学位文
文题目：绣球花蓝尼康’快繁技术研究
学位级： 硕士
学科专业：森林培育
研究方：
文编号：
文提交日期：2017年4月
摘
绣球属(Hydrangea L)虎耳草科中具重观赏价值木属约85种分布亚洲东部东南部北美洲东南部中美洲南美洲西部国46种
10变种南部海南东北部黑龙江吉林西北部新疆等省区外全国均分布产秦岭南尤西南部东南部分布种类完善绣球花繁育技术体系国外引进优良品种绣球花蓝尼康’试材扦插组织培养胚抢救三方面绣球花品种进行试验试验结果进行分析讨 研究结果：
1扦插试验结果表明萘乙酸绣球花蓝尼康’生根长度生根数目甚绣球花成活率着影响适合蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm500 mgL3种植物生长调节剂适宜绣球花扦插植物生长调节剂NAA成活率93均生根数目79根均生根长度21 cm适宜绣球花扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根均生根长度23 cm
2绣球花蓝尼康’叶片佳消毒方法：水洗3060 min然超净工作台75％乙醇消毒菌水洗外植体45次01升汞灭菌14 min接着菌水洗57次滤纸吸干接种初代培养基中进行培养
3绣球花蓝尼康’组织培养试验中佳愈伤组织诱导培养基配方： MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL培养12 d愈伤组织长出诱导愈伤率达8916佳生根培养基：MS+IBA10 mgL生根率100均生根时间67 d生根长度20 cm适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL定芽诱导率925外植体定芽均数量33
4胚抢救繁育技术中种子萌发培养基配方：MS+NAA15 mgL11d种子开始萌发种子萌发率达825
关键词：绣球花扦插组织培养胚抢救ABSTRACT
Hydrangea L is a woody plant with an important ornamental value in the Saxifragaceae with totall 85 kinds of varieties distributing in the east to southeast of Asia southeast of North America to the central America and west of south America While in our country there are 46kinds of varieties with 10 variations which is distributed all around China except the southern hainan northeast of heilongjiang jilin northwestern of xinjiang and other provinces It is mainly produced in the south of Qinling Mountainsespecially from its southwest to the southeast with many kinds of varieties The paper analyze on the results of experimental on three levels as
cuttage and tissue culture and embryo rescue of Hydrangea macrophyllaon’ using a good variety of Hydrangea macrophyllaon’ which is imported abroad in order to perfect the propagation technique system of Hydrangea macrophyllaon’ Results as below
1 The experiment on cuttage shows it is the NAA acid that has a big impact on the root length root number and even the survival rate of Hydrangea macrophyllaon’ It is the pearlite that is fit for its cuttage matrix with sand 11survival rate as 85 average root number is 76 and the root length is 26 cm It is the NAA that is the best suitable to its cuttage among three kinds of plant growth regulator of 500mgL with survival rate 93 the average root number 79 average root length 21 cm while the NAA concentration is 600mgLsurvival rate is 93 the average root number is 83 average root length is 23 cm
2 The best method of disinfection for the leaves of Hydrangea macrophyllaon’ is to use the water to swatch it for 3060 min then put it into the 75 ethyl alcohol for sterilization and flush the explant 4 to 5 times using sterile water Then use mercury with the concentration of 01 to sterilize for 14min on the super clean benchAt last flush its leaves 4 to 5 times using sterile water dry it by filter paper and inoculate to the original medium for culture
3 In the experiment on the tissue culture of Hydrangea macrophyllaon’the best culture medium component by callus induction is MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL there is a growing callus after 12d with the callus induction rate up to 8916 The best rooting medium is MS+IBA10 mgL with rooting rate 100 average root time 67d root length 20cmwhile the best optimum culture medium of axillary bud induction for it is MS+6BA 10 mgL with the inductivity of adventitious bud 925and each of the average number of explant adventitious bud 33 pieces
4 The seed germination medium on the embryo rescue breeding technology is MS+NAA15 mgL seeds begin to sprout after 11d with the germination rate up to 825
