医学分子生物学资料总结doc


    医学分子生物学资料结
    1质粒——细菌细胞携带染色体外DNA分子价闭合环状DNA分子独立进行复制质粒宿细胞够完成复制
    2基——指贮存功蛋白质肽链RNA序列表达信息需全部核苷酸序列核酸分子中贮存遗传信息遗传单位
    3癌基——细胞控制细胞生长分化基具潜诱导细胞恶性转化特性结构异常表达异常引起细胞癌变
    4基克隆——指生物体遗传信息(基片段)转入生物体进行性繁殖群完全相基片段称DNA克隆
    5抑癌基——指存正常细胞类抑制细胞生长具潜抑癌作基类基发生突变缺失失活时引起细胞恶性转化导致肿瘤发生
    6基诊断——DNARNA诊断材料通检查基存缺陷表达异常体状态疾病作出诊断方法程
    7家基——生命程必需生物体细胞中持续表达基较少受环境素影响表达方式组成性基表达
    8klenow片段——称DNA聚合酶1片段DNA聚合酶I枯草杆菌蛋白酶裂解产生片段保留5′→3′聚合酶活性3′→5′外切酶活性外失5′→3′外切酶活性具3′→5′外切酶活性保证DNA复制准确性DNA合成程中错误配碱基正确核苷酸接
    9核蛋白体——系tRNA蛋白质结合生成种复合体蛋白质生物合成场
    10限制性切核酸酶——识DNA特异序列识位点附切割双链DNA类切核酸酶基克隆中重工具酶通常说限制酶指2型酶原核细胞中提取数限制性切酶错位切割双链DNA产生粘性末端部分酶称轴切割DNA产生端
    11Tm值——DNA变性相窄温度范围完成范围紫外吸收值达值50时温度称DNA解链温度称融解温度(Tm)G+C含量成正双链DNA变性半需温度DNA融解温度
    12DNA甲基化——指DNA级结构中碱基通加甲基修饰作身DNA产生保护作
    13原位杂交——核酸保持细胞组织切片中适方法处理细胞组织标记核酸探针细胞组织中核酸进行杂交方法
    14DNA微陈列——系直接量DNA探针显微印方式序固化支持物表面组成微陈列(基芯片)称DNA微陈列
    15序作元件——指结构基表达调控相关基调控蛋白异性识结合DNA序列抱括启动子游启动子元件增强子加尾信号反应元件
    16.转位子—指够DNA分子2DNA分子间移动DNA片段
    17基治疗指通特定靶细胞中表达该细胞表达基采特定方式关闭抑制异常表达基达治疗疾病目治疗方法

    二综合容
    1DNA结构性质特点
    ①级结构指DNA分子中核苷酸排列序二级结构指两条DNA单链形成双螺旋结构三股螺旋结构四股螺旋结构三级结构指双链DNA进步扭曲盘旋形成超螺旋结构②DNA级结构基特点:4种脱氧核糖核苷酸3′5′—磷酸二酯键相连形成长链链中脱氧核糖磷酸相组成DNA碱基腺嘌呤(A)鸟嘌呤(G)胞嘧啶(C)胸腺嘧啶(T)③DNA两条单链结合起形成双链分子两条单链ATGC千变万化排列组合形成数生物遗传信息储存DNA分子中④DNA分子携带两类遗传信息功活性DNA序列携带信息调控信息⑤DNA二级结构指DNA双螺旋结构特点:脱氧核糖磷酸交排列构成DNA链两条脱氧核苷酸链反行排列条5′→3′方条3′→5′方右手方盘绕成双螺旋构型A配TG配C⑥生物体闭环DNA超螺旋形式存细菌质粒病毒线粒体DNA等
    2RNA结构功特点
    ①4种基核苷酸3′5′磷酸二酯键连接成长链碱基中没T尿嘧啶(U)②分mRNA(信RNA)tRNA(转RNA转运氨基酸)核蛋白体RNA(rRNA)mRNA结构特点:稳定代谢活跃更新迅速寿命短原核生物mRNA具操子结构反子mRNA5′端帽子结构3′端般聚A尾巴没修饰碱基真核mRNA5′端帽子结构3′端聚腺苷酸尾巴分子中修饰碱基甲基化编码区非编码区tRNA结构特点作:作:蛋白质合成程转运氨基酸参蛋白质翻译级结构含稀碱基DHU3′端3样核苷酸序列(CCA)序列序列tRNA结合转运安基酸生成氨酰tRNA必需5′端G具TΨC二级结构三叶草形三级结构倒L形 CrRNA核蛋白体RNA:细胞含量丰富RNA约占细胞总RNA80参组成核蛋白体作蛋白质生物合成场原核生物核糖体沉降系数70S50S30S两亚基组成30S亚基含16SrRNA21种蛋白质50S亚基含23S5SrRNA34种蛋白质真核生物细胞核糖体沉降系数80S亚基组成40S亚基含18SrRNA30种蛋白质60S亚基含3种rRNA(28S58S5S)约45种蛋白质④hnRNA核均RNA真核生物转录生成mRNA前体⑤SnRNA分子核RNA单独存常种特异蛋白质结合起形成分子核核蛋白颗粒mRNA剪接中起重作⑥反义RNA称调节RNA封闭RNA
    3参蛋白质合成氨基酸特异氨基酰tRNA合成酶催化相应tRNA结合成氨基酰—tRNA真核生物起始tRNA结合氨基酸蛋氨酸结合形成MettRNAimet翻译起始时首先40S核糖体亚基结合形成复合物原核生物起始氨基酸甲酰化蛋氨酸结合形成fMettRNAffmet导致DNA变性常方法热变性碱变性化学试剂变性DNA变性结果:粘性降低密度增加A260紫外吸收值增加
    4蛋白质结构功特点
    ①蛋白质称功分子根功分结构蛋白活性蛋白信息蛋白蛋白质级结构指蛋白质肽链中氨基酸排列序蛋白质级结构发生改变蛋白质功发生改变严重时导致疾病发生②基突变导致蛋白质级结构改变表现出生理功异常机体出现病态现象称分子病③蛋白质二级结构单元(形式)a螺旋β折叠转角规卷曲④级结构化学键肽键二硫键二级结构化学键氢键三级结构疏水作离子键氢键范华力等四级结构结合力疏水作氢键离子键
