食品中硼酸快速检测
姜黄素色法
(KJ201909)
1 范围
方法规定食品中硼酸姜黄素色快速检测方法
方法适粮食制品淀粉淀粉制品糕点豆制品速冻食品(速冻面米食品肉丸蔬菜丸)中硼酸快速测定
2 原理
方法采姜黄素色法原理通超声辅助水提取样品中硼酸乙基二醇三氯甲烷溶液样品中硼酸进行快速富集萃取利硫酸姜黄素混合生成质子化姜黄硼酸反应生成红色产物溶液颜色深浅样品中硼酸含量成正相关通色阶卡进行目视色确定样品中硼酸含量
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT6682规定二级水
31 试剂
311 硫酸
312 水乙醇
313 亚铁氰化钾
314 乙酸锌
315 姜黄素(CAS458377)纯度≥ 99
316 冰乙酸
317 2乙基13二醇(色谱纯)
318 三氯甲烷(色谱纯)
319 硫酸溶液(1+1):取等体积硫酸(311)水硫酸缓慢加入水中玻璃棒断搅拌冷装入塑料容器中
3110 亚铁氰化钾溶液:称取106 g亚铁氰化钾(313)水溶解稀释100 mL
3111 乙酸锌溶液:称取220 g乙酸锌(314)水溶解稀释100 mL
3112 2乙基13二醇三氯甲烷溶液(EHDCHCl3溶液):称取2乙基13二醇(317) 106g三氯甲烷(318)溶解稀释100 mL溶液保存塑料容器中
3113 姜黄冰乙酸溶液:称取姜黄素(315)40 mg溶100 mL冰乙酸(316)中溶液保存塑料容器中该溶液需新制
32 参考物质
硼酸参考物质中文名称英文名称CAS号分子式相分子质量见表1
表1 硼酸参考物质中文名称英文名称CAS号分子式相分子质量
中午名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
硼酸
Boric Acid
10043353
H3BO3
618
33 标准溶液配制
331 硼酸标准储备液(1000 μgmL):准确称取硫酸干燥器中干燥5 h硼酸标准品适量水溶解配制成1000 μgmL标准储备液保存塑料容器中
332 硼酸标准溶液(100 μgmL):取硼酸标准储备液100 mL加水定容100 mL保存塑料容器中配制溶液0℃~4℃冰箱中储存3月
34 材料
硼酸快速检测试剂盒需阴凉干燥避光条件保存
4 仪器设备
41 电子天:感量001 g
42 样品捣碎机
43 超声仪
44 离心机:转速≥4000 rmin
45 氮气吹干仪空气吹干仪:温度控制≥60℃
46 涡旋振荡器
47 移液器:200 µL1 mL10 mL
5 分析步骤
51 试样制备
取适量样品充分粉碎混匀
52 试样提取
准确称取混合均匀试样2 g(精确01 g)置50 mL离心中准确加水7 mL加入硫酸溶液(319)2 mL涡旋振荡提取1min超声提取15 min期间振摇2~3次加入05mL亚铁氰化钾溶液(3110)05 mL乙酸锌溶液(3111)混匀4000 rmin离心5 min(离心效果佳适提高离心转速)准确吸取10 mL清液20 mL离心中离心中加入EHDCHCl3溶液(3112)05 mL颠倒振摇15~20次静置分层(乳化现象低速离心)层溶液干净取层液体100 μL20 mL离心中加入400 μL姜黄素冰乙酸溶液(3113)加入20 μL硫酸溶液(319)60℃~70℃水浴中氮气(空气)吹干加入1 mL水乙醇振摇残渣全部溶解测液
注:粉丝粉条等干基样品加入水硫酸溶液需浸泡15 min进行续处理
53 测定步骤
测液标准色阶卡目视色15 min判读结果需进行行试验两次测定结果应致显色结果肉眼辨识差异
注:整试验避免阳光直射方操作
54 质控试验
批样品应时进行空白试验质控样品试验(加标质控试验)色阶卡质控试验时检测结果进行控制
541 空白试验
称取空白样品51~53步骤样品法操作
542 质控样品试验(加标质控试验)
5421 质控样品
硼酸质控样品:采典型样品基质相似样品基质模拟实际生产工艺生产含定量硼酸(考虑基质底硼酸量)稳定保存样品样品需参方法确认质控样品中硼酸含量
5422 加标质控样品
硼酸加标质控样品:准确称取空白试样2 g(精确01 g)加入适量硼酸标准溶液(1000 µgmL 100 µgmL)(33)基质样品中硼酸含量5421相
质控样品(加标质控样品)5152步骤样品法操作
6 结果判定求
观察测液颜色标准色阶卡较判读样品中硼酸含量颜色浅检测限(25 mgkg)阴性样品颜色深检测限根颜色深浅进行判读色阶卡见图1
图1 硼酸色阶卡
质控试验求:空白试验测定结果应阴性质控样品试验测定结果应标示量值允差范围加标质控试验测定结果应加标量相符
7 结
色阶卡目视判读存定误差量避免出现假阴性结果读数时遵循高低原
8 性指标
81 检测限
25mgkg
82 灵敏度
灵敏度应≥99
83 特异性
特异性应≥85
84 假阴性率
假阴性率应≤1
85 假阳性率
假阳性率应≤15
注:性指标计算方法见附录A
9
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时作限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标色阶卡应确保试剂盒保质期出现褪色变色情况
检测结果检测限需进行研判采参方法确证
方法参方法GB 50092752016食品安全国家标准 食品中硼酸测定
附录A
快速检测方法性指标计算表
表A1 性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N12
N2N21+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异(х2)
c2(|N12N21|1)2(N12+N21)
度(df)1
灵敏度(p+)
p+N11N1
特异性(p)
pN22N2
假阴性率(pf)
pfN12N1100灵敏度
假阳性率(pf+)
pf+N21N2100特异性
相准确度c
(N11+N22)(N1+N2)
注:
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果确认方法时结果≥25mgkg时判定阳性(仅计算性指标)
c方法规定:计算灵敏度假阴性率阳性样品参方法检验结果范围应25~10mgkg间
N:特定单元结果数第标指行第二标指列例:N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
d方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位:陕西省食品药品监督检验研究院
验证单位:江南学四川省食品药品检验检测院湖北省食品质量安全监督检验研究院
方法起草:李涛 林芳 袁磊 乔蓉霞 孙秀兰 王欣 周陶鸿
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