Key words Hydrangea cuttage tissue culture embryo rescue
目 录
摘 I
ABSTRACT II
1 绪 1
11 绣球花形态特征生态性 1
111 形态特征 1
112 生态性 1
113绣球花观赏特性途 1
12 国外绣球花快繁技术研究现状 2
121国外研究 2
122国研究 2
13 国外组织培养技术研究 4
131国外研究 4
132 国研究 6
14 研究目意义 8
141研究目 8
142研究意义 8
2 绣球花品种蓝尼康’扦插繁育技术研究 10
21试验概况 10
22 材料方法 11
221 材料处理 11
222试验方法 11
23 结果分析 12
231扦插基质蓝尼康’扦插影响 12
232植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响 13
223 NAA浓度蓝尼康’扦插影响 14
24 讨 15
241 基质选择 15
242 植物生长调节剂选择 15
243 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响 16
3 绣球花品种蓝尼康’组培繁育技术研究 17
31 材料方法 17
311 材料 17
312 试验方法 17
32 结果分析 20
321 消毒方式外植体影响 20
322愈伤培养基优化 21
323植物生长调节剂绣球花生根影响 25
324植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响 27
331外植体消毒 28
332褐化现象 28
333玻璃化现象 29
334培养基选择 29
335植物生长调节剂选择 30
336培养基pH值 31
34 炼苗移栽 32
4 绣球花品种蓝尼康’胚抢救繁育技术研究 34
41材料方法 34
411材料处理 34
412试验方法 34
42结果分析 34
421种子萌发试验 34
43问题讨 36
5 全文结创新点研究展 37
51全文结 37
52创新点 37
53研究展 37
参考文献 39
附录1： 44
附录2： 45
附录3：试验相关图片 46
1 绪
绣球(Hydrangea macrophylla(Thunb) Ser)绣球科属中属全世界约85种分布东亚南北美洲国46种10变种南部海南东北部黑龙江吉林西北部新疆等省区外全国均分布产秦岭南尤西南部东南部分布种类[13]明清时代中国江南园林栽培1789年Joseph Banks绣球花引入英国名八仙花花朵艳丽姿态华美立成世界备受欢迎园艺观赏植物
11 绣球花形态特征生态性
111 形态特征
落叶灌木者乔木高3 m枝条开展冬芽裸露叶生卵形卵状椭圆形表面暗绿色背面星状短柔毛叶缘锯齿夏季开花花枝顶集成球状聚伞花序边缘具白色中性花花期67月花径1820 cm全部位孕花花初开带绿色转白色具清香形态绣球命名绣球花叶具短柄生叶片肥厚光滑椭圆形宽卵形先端锐尖长1025 cm宽510 cm边缘粗锯齿[46]
112 生态性
绣球花喜荫喜温暖气候适合绣球生长温度1828 ℃冬天温度低5 ℃花芽分化需57 ℃条件68周20 ℃温度促进开花花开维持16 ℃便延长观花期高温花朵褪色加快华北区盆栽温室冬绣球花喜欢生活湿润富含腐殖质排水良酸性土壤[78]
113绣球花观赏特性途
园林途：绣球花花型丰满绣球花色美长江流域著名观赏植物园林中配置稀疏树荫底者林荫道旁边片植阴坡阳光求高适宜栽植阳光较差面积庭院中[9]建筑物入口处植两株建筑物列植排丛植庭院角非常理想绣球花更适植花篱花境整花球剪瓶插室等点缀品花球悬挂床帐更加觉雅趣绣球花性强耐寒抗性强少感染病虫害仅作优良观赏植物作中高档盆花供应市场绣球花种植游路边缘建筑物入口丛植株草坪角散植常绿树前美观型庭院中仅植孤植盆栽绣球花常作室布置窗台绿化家庭养花材料
[10]
医疗途：美国研究员发现 源绣球属植物根系种药物 体免疫疾病治疗 例风湿性关节炎发性硬化症炎症性肠疾病1型糖尿病湿疹牛皮癣等中药处方中绣球根已数百年历史该项研究细胞分子医学计划波士顿童医院免疫疾病研究哈佛牙科学院研究员完成研究结果发表2009年6月5日出版Science杂志[11]绣球花4种制剂鼠疟明显抑制作总碱叶水煎膏床验证治疗疟疾病41例效率853[12]绣球花根叶花均治疗疟疾抗疟解热作果剂量引起呕吐功效副作颇似常山作稍弱通常单草果搭配肺热喉痛清热解毒效外煎汤洗研末涂挫治疗疥癣肾囊风等清热止痒功效
12 国外绣球花快繁技术研究现状
121国外研究
绣球原产日中国四川带1736年引种英国欧洲荷兰德国法国栽培较普遍花店红蓝紫等色绣球品种庭园建筑物前栽绣球少德国兰普·琼格弗拉（Rampp Jungpflanzen）公司世界著名生产绣球企业绣球新品种培育生产单位次荷兰门·范文公司色列亚格苗圃绣球生产企业国家没绣球花培养技术全面推广没适宜套绣球花快繁技术[1315]
122国研究
目前国绣球花快繁技术研究初步试验阶段没形成种适宜绣球花快繁技术年国广州海等欧洲日引进绣球花品种利快繁技术进行快速繁育没推广应
2007年3月国外优良绣球属3品种引入德州学院农学系花卉基试种成功[16]绣球花孕性进行2种方法快繁研究基质扦插进行繁殖研究基质生根长度生根数量影响研究采配珍珠岩灰炭蛭石等扦插基质筛选出佳扦插基质[1718] 二绣球花组织培养研究通6BANAA浓度样调配出培养基绣球花初代培养继代培养生根培养筛选出佳浓度培养基[1920]
邢合龙原会营马开等绣球花组织培养研究中认部位外植体初代培养效果中较合适外植体绣球花茎尖茎尖身污染程度低部位嫩叶片外界接触时间较长然叶片污染少叶片外植体中容易分化形成愈伤组织部位更快速形成定芽选茎尖位外植体[2122]外植体消毒重环节消毒时间短完全杀死病毒消毒时间长会杀死外植体消毒时间针外植体选较适宜时间继代培养中植物生长调节剂配侧芽形成效果植物生长调节剂少促进侧芽形成生长会抑制侧芽形成生长[23]
国山东德州学院农学系薛玉剑金桂芳苏荣存等[24]绣球花扦插繁殖中指出：例基质绣球花扦插影响珍珠岩蛭石泥炭三种材料配置绣球花扦插基质进行扦插研究没佳扦插基质
欧美日等国家植物学家园艺学家早广泛展开研究绣球花快繁技术深入研究利快繁技术量繁育绣球花栽培[25]止全球绣球花品种约85种中国占46种63％然中国品种繁没量作观赏花卉进行培养中国绣球花培养已远远落国家中国需加快绣球花新品种引进应推广仅丰富中国园林植物种类时够增加中国物种样性稳固生态系统等方面着巨作
目前中国绣球花研究基停留传统栽培品种快繁技术研究外新品种快速繁殖做研究次研究绣球花品种蓝尼康’曹基武老师美国乔治利亚学引进中国美国理气候条件存差异绣球品种蓝尼康’引入中国样更存活样快速繁殖中国应价值等问题研究中针述绣球花快速繁殖问题进行研究提高引入品种观赏价值筛选出适合南方城市应推广优良品种具重意义
13 国外组织培养技术研究
131国外研究
植物组织培养快繁技术指菌条件离体植物根茎叶花等外植体原生质体培养工配置培养基面予适培养条件生长成完整植株手段[26]培养物脱离植物母体玻璃瓶中进行培养做植物离体培养程：外植体脱分化愈伤组织愈伤组织脱分化生长点生长点生长发生根茎叶者胚状体然胚状体生长成完整植株情况分化愈伤组织阶段直接发生脱分化细胞[27]组织培养技术中植物获取营养生长环境条件十分良加速育种缩短繁殖程周期够缩短进行植物组织培养技术时候获种水性系例细胞组织器官植株材料统单体遗传性非常致果试验够避免许误差试验材料纯度非常高减少试验重复影响试验精度[28]植物组织培养(Plant tissue culture)20世纪初植物生理学基础发展起门新兴技术广义组织培养指菌条件利工培养基适宜条件植物器官组织细胞原生质体培养Gambogr根培养植物材料组织培养分5种类型愈伤组织培养悬浮细胞培养器官培养(胚花药子房根茎培养等)茎尖分生组织培养原生质体培养[29]