    5端粒特点功:特点:位真核生物染色体末端端粒酶催化端粒DNA延长决定细胞寿命中起重作含短高度重复序列功:保护线性DNA完整复制保护染色体末端决定细胞寿命
    6DNA聚合酶(DNApol)
    ①作催化DNA合成活性需Mg2+存肠杆菌DNA聚合酶IIIII3种(原核生物DNA聚合酶)②DNApolI功:a聚合作DNA链5′→3′方延伸b3′→5′外切酶活性DNA链3′端开始3′→5′进行水解反应产生5′单核苷酸纠正复制程中错误保证DNA复制正确性具校功C5′→3′外切酶活性参RNA生物切填补冈崎片段间空隙DNA损伤修复③DNApolII:具5′→3′DNA聚合酶活性3′→5′外切核酸酶活性参DNA损伤应急状态修复④DNApolII:α亚基具催化合成DNA功ε亚基具3′→5′外切酶活性编辑校功θ装配必需原核生物复制延长中真正起催化作酶DNA聚合酶性质:需DNA模板RNADNA作引物ATPMg2+参dNTP作底物DNA合成方5′→3′反应特点:新生链延伸方5'→3'半保留方式合成子代DNA双链反应需DNA引物具酶活性:5'→3'聚合酶活性3'→5'核酸外切酶活性
    7RNA聚合酶
    ①RNA聚合酶称赖DNARNA聚合酶DNA模板四种核苷三磷酸底物碱基配原5′→3′方延长RNA链②原核生物RNA聚合酶种四种亚基α2ββ'σ组成五聚体蛋白质称全酶掉σ亚基剩α2ββ’称核心酶活细胞转录起始需全酶核心酶负责催化RNA链延伸 ③真核生物RNA聚合酶三种RNA聚合酶IIIIIIRNA聚合酶I定位核仁转录58S18S28SrRNA基酶II定位核浆转录编码蛋白质基转录产生mRNA酶III定位核浆转录tRNA5SrRNA基④RNA聚合酶催化聚合反应时需Mg2+Mn2+存3’→5’外切酶海性校功
    8密码子分起始密码终止密码起始密码AUG终止密码UAAUAGUGA64种密码作原核生物起始密码:AUGGUGUUG
    9遗传密码具特点:
    A连续性:两密码子间没核苷酸加分隔密码标点B方性:mRNA中密码子排列方性起始密码子总位编码区5’末端终止密码子位3’末端密码子三核苷酸5’→3’方阅读倒读C简性:指遗传密码中色氨酸甲硫氨酸仅密码子外余氨基酸2~6密码子编码D通性:简单病毒原核生物直类套遗传密码E摆动性:翻译程中氨基酸正确加入mRNA密码子tRNA反密码子相辩认密码子反密码子配辩认时时完全遵守碱基互补规律严格互补辩认配种现象称摆动
    10转录程特点
    ①转录DNA模板4种NTP原料碱基配规律DNA指导RNA聚合酶催化合成RNA程程包括:起始延长终止三阶段②转录特点:A基组说转录发生部分基基转录受相独立控制B转录称C转录时需引物RNA链合成连续D转录单性RNA生物合成时方进行聚合赖模板DNA链方3’→5’RNA链合成方5’→3’E特定起始终止位点参转录终止素ρ子转录产物3'端发夹结构转录终止修饰点AATAAA+GT序列
    11原核生物DNA复制程特点
    ①复制程包括:起始(复制起始位点识解螺旋酶解开DNA双链引发体合成RNA引物)延伸(DNA聚合酶催化聚合反应连续合成前导链连续合成链)终止(RNA引物冈崎片段连接特殊终止结构区域停止)②复制特点:半保留复制半连续复制聚合反应需模板底物DNA聚合酶酶蛋白质
    12真核生物染色体DNA复制特点:(原核相反)
    ①复制起始点②复制叉移动速度慢③复制方数双④RNA引物短⑤冈崎片段短⑥连续复制
    13翻译程特点
    ①起始:形成翻译起始复合物②延长:指加氨基酸进位成肽转位肽链N端C端延长③终止(mRNA分子中终止密码子出现肽链合成停止肽链肽酰tRNA中释出mRNA核蛋白体等分离)蛋白制合成耗程生成肽键消耗2高磷酸键氨基酸活化消耗2高磷酸键整程4高磷酸键14原核生物mRNA加工:转录产物mRNA分子需加工tRNA结构基初级转录产物需加工成具生物功成熟分子tRNA前体加工包括剪切作(切余核苷酸)添加修复3'端CCA序列某碱基化学修饰(成熟tRNA分子中稀碱基)
    15翻译加工修饰:
    ①加工包括:A掉N甲酰基N蛋氨酸N端序列B氨基酸修饰(羟化磷酸化形成SS等)C蛋白水解修饰D分子伴侣蛋白质二硫键异构酶肽脯氨酰反异构酶辅助折叠成空间构象E亚基聚合F辅基结合(糖基化等)中ABC属级结构修饰DEF属空间结构修饰②肽链形成氨基酸残基进行种价修饰包括磷酸化羟基化ADP核糖基化形成胱氨酸乙酰化③翻译程涉种分子间相互作纳:RNA蛋白质相互作蛋白质蛋白质相互作RNARNA相互作④参翻译终止蛋白质子包括:RFPRIF⑤广义核蛋白体循环包括:翻译起始进位成肽转位翻译终止
    16真核生物mRNA加工包括:
    ①5′端加帽(加帽酶催化5′端加入7甲苷乌苷酸形成帽子结构m7GpppmNP) ②3′端加入Poly(A)尾(A组蛋白成熟mRNA需加polyA尾B加尾信号包括AAUAAA富含GU序列C加尾需模板D剪切程需种蛋白质子辅助)③mRNA前体剪接(剪接加工含子序列外显子序列连接成成熟功mRNA分子含子两端结构通常5′GU……AG3′选择性剪接作机制包括A剪接位点B选择外显子C反式剪接D启动子E腺苷酸化位点)④RNA编辑(发生转录水改编mRNA序列C→UA→G增加遗传信息容量)
