数考察该类试剂特异性
2床特异性相关求
指导原初稿时申报试剂床特异性做出低75求专家企业反复讨删求原点：第该类试剂已类产品国外批准市法规求选择已市类试剂验证该类试剂检测准确性第二该类试剂床特异性受床试验受试群年龄性区域影响较目前量流行病学调查数支持75声称床特异性法出具体求
三编写单位
国家食品药品监督理总局医疗器械技术审评中心
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容，不代表《香当网》观点或立场，请自行判断内容的真实性和可靠性！
该内容是文档的文本内容，更好的格式请下载文档