美国日研究推广糖培养微繁殖技术称光养微繁殖技术代表 [30]植物组织培养种全新概念植物非试快繁技术体系中快繁种环境控制技术生物技术机结合植物组织培养方法次创新现国外研究快繁技术简介：采环境控制手段CO2代传统组织培养方法中糖作植物体碳源通工控制提供适宜植株生长光温水气营养等条件促进植株光合作促进植物生长发育[31]适植物微繁殖利植物组织繁育植株程中目前3种生长方式利植物体光合作进行然生长(养)二植物体培养基中糖进行异养生长(异养)三植物体培养基中糖工光时进行异养生长养生长(混养)现植物组织培养微繁殖数第三种方式进行培养基中加入糖予定工光样培养条件植株长期培养基中糖进行异养混养生长导致叶片发育差气孔开闭功差叶片叶绿素含量降低终植株丧失光合作力者环境条件抑制光合力降低糖培养微繁殖技术重特征培养基中糖
CO2代糖成植物体碳源减少微生物污染促进植株养进行光合作促进植株快速生长发育便短时间获量遗传均匀致植株[32]单容器CO2浓度远远满足植株生长需求需输入CO2般言输入方式两种：然换气强制性换气然换气培养室空气通培养容器微缝隙透气孔进行培养容器外气体交换强制性换气指利机械力作进行培养容器外气体交换强制性换气条件生长植株般然换气条件生长[33]
通科研员研究表明糖培养微繁殖技术改革传统糖瓶子作碳源营养生存空间技术方法增加植物生长生化反应需物质流交换循环促进植株生长发育实现优质苗低成生产该技术较传统组织培养具明显优势：培养周期缩短种苗驯化期间成活率幅度升复杂驯化程简化组培生产工艺简单化流程缩短技术设备集成度提高降低操作技术难度劳动作业强度更易规模化生产推广应节省投资降低生产成传统微繁殖技术相种苗生产成均降低30[3435]述介绍快繁日应较国适应田生产需降低快繁成采常规快繁开发技术设备样适严格快繁[36]目前国外种快繁技术综合发展集育苗成广义快繁技术
植物组织培养历史植物细胞全性理提出证明广泛应历史年试验结果证明探究基植物体部位进行离体培养生完整植株[37]植物组培养试验奠定定基础时植物组织培养技术发展成现代生物技术关重组成部分：植物组织培养技术诞生发展建立植物细胞全性理提出1839年细胞学家ShcelidenShcwnan提出细胞学说中述果具备条件机体样细胞应独立生存发展1902年德国著名植物生理学家Haberlandt发表关植物细胞培养第篇文文章中提出植物细胞具全性(totiPoetnt)设想单细胞工培养通细胞分裂形成完整植株
具原植物全部遗传性[38]1904年Hanning首先成功培养萝卜辣根菜胚紧接着1922年KotteRobbins分培育出离体根尖茎尖培养[3940]Haberlandt1934年white培养基中培养番茄离体根尖期间32年时间里植物组织培养技术没什进展进行初步探索1934年荷兰植物学家Went通试验探究发现生长素吲哚乙酸IAA少学者相继发现萘乙酸24D吲哚丁酸IBA等工合成生长素类首先认识类生长调节物质生长素植物组织培养推动研究进展[41]年White番茄根建立第活跃生长性系根离体培养试验首次获真正成功1958年美国植物学家斯蒂瓦特等胡萝卜体细胞利液体悬浮培养法获完整植株[4243]组织培养技术提供发展台植物组织培养性繁殖部分出现越越受世界国林业工作高度重视性系林业特点Carson[44]做详细报道受世界国学者认[45]19581959年ReinerSetward分报道胡萝卜愈伤组织单细胞推出段时间项发明成已验证1902年Haberlandt提出细胞具全性设想提供量试验组织培养深入发展奠定基础[46]二十世纪60年代植物组织培养技术发展极迅猛方面前停探究试验建立理技术基础方面植物组织培养开始走规模应阶段通良种繁育常规育种遗传工程技术相结合植物遗传改良发展中发挥十分巨作方面已取非常客观济效益类生产生活提供效帮助1960年Cocking等真菌纤维素酶分离原生质体获成功激发原生质体培养热情[47]1962年Kanta完善试传粉受精技术克服发生花粉柱头间两性亲合现象
132 国研究
1945年国科学家崔澄美国科学家斯柯格进行试验利植物生长调节剂处理愈伤组织成功诱导出器官分化[4849]国植物组织培养创始罗士韦教授中国科学院海植物生理研究开展组织培养研究程度推进国植物组培技术研究组培技术全国发展极迅速全国许农林业科学院高校开展植物组培研究工作研究探讨植物组培环境时种农作物园艺植物济林等千种植物进行研究取巨成
[50]时间组培试验方面取巨进步郑文静等总结植物组织培养中遇常见问题解决方法吴毅明通化学纤维纸卷沙子蛭石等代般琼脂作培养基够提高根生活环境促进植物生根[51]刘思九利暴露培养法敞口培养器中添加特制粉沫状灭菌材料够覆盖培养基外植体减少污染率利特制装置补水够促组培苗够长势良炼苗中提高成活率加植株抗性[52]肖玉兰等研究糖箱式培养法够降低植组培生产成时够促进植物增长
着快繁殖技术茎尖培养脱毒技术成熟20世纪90年代国家建立批苗木繁殖基马铃薯草莓香蕉甘蔗桉树白杨鲜花现商业苗生产系统具良济效益社会效益形成兰花业香蕉业[53]例1986年1992年春季中国香蕉生产香蕉组织培养苗总面积达18万hm2中国香蕉组织培养苗总量高达约1亿占23马铃薯作重济作物病毒苗产量达60％病毒苗生产已越越知名企业百事乐公司中国农业科学院建立病毒马铃薯组织文化研讨会完全统计国约二千组织培养植物组织培养技术已建成成千万株植物[54]时着文化断扩较型国企业组织培养组织培养规模海南新会工厂热带植物组织培养研究中心新海南万亨种子公司杨凌农业高新技术开发区文化中心等设施技术断完善[55]目前新会组织文化中心生产线已达动化半公司引进国外新技术设备植物年生产力达数千万株满足市场需求
快速传播技术低投入高效率高质量生产科研已广泛应尤退耕林城市绿化园林花卉蔬菜茶叶桑树济植物需产生量幼苗果传统技术难满足生产需求[56]非试快速传播技术短期产生量高品质遗传特性稳定商品苗导致国家绿化济发展起着关重作特加入WTO农业挑战非常严峻果提高生产力水先进农业设备技术提高产品质量降低生产成终消市场竞争先进实农业新技术唯武器赢市场竞争植物非试快速繁殖技术国外生产成低动化程度高工厂动化新苗圃技术推广育苗技术发展场新革命会带巨济效益社会效益
14 研究目意义
141研究目
绣球花花型丰满绣球花色美长江流域著名观赏植物园林中配置稀疏树荫林荫道旁片植阴坡阳光求高适宜栽植阳光较差面积庭院中建筑物入口处植两株建筑物列植排丛植庭院角理想更适植花篱花境整花球剪瓶插室等点缀品花球悬挂床帐更觉雅趣绣球花性强耐寒抗性强少感染病虫害作优良观赏植物作中高档盆花供应市场次研究仅够完善绣球繁育技术体系丰富园林景观植物做出贡献
142研究意义
城市绿化景观提供更选择植物丰富景观效果二次研究绣球花品种蓝尼康’曹基武老师美国乔治利亚学引进中国美国理气候条件存差异蓝尼康’引入中国快速繁殖中国应价值等问题研究中针述绣球花繁殖问题进行研究提高引入品种观赏价值筛选出适合南方城市应推广优良品质具重意义
15 技术路线
研究技术路线：
绣球品种蓝尼康’快繁技术
浓度植物生长调节剂实验
愈伤培养基优化
消毒时间研究
生根培养基优化
腋芽诱导培养基优化
组织培养
浓度萘乙酸处理
植物生长调节剂种类
基质配
扦插繁殖
胚抢救
佳组培培养基配方
佳扦插基质激素配方
佳种子萌发配方
完善绣球品种蓝尼康’繁育技术体系
图11 文技术路线图
Fig 11 The technology roadmap
2 绣球花品种蓝尼康’扦插繁育技术研究
扦插育苗选植物枝叶根等营养器官部分作繁殖材料插入土壤泥炭蛭石等基质中促生根发芽生长完整植株育苗方法绣球花通嫩枝扦插实现规模化繁殖生长素类植物生长调节剂处理促进插条生根缩短生根时间提高成活率[5758] 生长素插条没参机物重新建成促插条段变成吸收养分中心起着促进物质交换调配插条养分作外生长素解基抑制提高mRNA合成促进种酶合成诱导根原始体发端试验表明生长素处理插条仅利根原始体诱导够促进定根生长[59]作效果具两重性作物筛选出合适处理浓度处理方法方保证应效果[60]薛玉剑等[61]研究基质配绣球扦插生根影响未植物生长调节剂种类浓度进行系统研究周余华等[62]研究类生长调节剂基质圆锥绣球扦插育苗影响然关绣球花扦插技术问题正科研员断探索中解决品种间基型差异品种植物培养条件差异[63]关绣球花蓝尼康’扦插繁殖育苗未见报道
21材料方法
211实验概况
扦插点：扦插试验湖南长沙中南林业科技学温室完成
试验概况：长沙市位湖南省东部偏北湘江游长浏盆西缘域范围东111°53′～114°15′北纬27°51′～28°41′长沙属亚热带季风性湿润气候气候特征：气候温降水充沛雨热期四季分明长沙市区年均气温172℃白天高温度32℃夜间低温度15℃均温度245℃均年降水般1300 mm空气相湿度80