    17基表达指生物基组中结构基携带遗传信息转录翻译等系列程合成特定蛋白质进发挥特定生物学功生物学效应全程非基表达程产生蛋白质tRNArRNA编码基转录生成RNA程属基表达基表达受级水调控具阶段特异性(时间特异性)组织特异性(空间特异性)基表达分阶段:基活化转录转录加工翻译翻译加工等产物RNA功蛋白质
    18原核生物基表达调控环节转录水次翻译水原核生物基操子形式存转录水调控涉启动子σ子(RNA聚合酶结合)阻遏蛋白(负调控)正调控蛋白倒位蛋白RNA聚合酶抑制物衰减子等种素翻译水调控涉SD序列(位AUG前)mRNA稳定性(稳定5′端3′端发夹结构保护酶水解mRNA5′端核糖体结合明显提高稳定性)翻译产物分子RNA调控作
    19真核生物基表达调控环节较DNA水通染色体丢失基扩增基重排DNA甲基化染色体结构改变影响基表达转录水通反式作子作调控转录子TATA盒结合RNA聚合酶转录子DNA复合物结合转录起始复合物形成转录水通RNA修饰剪接mRNA运输控制影响基表达影响翻译水素影响起始翻译阻遏蛋白5′AUG5′端非编码区长度mRNA稳定性调节分子RNA等真核基调控中重环节基转录真核生物基表达需转录子启动子沉默子增强子
    20反式作子:指直接间接辨认结合转录游区段DNA蛋白质特点包括三功结构域(DNA识结合域转录活性域结合蛋白结合域)识结合游调控区式作元件基表达正性负性调控作活性调节方式:表达式调节价修饰配体结合蛋白质蛋白质相互作作方式成环扭曲滑动OozingDNA结构域包括:锌指螺旋—转角—螺旋亮氨酸拉链螺旋—环—螺旋转录激活域富含:酸性氨基酸脯氨酸谷氨酰胺
    21参DNA复制(合成)物质包括:
    ①模板(解开成单链DNA母链)②引物(提供3’—OH未端dNTP次聚合)③底物(dATPdGTPdCTPdTTP)④聚合酶(赖DNADNA聚合酶(DNA—pol))⑤酶蛋白质子DNA复制基程包括:①DNA双链解开②RNA引物合成③DNA链延长④切引物填补缺口连接相邻DNA片段⑤切修复错配碱基
    22结构基突变类型包括点突变缺失插入倒位四类遗传密码改变分错义突变义突变义突变移码突变
    23癌基恶性激活机制包括:①原癌基点突变②原癌基获外源启动子激活③原癌基甲基化程度降低激活④基易位重排原癌基激活
    24逆转录病毒载体基治疗中常载体造血肝细胞基治疗中重靶细胞禁生殖细胞基转移技术(基治疗技术)包括生物学方法非生物学方法生物学方法逆转录病毒载体腺病毒载体腺相关病毒载体单纯疱疹病毒载体非生物学方法:脂质体直接注射受体介导基转移技术DNA—磷酸钙沉淀法电穿孔法显微注射颗粒轰击
    25DNA甲基化特点细胞许代分裂保持稳定真核生物DNA中甲基化均发生二核苷酸序列5’—mCG—3’
    26基包括序列:编码蛋白质肽链RNA核酸序列保证转录必需调控序列位编码区5’端游非编码序列含子位编码区3'端游非编码序列
    27启动子RNA聚合酶特异性识结合DNA序列启动子具方性真核生物启动子必须转录子结合DNA聚合酶识结合真核生物启动子元件TATA盖TATA盒核心序列TATA(AT)A(AT)位转录起始点游—25bp处启动子决定转录方模板链转录效率游启动子元件包括:CAAT盒CACA盒GC盒
    28逆转录:指RNA模板利宿细胞中4种dNTP原料引物3'端5'→3'方合成RNA互补DNA链程程中心法方相反称逆转录
    29原癌基产物类型细胞定位
    ①生长子类似物细胞分泌Csis家族 (sis编码血板源生长子表达产物PDGF链结构源)②跨膜生长子受体型酪氨酸蛋白激酶erbB表皮细胞生长子(EGF)受体fims巨噬细胞集落刺激子受体定位质膜③细胞信号传导分子定位胞夜包括A低分子量G蛋白Hras等基表达产物B胞蛋白激酶(包括膜结合蛋白酪氨酸激酶胞浆丝氨酸苏氨酸蛋白激酶)srcabl④核转录子:mycfos等定位细胞核⑤胞浆调节蛋白crk产物存胞浆中调节蛋白定位胞浆⑥溶性蛋白酪氨酸激酶受体非蛋白激酶受
    30细胞周期调控点
    细胞周期运行受种素调控2调控点称检测点 ①G1S期检测点:酵母中称起点哺乳细胞中称限制点控制细胞进入S期检测点(G1期检测点)cyclinBCDK4CDK6结合cyclinECDK2CDK3结合通磷酸化活化cyclinCDK复合物Rb蛋白磷酸化释放转录子E2F促进DNA复制相关基表达CDK2cyclinAcyclinA1结合促进早S期DNA合成起始 ②G2M期检测点:控制细胞进入M期检测点(G2期检测点)促丝分裂子(MPF)cyclinBCDK1组成启动丝分裂关键子细胞时进入M期取决Cdc2磷酸化状态
    31真核细胞转染基方法:
    ①磷酸钙沉淀法②电穿孔法③脂质体介导基导入法④DEAE葡聚糖法⑤显微注射法
    32DNA损伤类型
    ①碱基糖基破坏②错配③DNA链断裂:电离辐射致DNA损伤形式④DNA变联述DNA损伤导致DNA模板发生碱基置换插入缺失链断裂影响染色体高级结构DNA链中种嘌呤种嘌呤取代嘧啶种嘧啶取代称转换嘌呤嘧呤取代反称颠换转换颠换DNA复制时引起碱基错配导致基突变碱基插入缺失引起移码突变
    33DNA修复机制类型
    ①光修复②切修复③重组修复④SOS修复⑤错配修复
    34基文库筛选方法原理
    (1)根抗药性标志筛选:带某种抗药性标志基转化成功受体菌含该抗生素培养基中生存形成菌落没转化成功受体菌培养基中生长选择阳性菌(2)根菌落呈色反应筛选(互补蓝白筛选):根椐菌落颜色结合插入片段序列测定筛选(3)营养缺陷型标记法(4)核酸分子杂交法:采目基部分互补DNA片段作探针含重组体细菌菌落进行杂交确定重组体中带目基包括原位杂交southern印迹杂交(5)遗传互补法:载体营养代谢标记宿细胞营养代谢缺陷进行互补作筛选重组体标记(6)免疫学方法:果克隆基产物已知菌落噬菌斑中表达相应抗血清单克隆抗体通放射免疫化学发光显色反应进行筛选
    35PCR步骤引物设计基求
    ①PCR步骤:PCR称聚合酶链式反应体外进行DNA复制反应程基程包括:A双链DNA模板加热变性成单链(变性)温度95度左右B低温引物单链DNA互补配(退火)8590度C延伸:四种DNTP底物Mg2+存条件TaqDNA聚合酶适作温度(70~75℃)根碱基互补配原特异结合DNA模板引物3′OH端开始掺入单核苷酸合成新DNA分子②引物设计基求:A引物长度般15~30核苷酸B引物中碱基组成机分布避免出现嘌呤嘧啶碱基堆积现象尤3′端避免连续3GCC引物身应存互补序列避免折叠成发夹结构引物身存连续互补序列般超3bpD两引物间应存互补序列尤应避免3′端互补重叠E引物非特异扩增区序列源性超70引物3′末端连续8碱基扩增区外完全互补序列F引物模板结合时引物5′端修饰
    36乳糖操子正负调节机制
    乳糖操子包含3结构基ZYA(编码β半乳糖苷酶β半乳糖苷通透酶转乙酰基酶)3调控元件(启动子操基CAP结合位点)1调节基(编码阻遏蛋白)乳糖操子转录起始CAP阻遏蛋白两种调控子调控(1)阻遏蛋白负调控:乳糖时阻遏蛋白结合操基妨碍RNA聚合酶结合启动子抑制结构基转录乳糖时生成半乳糖(诱导剂)结合阻遏蛋白阻遏蛋白构象改变变构阻遏蛋白操序列结合阻遏机制解结构基转录基表达③cAMPCAP复合物正调控葡萄糖时cAMP浓度高形成cAMPCAP复合物结合CAP结合位点增强启动子转录活性促进游基表达葡萄糖时cAMP浓度低cAMPCAP复合物形成受阻影响转录活性④正负调控机制相辅相成:cAMPCAP复合物转录必需时阻遏蛋白进步控制转录启动综乳糖操子强表达条件乳糖葡萄糖
    37双脱氧末端终止法DNA测序步骤:双脱氧末端终止法单链双链DNA模板采DNA引物引导新生DNA合成称引物合成法酶促引物合成法步骤:①制备单链模板②模板测序引物结合③掺入法标记反应④延伸终止反应 ⑤变性胶电泳⑥放射显影⑦阅读测序结果
    38常分子生物学技术原理程特点
    ①核酸分子杂交技术:基原理:具互补序列两条单链核酸分子定条件碱基互补配结合重新形成双链程中核酸分子历变性复性变化复性程中分子间键形成断裂等特点:直接检测血清中病毒基组须扩增灵敏度较PCR低杂交体系中已知核酸序列称作探针
    ②聚合酶链反应(PCR):PCR原理根测DNA片段两端核苷酸序列设计工合成两分DNA片段两端互补寡聚核苷酸引物量引物量底物(4种dNTP)DNA聚合酶模板(扩增片段DNA分子)反应体系中高温变性(DNA链解开)低温退火(引物模板结合)适温延伸(新合成DNA片段)三阶段循环周期DNA分子进行扩增特点极强扩增力度高灵敏性高度特异性需微量模板需数时扩增产物量变性复性延伸三步聚循环进行操作简便适广泛出现假阳性
    ③DNA序列测定:DNA序列测定高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术基础建立起包括Sanger双脱氧链末端终止法化学降解法Sanger法基原理:双脱氧核苷酸(ddNTP)DNA合成程中代相应脱氧核苷酸(dNTP)作底物形成3′5′磷酸二酯键导致链延伸终止化学降解法:采化学试剂处理末端放射性标记DNA单链片段造成碱基特异性切割产生组具长度DNA链反应混合物凝胶电泳分子分离放射显影直接读出测DNA核苷酸序
    ④DNA芯片技术:DNA芯片技术种规模集成固相核酸分子杂交量已知碱基序列寡核苷酸片段探针检测样品中核酸序列互补然通定性定量分析出测样品基序列表达信息DNA芯片技术流程包括:芯片设计制备靶基标记(常荧光色素生物素放射性核素标记dNTP)芯片杂交杂交信号检测特点:高通量鉴诊断酶:DNA聚合酶需探针:合成寡核苷酸片段cDNA已克隆基片段双链单链DNARNA肽核酸

    ⑤基克隆技术(重组DNA技术):基克隆指某种目基扩增分离程具体基组DNA片段中分离获某特定基DNA片段通DNA序列扩增形成众拷贝组成DNA拷贝群体程基程:A目基制备栽体选择制备BDNA分子体外连接C外源DNA导入宿细胞D目基筛选鉴定EDNA重组体扩增表达
    39原核生物真核生物转录调控特点较:
    ①两者均涉RNA聚合酶转录调控序列(启动子等)相互作②真核需种转录子辅助原核需③真核正调控原核负调控④真核3种RNA聚合酶负责种类基转录原核1种RNA聚合酶