温室概况：温室温度范围2328℃光室外光2040目前应温室气候环境调控设备机械式遮阳保温拉幕机械式开窗通风设备风机通风设备湿帘降温装置喷雾降温设备明灯补光灯等等设备组合施构成作强度气候环境调节系统例机械式开窗通风设备温室建筑物窗口窗口配置组成然通风系统湿帘降温装置风机温室建筑物中布局组成作强度湿帘降温系统值注意设备采仅某参数调控部分贡献设备采仅种参数调控贡献会影响参数调控湿帘降温装置需风机配合完成功实现机械式遮阳保温拉幕设备时影响光温度调控设备采目温室气候环境进行调节保证气候环境达期准确精确程度
212 材料处理
植物材料蓝尼康’中南林业科技学曹基武教授美国引进移栽中南林业科技学苗圃绣球花扦插枝条均选植物外围生长健壮发育良病虫害1年生枝条采穗时应采粗细量均匀致枝条首先新单面刀枝剪新品种绣球花支柱选取年萌发新枝插穗长8 cm左右然绣球花茎段方切口剪斜方切口剪掉基部部分叶片批新枝20枝先竹签扦插基质表面插洞然迅速插入插穗手插穗周边压实扦插完毕喷壶喷水压紧基质苗床方盖透光率50遮阳网天喷壶喷水1次
213 基质配试验方法
试验设置6种扦插基质表21示6种基质分消毒河沙混合覆盖10 m×30 m苗床浇水透彻进行扦插
2222植物生长调节剂种类试验方法
浓度均500 mgL植物生长调节剂IAAIBANAA溶液浸泡插穗基部5 min然进行统扦插
214 萘乙酸（NAA）浓度处理试验
分601601802003004006009001000 mgLNAA溶液浸泡插穗基部5 min然统扦插
处理均20穗条进行试验3次重复扦插试验均2016年4月30日开始进行年5月30日统计绣球花成活率生根情况
表21 扦插试验基质配方
Table 21 The matrix component for cuttage experiment
试验号
基质配方
1
珍珠岩
2
蛭石
3
沙子
4
珍珠岩：蛭石1：1
5
蛭石：沙子1：1
6
珍珠岩：沙子1：1
22 结果分析
221扦插基质蓝尼康’扦插影响
根表22知：成活率方面组合4组合56次组合13组合2差组合4＞组合56＞组合13＞组合2均生根数目方面组合4组合6优组合组合5次组合13组合2差组合46＞组合5＞组合13组合2生根长度方面组合6组合45次组合13组合2差组合6＞组合45组合13＞组合2表22 基质绣球花扦插影响
Table22 The influences of different kinds of matrix on cuttage of Hydrangea
试验号
成活率（）
均生根数(条)
生根长度（cm）
1
73 3±29c
57 ± 030c
14 ±015cd
2
650±50d
50 ±025d
13 ±015d
3
783 ±29c
56 ±026c
17 ±014c
4
900 ±00a
77 ±030a
23 ±026b
5
833 ±29ab
70 ±020b
22 ±010b
6
850 ±87ab
76±020a
26 ±015a
表中数均值列中字母表示数差异显著(P<005)
根试验出结果进行方差分析见表23：基质绣球花成活率生根长度影响推出选合适基质扦插影响重
表23 基质绣球花扦插影响方差分析
Table23 The variance analysis on the influence of different kinds of matrix to the cuttage of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
基质
成活率
1212500
5
242500
11640
极显著
均生根数目
19868
5
3980
59200
极显著
生根长度
3818
5
0764
26435
极显著
根实验结果分析知：混合基质单种基质更加利蓝尼康’扦插成活率方面组合4组合6间没明显差异均生根数生根长度方面组合6优组合4推出实验中适宜蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm
222植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响
根表24知：成活率方面NAA＞IBA＞IAA均生根数目方面NAA＞IBA＞IAA生根长度方面NAA ＞IAAIBA根实验结果分析知：然植物生长调节剂绣球花扦插影响适宜绣球花扦插生长调节剂NAA500 mgLNAA植物生长调节剂绣球花成活率93均生根数目79根生根长度21 cm
表24 植物生长调节剂绣球花扦插影响
Table24 The influence of different kinds of plant growth regulator on the cuttage of Hydrangea
植物生长调节剂
成活率（）
均生根数（根）
生根长度（cm）
IAA
763±29c
70±047a
16±011b
IBA
860±29b
75±041a
15±011b
NAA
933±29a
79±046a
21±025a
根试验出结果进行方差分析见表25：植物生长调节剂蓝尼康
’成活率极显著绣球花扦插生根长度影响显著蓝尼康’生根长度没影响
表25 植物生长调节剂绣球花扦插方差分析
Table25 The variance analysis on different kinds of plant growth regulator to the cuttage of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
植物生长调节剂
成活率
422222
2
211111
25333
极显著
生根数目
1197
2
0599
2982
显著
生根长度
0596
2
0298
9926
显著
223 NAA浓度蓝尼康’扦插影响
浓度NAA处理蓝尼康’影响情况表26示知：NAA浓度达600 mgL时绣球花生根数达高成活率93均生根方面NAA浓度达600 mgL时均生根数目83根生根长度方面NAA浓度达900 mgL时候生根长度达高25 cm
试验结果分析出：成活率均生根数方面600 mgLNAA明显优浓度NAA生根长度方面然NAA浓度达900 mgL时生根长度达值根表26知900 mgL600 mgLNAA生根长度明显差异出结适宜蓝尼康’扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根生根长度23 cm
表26 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响
Table26 The influence of different concentration of NAA plant growth regulator on the cuttage of Hydrangea
NAA植物生长调节剂浓度mgL
成活率（）
均生根数（根）
生根长度（cm）
60
733±29f
51±083d
14±020e
160
803±50de
55±026d
15±010e
180
830±29cd
57±045cd
17±011de
200
863±29bc
57±046cd
17±011cd
300
883±29abc
64±025c
18±011bc
400
910±29ab
75±050ab
20±015b
600
930±29a
83±050a
23±058a
900
880±29abc
763±045ab
25±020a
1000
753±50ef
73±040b
21±015b
根试验出结果进行方差分析见表27：NAA植物生长调节剂浓度绣球花蓝尼康’生根数成活率生根长度着极影响
表27 浓度萘乙酸处理绣球花扦插生根影响方差分析
Table27 The influence of using different concentration of NAA on the cuttage rooting of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA植物生长调节剂浓度
成活率
1200
8
150000
12462
极显著
均生根数
31833
8