    40原核生物真核生基表达调控特点较
    ①相点:转录起始基表达调控关键环节②点:A原核基表达调控包括转录翻译水真核基表达调控包括染色质活化转录转录加工翻译翻译加工层次B原核基表达调控负调节真核正调节C原核转录起始需转录子RNA聚合酶直接结合启动子σ子决定基表达特异性真核转录起始需基础特异两类转录子赖DNA蛋白质蛋白质蛋白质相互作调控转录激活D原核基表达调控采操子模型转录出反子RNA实现协调调节真核基转录产物单反子RNA功相关蛋白质协调表达机制更复杂
    41质粒特征:
    ①原核细胞中染色体外价闭合环状DNA分子②独立细胞染色体进行复制赖宿细胞③宿中具相容性具相复制起始位点分配区两种质粒存宿菌④具严格遗传控制系统(复制调控系统分配系统细胞分裂控制系统 位点特异重组系统)⑤携带遗传信息赋予宿细胞特定遗传性状⑥DNA重组技术中载体作克隆载体质粒具特点:分子量较细菌稳定存较高拷贝数具遗传标志具限制酶单切点称克隆位点便外源基插入
    42真核生物基组结构功特点
    ①种真核生物定染色体数目 体细胞般双倍体②真核基组远远原核生物基组具许复制起点③真核基组结构基相关调控区组成转录产物单反子分子mRNA翻译种蛋白质④真核生物分子含量重复序⑤真核生物基组非编码序占90⑥真核基断裂基⑦功相关基构成种基家族⑧真核生物基组中存移动遗传素
    43蛋白质生物合成靶输送程特点:
    蛋白质合成定输送终发挥生物学功部位称靶输送靶输送蛋白质N端特异氨基酸序列称信号序列决定蛋白质靶输送特性重元件通信号序列引导蛋白质胞浆进入质网线粒体叶绿体核靶蛋白质特异信号序列分泌型蛋白合成进入质网加工包装成分泌泡转移融合靶部位分泌出细胞靶输送信号肽胞浆中信号肽识粒子(SRP)识特异结合然通SRP膜接蛋白(DP)识结合携带蛋白质送出细胞线粒体蛋白靶输送导肽种蛋白复合体介导进入基质膜间腔然发分子伴侣HSP70帮助折叠形成功蛋白质细胞核蛋白靶输送通核定位信号核输入受体结合形成核蛋白受体复合物导出核孔核孔复合体结合进入细胞核
    44核酸分子杂交基方法包括:Southern印迹杂交(鉴DNA靶分子杂交测核酸DNA片段)Northern印迹杂交(鉴RNA靶分子测核酸RNA)斑点杂交原位杂交液相杂交
    45DNA复制转录异
    相点:①模板DNA②遵守碱基互补规律③新链合成方5'→3'④催化核苷酸磷酸二酯链连接⑤合成部位细胞核
    点:①复制原材料dNTP转录原料NTP②复制酶类DNA聚合酶转录酶RNA聚合酶③复制需RNA引物转录需引物④复制产物双链DNA转录产物单链RNA⑤复制模板DNA双链(半保留复制)转录模板DNA单链(称转录)⑥复制功传递遗传信息子代 转录表达信息需步聚
    46双脱氧核苷酸末端终止法DNA序列测定中需序试剂:M13载体dNTPDNA聚合酶Iklenow片段逆转录酶TqaDNA聚合酶(耐热DNA聚合酶)修饰T7噬菌菌体DNA聚合酶测序酶20版双脱氧核苷三磷酸(2'3'ddNTP)dNTP类似物放射性标记[a32P]dNTP
    47PCR体系成分
    引物TaqDNA聚合酶dNTP模板核酸缓液
    48DNA聚合酶I作特点:
    ①模板DNA②底物4种脱氧核苷酸(dATPdCTPdGTPdTTP)③Mg2+参④DNA合成方5'→3'⑤具DNA聚合酶活性3'→5'5'→3'核酸外切酶活性5'→3'核酸外切酶活性缺口移法标记DNA探针
    基治疗方法两种:体直接转基称体法细胞介导基治疗称回体法基灭活技术:反义核酸技术核酶技术三链技术干扰RNA技术DNA端粒含TTAGGG重复序列
    49信号肽特点细胞质中信号识颗粒结合SRP受体蛋白质进入质网必需N端段富含蔬水氨基酸序列翻译时引导新生肽链穿质网
    基组文库—采限制酶基组DNA切成片段DNA片段载体分子拼接成重组DNA全部DNA分子引入宿细胞扩增分子克隆混合体基组文库
    50基重组指DNA间价连接分子克隆中克隆指性繁殖DNA基工程中目基源化学合成PCR合成细胞DNA组织DNAcDNA文库


    分子生物学需掌握重点:
    DNARNA蛋白质质粒基端粒聚合酶密码子突变变性概念结构性质特点
    复制转录逆转录翻译加工修饰靶输送程特点
    癌基概念原癌基产物类型细胞定位癌基活化致癌机制
    常分子生物学技术原理步骤酶学特点
    基表调控原理程步骤乳糖操子正负调节机制
    常基诊断基治疗技术
    基克隆基诊断基治疗家基抑癌基Klenow片段核蛋白体限制性切核酸酶类基组计划原位杂交概念
    双脱氧末端终止法DNA测序重组DNA技术步骤
    结构基式作元件启动子遗传密码反式作子氨基酰tRNA基组文库DNA态性转位子探针Tm值DNA微阵列DNA甲基化概念性质
    核酸分子杂交类型PCR步骤引物设计
    DNARNA肽链合成方
    真核细胞转染基方法
    细胞周期调控点
    DNA损伤修复类型机制
    基文库筛选方法原理
    医学分子生物学容
    1医学分子生物学:医学分子生物学分子生物学重分支分子水研究体正常疾病状态生命活动规律门科学
    2基概念功
    基:贮存遗传信息核酸(DNARNA)片段包括编码RNA蛋白质结构基转录调控序列两部分