3979
16946
极显著
生根长度
3073
8
0384
18522
极显著
23 讨
231 基质选择
金桂芳等利采珍珠岩泥炭蛭石三种基质配7种扦插基质出结利珍珠岩蛭石泥炭做绣球扦插基质时基质中添加泥炭泥炭中含胡敏酸机营养插穗生根着非常显著促进作 1：1 ：1 复配例显著促进根生长试验出结出种情况绣球花成活率法达100基质绣球花扦插影响仅仅三种基质较增加基质类利三种混合基质绣球花扦插影响进步研究
232 植物生长调节剂选择
生长调节剂蓝尼康’影响实验中选500 mgL浓度试验结果具偶然性试验中选常见3种植物生长调节剂较需量试验验证NAA蓝尼康’扦插佳植物生长调节剂植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响需进步研究
233 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响
周新华朱宜春桂尚[64]等研究花黄精组培生根时出结NAA相植物生长调节剂言更促进植物生根魏猷刚周达彪[65]等研究出适宜NAA浓度处理缩短绣球花生根时间提高插穗成活率周洲李永丽[66]等通试验表明NAA浓度欧美杨生根生芽具定影响研究出样结果NAA植物生长调节剂浓度绣球花影响显著NAA绣球花生根长根长度生根数目甚绣球花成活率着影响NAA浓度达定程度时候提高绣球花成活率生长状态植物生长调节剂浓度高会抑制绣球花生长
3 绣球花品种蓝尼康’组培繁育技术研究
植物组织培养技术植物细胞组织器官等菌条件进行培养长出株幼苗培育出幼苗进行切割次培养繁育处量幼苗植物组织快繁技术常规繁殖技术快速受周围良环境影响够时提供量优质苗植物组织培养技术作种基试验技术基础研究手段广泛应农业林业工业等种行业中现代生物技术重组成部分年显示出巨应潜力21世纪初林业生物工程提倡性系林业发展程度取决林木组织培养水植物组织培养技术快速发展林业生物工程研究出现勃勃生机年利林业生物工程选育优质高产抗新品种林木细胞融合原生质体培养单倍体培养体细胞器官培养微生物转化等方面研究均突破
31 材料方法
311 材料
试验材料中南林业科技学苗圃采集绣球品种蓝尼康’叶片带芽茎段
312 试验方法
3121 消毒方式
外植体消毒：外植体水洗60 min中取出放入超净工作台先放入75乙醇消毒30 s然菌水洗35次01升汞进行灭菌菌水洗57次滤纸吸干叶片切成1cm×1cm正方形接种培养基放培养室中培养
3122 愈伤培养基优化
愈伤组织培养培养基选择MS12MSB5三种基培养基MS培养基中添加浓度6BANAA24DIAA培养基类型植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度3方面进行优化愈伤组织培养植物生长调节剂配见表31培养基中加入蔗糖
30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度22℃种培养基接种20瓶瓶接2外植体重复3次培养15 d30 d记录生长状况
表31 愈伤组织培养植物生长调节剂配
Table31 The matching of plant growth regulator on the callus culture
试验号
基培养基
6BA
(mgL)
IBA
(mgL)
NAA
(mgL)
24D
(mgL)
试验号
基培养基
IBA
(mgL)
NAA
(mgL)
1
MS
05
00
00
00
37
12MS
00
00
2
MS
10
00
00
00
38
12MS
05
05
3
MS
15
00
00
00
39
12MS
05
10
4
MS
20
00
00
00
40
12MS
05
15
5
MS
30
00
00
00
41
12MS
05
20
6
MS
00
05
00
00
42
12MS
10
05
7
MS
00
10
00
00
43
12MS
10
10
8
MS
00
15
00
00
44
12MS
10
15
9
MS
00
20
00
00
45
12MS
10
20
10
MS
00
30
00
00
46
12MS
15
05
11
MS
00
00
05
00
47
12MS
15
10
12
MS
00
00
10
00
48
12MS
15
15
13
MS
00
00
15
00
49
12MS
15
20
14
MS
00
00
20
00
50
12MS
20
05
15
MS
00
00
30
00
51
12MS
20
10
16
MS
00
00
00
05
52
12MS
20
15
17
MS
00
00
00
10
53
12MS
20
20
18
MS
00
00
00
15
54
B5
00
00
19
MS
00
00
00
20
55
B5
05
05
20
MS
00
00
00
30
56
B5
05
10
21
MS
00
05
05
00
57
B5
05
15
22
MS
00
05
10
00
58
B5
05
20
23
MS
00
05
15
00
59
B5
10
05
24
MS
00
05
20
00
60
B5
10
10
25
MS
00
10
05
00
61
B5
10
15
26
MS
00
10
10
00
62
B5
10
20
27
MS
00
10
15
00
63
B5
15
05
28
MS
00
10
20
00
64
B5
15
10
29
MS
00
15
05
00
65
B5
15
15
30
MS
00
15
10
00
66
B5
15
20
31
MS
00
15
15
00
67
B5
20
05
32
MS
00
15
20
00
68
B5
20
10
33
MS
00
20
05
00
69
B5
20
15
34
MS
00
20
10
00
70
B5
20
20
35
MS
00
20
15
00
36
MS
00
20
20
00
3123 生根培养基优化研究
外植体选带芽茎段2 cm左右培养基选MS添加NAAIBAIAA三种植物生长调节剂浓度梯度05 10 1520 30 mgL五梯度总12种培养基植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度2方面进行优化生根诱导植物生长调节剂配见表32培养基中加入30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度22 ℃种培养基接种20瓶瓶1外植体重复3次15 d30 d观察记录生根长度生根数目
表32 生根诱导植物生长调节剂配
Table 32 The matching of plant growth regulator on rooting induction
试验号
基培养基
IAA(mgL)
IBA(mgL)
NAA(mgL)
71
MS
05
00
00
72
MS
10
00
00
73
MS
15
00
00
74
MS
20
00
00
75
MS
00
05
00
76
MS
00
10
00
77
MS
00
15
00
78
MS
00
20
00
79
MS
00
00
05
80
MS
00
00
10
81
MS
00
00
15
82
MS
00
00
20
3124腋芽诱导培养基优化研究
腋芽诱导培养培养基选择MS基培养基MS培养基中添加浓度6BANAA24D植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度2方面进行优化腋芽诱导植物生长调节剂配见表33培养基中加入蔗糖30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度26℃种培养基接种20瓶瓶接2外植体重复3次培养15 d记录生长状况
表33 腋芽诱导植物生长调节剂配
Table33 The matching of plant growth regulator on axillary bud induction
试验号
基培养基
6BA(mgL)
NAA(mgL)
24D(mgL)
83
MS
05
00
00
84
MS
10
00
00
85
MS
15
00
00
86
MS
20
00
00
87
MS
00
05
00
88
MS
00
10
00
89
MS
00
15
00
90
MS
00
20
00
91
MS
00
00
05
92
MS
00
00
10
93
MS
00
00
15
94
MS
00
00
20
32 结果分析
321 消毒方式外植体影响
表34知着升汞消毒时间加长染菌数越越升汞消毒时间达12 min时候开始出现褐化现象着消毒时间加长褐化现象更加明显染菌数减少升汞灭菌时间达20 min时染菌数0褐化数17成活率15
根试验结果统统计出结：着升汞消毒时间加长外植体灭菌越加彻底升汞灭菌时间达12 min时候会出现褐化植物开始造成损伤升汞灭菌时间继续加长染菌数明显减少褐化数明显增根灭菌成活率显示升汞灭菌14 min时蓝尼康’存活率高7512 min时候成活率55绣球品种蓝尼康’佳升汞灭菌时间14 min
表34 升汞时间处理外植体消毒程度影响
Table34 The influence of mercury bichloride in different dealing time on the extent of explants disinfection
升汞消毒时间（min)
接种数(）
染菌数（）
褐化数（）
存活数（）
成活率（）
6
20
20
0
0
0
8
20
20
0
0
0
10
20
15
0
5
25
12
20
8
1
11
55
14
20
3
2
15
75
16
20
2
6
12
60
18
20
1
12
7
35
20
20
0
17
3
15
根表35分析知升汞处理时间绣球花蓝尼康’成活率存活数褐化数极显著
表35 升汞时间处理外植体消毒程度方差分析
Table35 The variance analysis on mercury bichloride in different dealing time to the extent of explants disinfection
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
升汞处理时间
成活率
16640625
7
2377232
3169643
极显著
存活数
665625
7
95089
126786
极显著
褐化数
880500
7
125786
335429
极显著
322 单种植物生长调节剂绣球花愈伤组织诱导
表36中出着6BA浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间19 d愈伤率达8416浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢发黄甚愈伤死亡着IBA植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越浓度达15 mgL时候愈伤启动时间18 d愈伤率达7583浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢愈伤率逐渐增加愈伤逐渐发黄 着NAA植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间11 d愈伤率达8916浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长减缓愈伤变黄甚死亡着24D植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间18 d愈伤率达8666浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢发黄甚愈伤死亡
表39中出6BA绣球花影响显著IBANAA24D植物生长调节剂绣球花影响极显著说明绣球花蓝尼康’植物生长调节剂格外敏感时单植物生长调节剂刺激NAA植物生长调节剂相植物生长调节剂绣球花愈伤培养更利NAA植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间11 d愈伤率达8916达顶峰果单植物生长调节剂刺激选择NAA15 mgL植物生长调节剂会加绣球花蓝尼康’愈伤组织培养
表36 浓度植物生长调节剂MS培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table 36 The different concentrations of hormones in the effect of MS medium on Hydrangea callus culture
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
1
22±11
6666±38d
19
26±10
8583±520cd
2
21±10
7666±381d
20
27±26
7833±144g
3
19±11
8416±381de
21
18±30
8250±250d
4
24±20
7416±144d
22
16±21
8666±629bc
5
28±20
6583±629d
23
15±20
9333±144ab
6
24±20
7416±381de
24
16±30
9083±144ab
7
20±15
7500±433de
25
18±20
8250±250de
8
18±30
7583±629de
26
12±15
9416±144a
9
21±21
8666±381bcd
27
15±35
9166±144ab
10
26±45
6666±520e
28
18±05
8416±144d
11
17±25
8583±381cd
29
20±15
8000±250de
12
13±05
8583±520cd
30
16±05
9166±144ab
13
11±15
8916±381ab
31
18±25
9333±144ab
14
11±15
7833±520d
32
22±30
8833±381ab
15
25±30
7583±144de
33
24±25
8083±144de
16
25±20
7666±381de
34
26±20
7416±520de
17
19±20
8250±250de
35
26±25
6833±381e
18
18±15
8666±381bcd
36
28±3
6416±144e
323 基培养基绣球花愈伤组织诱导
表3638中知MS12MSB5培养基法蓝尼康’绣球花叶片较快长出愈伤组织MSB512MS培养基培养基绣球花蓝尼康’愈伤组织培养影响显著时知3种培养基培育出愈伤组织普遍愈伤率偏低启动时间较长愈伤组织长势缓慢出结：更换MS培养基愈伤组织培养未较影响时单植物生长调节剂刺激愈伤组织生长速度缓慢长势堪忧研究植物生长调节剂愈伤组织影响变格外重
表37 浓度植物生长调节剂12MS培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table37 The influence of different concentrations of plant growth regulator in 12 MS medium on callus culture of Hydrangea
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
37
24±20
7166±288e
45
24±20
7583±520de
38
22±05
8083±144cd
46
22±15
8083±144cd
39
21±10
8250±250bc
47
23±15
8416±144bc
40
23±15
725±250e
48
24±20
8166±144cd
41
20±15
8333±288bc
49
24±15
7583±381de
42
17±17
8416±381bc
50
25±11
7583±381de
43
16±15
8833±520ab
51
25±05
6750±661e
44
14±20
9083±144a
52
28±05
6583±144e
53