    基功:1利4种碱基排列荷载遗传信息2通复制遗传信息稳定忠实遗传子代细胞3作基表达模版
    3DNARNA结构功
    功:DNADNA基功基形式荷载遗传信息作基复制转录模板生命遗传物质基础体生命活动信息基础
    RNA1mRNA:携带蛋白质序列信息翻译程作模板指导蛋白质合成
    2tRNA蛋白质生物合成时运输氨基酸
    3核蛋白体:介导rRNAmRNA结合
    rRNA核蛋白体蛋白结合
    rRNAtRNA相互识相互作
    4分子RNA:参mRNA剪接加工
    U3rRNA加工关
    4生物基基结构特点
    原核生物:5’启动子结构基转录终止子3’
    真核生物:1结构基+转录调控序列组成mRNA单反子rRNA基结构反子
    病毒:真核基相般没含子调控序列较少规基
    5原核真核生物基转录调控序列
    (1)原核生物:启动子终止子操原件正调控蛋白结合位点
    ① 启动子:提供转录起始信号身出现RNA产物中中着TATAAT特征序列称普里布诺盒
    ② 终止子:提供RNA合成终止信号含GC富集区组成回文特征序列
    ③ 操元件:阻遏蛋白识结合启动子通常部分重叠
    ④ 正调控蛋白结合位点:加强游结构基转录
    (2)真核生物:启动子游启动子元件增强子加尾信号反应元件等
    ① 启动子:提供转录起始信号启动子身通常转录编码tRNA基启动子分三类:I类启动子富含GC碱基编码rRNA基5SrRNAII类启动子具TATA盒特征结构编码蛋白质(mRNA)基RNA基III类启动子包括A盒B盒C盒编码5SrRNAtRNAU6snRNA
    ② 增强子:式作元件增强邻基转录
    ③ 沉默子:负性调控元件抑制基转录特定序列

    6操子启动子增强子断裂基含子外显子概念
    操子:功相关联数结构基串联起套转录调控序列控制转录构成基表达单位
    启动子:指结构基转录起始位点附段DNA序列结合RNA聚合酶(真核生物需结合蛋白质子)够开放基转录
    增强子:增强真核生物基启动子工作效率式作元件
    断裂基:真核生物结构基中编码区非编码区间隔排列
    含子:指真核生物断裂基初级转录产物中出现成熟RNA中剪接核酸序列
    外显子:指真核生物断裂基成熟RNA中存核酸序列
    7基组定义功
    定义:细胞生物体中套完整单倍体遗传物质总
    功:储存表达遗传信息
    8真核生物基组特点
    真核生物基组庞出结构基结构原核生物相外存量非结构基区域真核细胞基组具结构基呈断裂基形式单反子转录结构基基组中占例非编码区域特点真核细胞基组存量重复序列分高度重复序列中毒重复序列单拷贝低度重复序列等3种真核基组特点存基家族
    9原核生物基组特点
    原核生物基组染色体DNA
    特点:1基组中少重复序列2编码蛋白质结构基单拷贝基编码rRNA基然拷贝基3结构基基组中占 例远远真核基组病毒基组4许结构基基组中操子单位排列
    10质粒基重叠基组假基核酶
    质粒:细菌细胞染色体外DNA分子价闭合环状DNA分子够独立细胞染色质DNA进行复制
    基重叠:DNA片段2种甚3种蛋白质分子部分编码区
    基组:细胞生物体中套完整单倍体遗传物质总
    假基:功基源产生功基产物基
    核酶:指具催化活性RNA作底物RNA参RNA加工成熟
    11DNA复制程特点
    1半保留复制方式保证遗传信息忠实传递2基组DNA固定复制起始点3复制子基复制单位4双复制形成复制泡复制叉5半连续复制方式克服DNA空间结构DNA新链合成制约
    12DNA复制保真性机制
    1DNA聚合酶碱基配选择作保证严格碱基配规律2DNA聚合酶模板识作3DNA聚合酶3’→5’外切活性校正作复制出错时时纠错功
    13真核生物DNA复制基程
    1DNA复制起始2DNA链延伸DNA链延伸DNA聚合酶完成DNA聚合酶催化反应亲代DNA模板4种脱氧核糖核苷三磷酸dATPdGTPdCTPdTTP原料底物句碱基配原RNA引物链3’OH开始逐添加dNTP延伸子代DNA链3复制终止复制终止程包括RNA引物冈崎片段连接等反应终形成两完整子代DNA双链
    14端粒端粒酶
    端粒:位真核生物染色体末端DNA蛋白质组成膨出结构端粒DNA短高度重复序列组成生物重复序列
    端粒酶:反转录酶蛋白质RNA组成身RNA模板反复延伸端粒重复序列
    15DNA损伤素类型
    DNA损伤素包括:电离辐射紫外线碱基类似物碱基修饰剂某化学染料基
    DNA损伤类型碱基糖基破坏错配DNA链断裂DNA交联等
    16DNA损伤修复方式
    DNA损伤修复方式:直接修复切修复重组修复损伤跨越
    17切修复重组修复
    切修复:种酶作先损伤区域切然利互补链模板合成段正确配碱基序修补
    重组修复:重组酶系未受损伤DNA片段移损伤部位提供正确模板进行修复
    18基表达概念
    基表达:指基转录翻译程基表达终产物蛋白质者rRNAtRNA等家基组成性表达调节基表达具时空特异性
    19转录?转录体系?复制转录区?