29±11
6083±144e
表38 浓度植物生长调节剂B5培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table 38 The influence of different concentrations of plant growth regulator in B5 medium on callus culture of Hydrangea
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
54
17±11
7833±288bc
62
19±26
8316±160b
55
16±11
8166±144bc
63
22±15
8333±288b
56
15±05
8416±381b
64
23±15
8250±250bc
57
19±20
8416±381b
65
25±10
7666±288cde
58
20±11
8166±288bcd
66
26±11
7583±381de
59
21±15
7583±520de
67
23±25
8083±144bcd
60
22±15
7666±629cde
68
25±05
7333±144e
61
15±05
9083±144a
69
26±11
6666±288e
70
29±11
6416±144e
表39 浓度单植物生长调节剂处理绣球花愈伤组织培养影响方差分析
Table39 The variance analysis on different concentration of single plant growth regulator to the influence on callus culture of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
6BA植物生长调节剂浓度
启动时间
69600
4
17400
4350
显著
愈伤组织诱导率
829784
4
207446
74088
极显著
IBA植物生长调节剂浓度
启动时间
1344
4
33600
8400
极显著
愈伤组织诱导率
950727
4
237682
69906
极显著
NAA植物生长调节剂浓度
启动时间
33960
4
84900
53063
极显著
愈伤组织诱导率
513624
4
128406
71257
极显著
24D植物生长调节剂浓度
启动时间
2136
4
53400
19071
极显著
愈伤组织诱导率
243784
4
60946
17540
极显著
324 种植物生长调节剂绣球花愈伤组织诱导
表310中出种植物生长调节剂绣球花愈伤组织培养影响显著表36中出植物生长调节剂时刺激绣球花蓝尼康’愈伤组织单植物生长调节剂刺激更明显佳愈伤植物生长调节剂配MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL愈伤启动时间接种12 d诱导愈伤率达9416根方差分析知IBANAA植物生长调节剂绣球花愈伤组织刺激极显著
愈伤组织培养程中果种植物生长调节剂进行培养优先选IBA10 mgLNAA10 mgL混合搭配IBANAA搭配般单植物生长调节剂刺激愈伤组织效果强绣球花蓝尼康’选什样植物生长调节剂搭配难愈伤率达100愈伤启动时间较缓慢植物生长调节剂浓度高容易导致愈伤组织死亡
表310 浓度植物生长调节剂处理绣球花愈伤组织培养影响方差分析
Table310 The variance analysis on different concentrations of plant growth regulator to the influence on callus culture of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
IBANAA植物生长调节剂浓度
启动时间
1041000
15
69400
52050
极显著
愈伤率
3719069
15
247938
92212
极显著
325 植物生长调节剂绣球花生根影响
表311知三种植物生长调节剂中效果佳IBA次NAA
IAA着植物生长调节剂浓度增加IBANAA均出现程度愈伤化植株生根影响着植物生长调节剂浓度增加时促进植株生根速度生根长度IAA刺激蓝尼康’生根率然偏高生根率难达100IBA达10 mgL时生根率100均生根时间67 d生根长度20 cmNAA达10 mgL15 mgL时候生根率达100NAA15 mgL时候带芽茎段出现愈伤情况愈伤组织容易影响带芽茎段生根NAA浓度10 mgL时候均生根时间7 d均生根长度19cm根表311中IBANAA较出IBA10 mgL绣球花生根更加利出结绣球花生根培养基选MS+IBA10 mgL均生根时间67 d生根长度20 cm
表311 植物生长调节剂绣球花生根影响
Table311 The influence of different plant growth regulators on the rooting of Hydrangea
试验号
生根率（)
生根时间(d)
生根长度(cm)
生长状态
71
8166±144e
12±11b
05±011e
正常
72
8666±144d
11±10bcd
14±015d
正常
73
8333±144e
7±11ef
16±010d
正常
74
7250±250e
15±15a
06±010e
正常
75
9416±144b
8±05de
19±015bc
正常
76
100±000a
67±05e
20±010ab
正常
77
9833±144a
8±15de
22±021a
轻微愈伤
78
90833±144c
9±15cd
12±030e
重度愈伤
79
8750±250d
9±11cd
17±011cd
正常
80
100±000a
7±15e
19±005bc
正常
81
100±000a
8±20e
20±021ab
轻微愈伤
82
9250±250bc
11±15bc
16±005de
轻微愈伤
表312中知通方差分析知NAAIBAIAA绣球花生根着极影响IBA生根时间显著影响植物生长调节剂生根率生根长度生根时间着极显著影响说明绣球花生根容易受植物生长调节剂影响
表312 植物生长调节剂绣球花生根影响方差分析
Table312 The variance analysis on the different plant growth regulators to the influence on rooting of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
生根率
302250
3
100750
40300
极显著
生根长度
1033
3
0344
133777
极显著
生根时间
60356
3
20119
15188
极显著
IBA
生根率
188250
3
62750
41833
极显著
生根长度
0270
3
090
17837
极显著
生根时间
22380
3
7460
7460
显著
IAA
生根率
30825
3
102750
82200
极显著
生根长度
0247
3
0091
914000
极显著
生根时间
23422
3
7807
7807
极显著
326 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响
表313中出：三种植物生长调节剂相互较6BA优NAANAA优24D6BA＞NAA＞24D6BA植物生长调节剂作绣球花蓝尼康’出芽率出芽数逐渐升6BA浓度达10 mgL时候达顶端出芽率925均出芽数33然着浓度升高出芽率出芽数降适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL出芽率925均出芽数33
表313 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响
Table313 The influence of different plant growth regulators on the axillary bud induction of Hydrangea