    转录:DNA模板合成RNA程称转录
    转录体系:1模板:DNA2原料:ATPGTPCTPUTP3RNA聚合酶:原核细胞:全酶α2ββ'σ真核细胞:RNA聚合酶IIIIII
    复制转录点:1)复制模板DNA双链(半保留复制)转录模板DNA单链(称转录)2)复制原料dNTP转录原料NTP3)复制酶类DNA聚合酶转录酶RNA聚合酶4)复制需RNA引物(引物酶合成)转录需引物5)复制产物双链DNA转录产物单链RNA6)复制功传递遗传信息子代转录表达遗传信息需步骤
    20原核真核生物RNA转录基程
    转录起始:转录起始复合体启动子部位形成(形成开放转录复合体) ① 原核生物:RNA聚合酶启动子相互作 ② 真核生物 RNA聚合酶反式作子式作元件相互作
    转录延长:RNA链着转录泡移动延长 ①原核生物:核心酶催化(α2β'βω) ② 真核生物:磷酸化RNA聚合酶催化核体解聚
    转录终止:转录终止受DNA模板终止信号控制 ① 原核生物:a 赖ρ子:ρ子RNA转录产物结合结合ρ子RNA聚合酶发生构象变化RNA聚合酶停顿转录停止b 非赖ρ子:DNA模板终止处特殊碱基序列转录出RNARNA产物形成特殊茎环结构终止转录② 真核生物:转录终止修饰点处切离加尾
    21蛋白质合成体系
    蛋白质合成体系:1模板:mRNA2氨基酸运输:tRNA3肽链合成场:核糖体4蛋白质子:起始延长终止子5原料:20种遗传密码氨基酸
    22原核真核生物翻译基程:
    1起始:形成翻译起始复合物2延长:加氨基酸进位成肽转位3终止:原核细胞:RF1 RF2识终止密码RF3激活转肽酶释放肽链真核细胞:eRF时具述功
    23基表达调控基规律(包括基表达特点方式等)
    1基表达具时空特异性2诱导表达阻遏表达时基表达调控普遍方式3基表达受式作元件反式作元件子调节4蛋白质DNA蛋白质蛋白质相互作基表达调控分子基础5基表达调控层次复杂调节
    24RNA编辑核蛋白体循环分子伴侣
    RNA编辑:指细胞核中初级转录产物hnRNA序列改变C变U者A变G结果基表达产生止种蛋白质增加遗传信息容量
    核蛋白体循环:指氨基酸活化核蛋白体缩合形成肽链程该程包括肽链合成起始肽链延长肽链合成终止释放
    分子伴侣:帮助新生肽链折叠成天然空间构象类保守蛋白质(热休克蛋白)原核细胞真核细胞中广泛存
    25乳糖操子作机制
    (1)乳糖操子包含3结构基(编码β-半乳糖苷酶β-半乳糖苷通透酶转乙酰基酶)3调控元件(启动子操基CAP结合位点)1调节基(编码阻遏蛋白)(2)阻遏蛋白负调控:乳糖时阻遏蛋白结合操基妨碍RNA聚合酶结合启动子抑制结构基转录乳糖时生成位乳糖(诱导剂)结合阻遏蛋白封闭操基结构基转录(3)cAMPCAP复合物正调控:葡萄糖时cAMP浓度高形成cAMPCAP复合物结合CAP结合位点增强启动子转录活性葡萄糖时cAMP浓度低cAMPCAP复合物形成受阻影响转录活性(4)正负调控机制相辅相成cAMPCAP复合物转录必需时阻遏蛋白进步控制转录启动综乳糖操子强表达条件乳糖葡萄糖
    26试述原核生物真核生物基表达调控特点异
    (1)相点 转录起始基表达调控关键环节
    (2)点 1)原核基表达调控包括转录翻译水真核基表达调控包括染色质活化转录转录加工翻译翻译加工层次2)原核基表达调控负调节真核基表达调控正调节3)原核转录起始需转录子RNA聚合酶直接结合启动子σ子决定基表达特异性真核转录起始需基础特异两类转录子赖DNA-蛋白质蛋白质-蛋白质相互作调控转录激活4)原核基表达调控采操子模型转录出反子RNA实现协调调节真核基转录产物单反子RNA功相关蛋白质协调表达机制更复杂
    27细胞通讯信号转导概念
    细胞通讯:生物体种细胞功协调统通细胞间相互识相互作机制实现种机制称细胞通讯
    信号转导:通种分子相互作系列序反应细胞外信息传递细胞种效应分子程
    28化学信号分子分类
    化学信号分子根物理性质分脂溶性化学信号水溶性化学信号两类作距离考虑分激素神递质属旁分泌系统细胞子生长子等三类
    29受体概念分类作特点
    (1)概念:受体位细胞膜细胞特异识生物活性分子相互结合进引起生物学效应蛋白质糖脂
    (2)分类: 膜受体胞受体
    1)膜受体分类:
    ① 离子通道型受体 类受体结合神递质介导离子通道开关闭改变膜通透性迅速准确传递神动作时间短
    ② G蛋白偶联受体 名七次跨膜受体胞浆面第三环鸟苷酸结合蛋白偶联通G蛋白影响腺苷酸环化酶磷脂酶C改变细胞第二信浓度实现跨膜信号传递
    ③ 单次α螺旋跨膜受体 结构具跨膜α螺旋包括受体型酪氨酸蛋白激酶非酪氨酸蛋白激酶型受体
    2)胞受体:反式作子相应配体(例 类固醇激素甲状腺素等)DNA式作元件结合调节基转录
    (3)受体作特点: 高度专性高度亲力饱性逆性特定作模式
    30生物体第二信?包括?
    第二信:配体受体结合靶细胞转导膜外激素信号某分子化合物信息传递程中产生放作称第二信
    包括:环腺苷酸(cAMP)环鸟甘酸(cGMP)甘油二酯(DAG)三磷酸肌醇(IP3)Ca2+
    31信号转导分子游传递信号方式
    ()通改变分子浓度细胞定传递信号
    1酶促反应生成分子信
    2调控离子通道改变分子浓度细胞定位分布
    (二)游分子通边沟激活游分子传递信号
    1配体结合激活受体
    2酶分子通价修饰变构激活游转导分子
    3分子信结合激活游分子
    4游蛋白质结合激活游蛋白质分子
    32列举膜受体介导细胞信号转导途径
    1)cAMPPKA途径
    2)Ca2+赖性蛋白激酶途径 Ca2+磷脂赖性蛋白激酶途径Ca2+钙调蛋白赖性蛋白激酶途径(Ca2+CaM激酶途径)
    3)cGMPPKG 途径
    4)酪氨酸蛋白激酶途径 受体型TPKRasMAPK途径JAKsSTAT 途径
    5)核子κB途径
    6)TGFβSmad途径
    33核酸分子杂交
    DNA变性复性程中果种类DNA单链分子RNA分子放溶液中两种单链分子间存着定程度碱基配关系适宜条件分子间形成杂化双链种杂化双链DNADNA间形成DNARNA分子间者RNARNA分子间形成种现象称核酸分子杂交
    34重组DNA技术基原理

    35目基获取方法
    聚合酶链式反应(PCR)反转录PCR(RTPCR)文库筛选工合成等
    36基载体概念常载体载体选择标准
    载体指够携带目基宿细胞扩增表达DNA分子
    常载体包括:质粒载体病毒载体工染色体载体
    载体选择应具备条件:(1)复制子(2)单限制性切酶位点(3)筛选标志(4)表达型载体具备完整转录单位
    37基克隆基步骤
    基克隆基步骤:1限制性切酶笑话目基载体DNA具备连接末端序列特征2DNA连接酶目基载体DNA连接起构成重组DNA分子3连接起产物导入合适宿细胞重组DNA分子复制扩增4筛选克隆化获重组克隆载体克隆基
    38cDNA文库基组文库
    cDNA文库:指含某种组织细胞全部mRNA信息重组DNA克隆群体细胞总mRNA模板利逆转录酶合成mRNA互补cDNA第链进形成cDNA双链合适载体连接转入受体菌扩增建立cDNA文库
    基组文库:指含某种生物体全部基片段重组DNA克隆群体原核真核细胞染色体DNA提纯机械法限制性切酶染色体DNA切割成等片段插入适克隆载体中继转入受体菌扩增获含众克隆基组DNA文库
    39PCRRTPCRSouthern印迹Northern印迹RNA干扰
    PCR:根DNA半保留复制DNA聚合酶特性建立起体外复制扩增DNA片段技术
    RTPCR:mRNA模板先进行逆转录cDNA进行PCR反应
    Southern印迹:DNA定性定量分析方法程 提取细胞中总DNA限制性切酶水解进行电泳转移硝酸纤维素膜DNA探针结合膜DNA分子退火形成双链检测靶DNA含量
    Northern印迹:RNA定性定量分析方法程 细胞中总RNA分子进行电泳分离转移硝酸纤维素膜DNA探针结合膜RNA分子退火形成双链检测靶RNA含量
    RNA干扰:短双链RNA诱导源RNA降解程种特异转录基沉默现象认生物体核酸水免疫反应
    40谓药物发现
    药物发现:广义定义药物研究开发程包括:某种疾病治疗靶点确定基础研究行性分析先导化合物体外检测生物模型方法学建立药理学药物代谢动力学安全性研究制剂学专利申请体ⅠⅡⅢ期床研究市销售狭义指药物设计基础研究行性分析设计先导化合物发现程
    41传统现代药物发现模式
    传统药物发现模式:1机发现包括治疗作机发现药物源机发现2定筛选发现包括治疗特定疾病药物筛选特定药物源物质筛选
    现代药物发现模式:1合理药物设计:发现先导化合物药物发现关键步
    2逆药理学
    42谓药物靶点
    药物靶点:生物体细胞膜火细胞种特异性分子结构药物信息分子关受体分子关键部位特异性结合生成逆性复合物进步启动功性变化汝开启细胞膜离子通道火激活特殊酶导致生理药理变化







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