试验号
腋芽诱导率（）
均出芽数（）
83
8166±144b
22±01c
84
9250±250a
33±02a
85
8416±144b
31±01a
86
7083±144c
17±01d
87
7916±44b
21±02cd
88
8166±288b
26±01b
89
8000±250b
25±01b
90
6416±520d
15±01e
91
7166±288c
13±01d
92
7083±520c
19±02de
93
6166±288d
16±01e
94
5583±520e
09±01e
根表314出植物生长调节剂绣球花腋芽诱导出芽率出芽总数均出芽数着非常影响
表314 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响方差分析
Table314 The variance analysis on the different plant growth regulators to the influence on axillary bud induction of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
6BA
腋芽诱导率
824200
3
274750
157500
极显著
均出芽数
5302
3
1767
70700
极显著
NAA
腋芽诱导率
380250
3
126750
126750
极显著
均出芽数
2220
3
0740
74000
极显著
24D
腋芽率
626250
3
208750
208750
极显著
均出芽数
0982
3
32750
32750
极显著
33 讨
331 外植体消毒
外植体消毒植物组织培养重环节获菌具生长活性外植体组织培养取成功重素[67]组培试验否成功素：否效杜绝染菌杜绝染菌分三方面：外植体灭菌培养基灭菌菌操作现培养基消毒菌操作条件已非常成熟外植体消毒组培试验否成功素掌握外植体消毒时间消毒方式等需试验出结高浓度乙醇会细菌表面形成层保护膜阻止乙醇进入细菌体难细菌彻底杀死果乙醇浓度低然进入细菌细菌体蛋白质凝固样细菌彻底杀死众试验表明75乙醇消毒效果试验乙醇浓度75升汞属重金属蛋白质变性中条重金属升汞蛋白质变性起消毒作升汞种毒物质仅体危害残留物会环境影响汞化合物通呼吸道消化道皮肤吸收心汞中毒会头痛头晕乏力失眠梦口腔炎发热等全身症状更甚者急性腐蚀性胃肠炎严重者昏迷休克甚发生坏死性肾病致急性肾功衰竭选择升汞灭菌属奈选根采摘外植体时间部位消毒时间实验中绣球花蓝尼康’佳消毒方法：水洗3060min01升汞灭菌14min菌水洗外植体
45次接着放入75乙醇消毒30 S菌水洗57次滤纸吸干试验绣球花品种绣球花种类消毒时间需继续进行摸索作组培第步绣球花消毒灭菌探索条件需进步摸索希找更方便更适宜更环保灭菌方法
332 褐化现象
褐化污染玻璃化称植物组织培养三难题控制褐化控制污染玻璃化更加困难常常认褐化否效控制植物组织培养否成功关键植物组织培养中说褐化指外植体诱导初分化者分化程中身组织表面想培养基释放褐色物质培养基逐渐变成褐色外植体进步变褐死亡现象[68]影响外植体褐化两素：外植体身原包括外植体生长状态生理特性等第二外植体培养处环境中包括培养基成分培养条件等外植体部位取材时间外植体受伤程度等等影响植物体否褐化褐化程度组培程中外植体褐化种素作结果效控制褐化外植体选择培养环境关重外植体组织受伤害程度会直接影响外植体褐化发生外植体越切面雨体积率越伤害褐化程度会越切取外植体时候需量减少伤口面积时伤口处量剪切品种整组培程中外植体出现褐化植物种逆境适应性反应适宜培养条件外植体处正常生长状态够效抑制褐化
然已效控制绣球花组培程中褐化现象法完全阻止褐化褐化浪费量原材时间精力等握取材部位取材时间外植体受伤程度培养基配置培养条件关重
333 玻璃化现象
玻璃化指组织培养程中植物嫩茎叶片会呈现半透明状水浸状现象称度水化玻璃苗分化力降低难增殖生根苗种生理失调症目前已报道出现玻璃化苗植物已高达70种着玻璃化产生机理研究深入某植物玻璃化已效控制措施：(1)选择容易玻璃化基型部位做外植体(2)采取改善氧气供应状况通气条件控制温度
适低温处理降低容器相湿度(3)适提高蔗糖含量降低培养基中水分时减少细胞分裂素生长素等方法均减少玻璃苗发生然组织培养中出现问题发生机理控制进行定研究尚未找普遍适行效解决办法成提高组织培养繁殖率增加培养程稳定性障碍问题研究需继续深入找更解决办法 控制措施治标走治植物组织技术发挥更作[69]
334 培养基选择
培养基（Medium）供微生物植物动物组织生长维持工配制养料般包括碳水化合物含氮物质机盐（包括微量元素）维生素水等培养基含抗菌素色素培养基土栽培营养液发展某种意义说模拟土壤初培养基简单马铃薯浸出液土豆汁着植物生理学生物化学研究深入培养基越越复杂成分越越支持物(：琼脂明胶)发现应培养基培养基中时固体培养基诞生固体培养基组织培养基中常种培养基类型工合成培养基通常包括量元素微量元素铁盐机复合物糖支持物植物植物生长调节剂量元素微量元素通常机盐代铁盐通常螯合铁形式出现机复物通常包括氨基酸代谢载体维生素等糖采蔗糖者葡萄糖支持物般采高分子交联糖链(聚半乳糖硫酸酯)类物质量配少年发展中已基形成干模板例试验室中常MSB5Nicher培养基原料分两类：应肉汤马铃薯汁等天然成分配制称天然培养基应化学药品配成标明成分称合成培养基综合培养基化学试剂中培养基合成培养基液体培养基易长期保现均改制成粉末培养基配制原料求贮存保方面稍般培养基受热吸潮易细菌污染分解变质般培养基需防潮避光阴凉处保存需严格灭菌培养基（组织培养基）果需较长时间贮存必须存放26℃冰箱[70]愈伤组织基础培养基种常见：MS12MSB5等根培养植物培养基样陆碧云[71]陈笑蕾[72]等12MS培养基蔡新玲[73]姚晓[74]等B5作培养基
培养基着处试验愈伤组织培养中选3中培养基分：MS12MSB5愈伤组织培养培养基种然试验选三种培养基培养愈伤组织效果太区绣球花愈伤组织培养培养基需进步探索挖掘出更适合培养绣球花愈伤组织培养基生根诱导腋芽诱导培养基中选基础
MS培养培养基未尝试种培养基绣球花影响深入研究
335 植物生长调节剂选择
生长调节子植物植物生长调节剂植物组织培养中发挥生物学效力强培养素工调控组织培养关重存植物组织培养工作者意植物植物生长调节剂组织培养中具动摇核心位[75]植物植物生长调节剂包括五类：生长素类细胞分裂素类赤霉素乙烯类生长抑制素类植物组织培养中常生长素细胞分裂素生长素细胞分裂素作组织培养中十分重谓植物生长调节剂杠杆：生长素生物学效应高细胞分裂素时诱导植物组织脱分化根原基形成细胞分裂素效应高生长素时诱导植物组织分化芽原基形成生长素包括种1奈乙酸吲哚乙酸24D等生物学效应着微妙总体效应致细胞分类素包括6苄基腺嘌呤6糠氨基嘌呤玉米素等植物植物生长调节剂培养基中量通常00110 mgL间变化细胞分裂素浓度非生根培养中生长素值指出植物植物生长调节剂量考虑组织源植物生长调节剂含量生理学周期效应换言植物生长调节剂生物学效应组织源植物生长调节剂工添加外源植物生长调节剂效应总准确握源植物生长调节剂外源植物生长调节剂协作效操作植物生长调节剂杠杆合理利植物植物生长调节剂做植物组织培养[76]
试验愈伤组织中选常见4种植物生长调节剂生根培养中选三种植物生长调节剂种子萌发中选三种植物生长调节剂植物生长调节剂种类单纯种植物生长调节剂太狭隘更况种植物生长调节剂刺激试验中培养愈伤组织始终法愈伤率达100生根培养中生根率已达100生根培养芽诱导培养中选3种植物生长调节剂4种梯度果选植物生长调节剂种类梯度分更细点够进步完善绣球花蓝尼康’组培体系芽诱导培养中芽诱导率高达92未达100然绣球花蓝尼康’组培体系已初步建成需选更植物生长调节剂种类尝试组合体系进步完善绣球花组培需未停探索
336 培养基pH值
培养基pH值通直接影响培养基酸碱度培养物培养基中营养成分吸收调控组织培养程中发生种生化反应影响植物组织培养效果[77]廉家盛[78]等研究发现蓝莓美登组织培养程中适宜pH范围5458培养基pH值增殖分化显著影响张玉红[79]等研究影响黄檗快速繁殖培养条件时发现pH值影响增殖壮苗张延红[80]等通较温度培养基pH值黄芪组培苗叶片生长影响结果发现：较低温度黄芪叶片生长速度快呈绿色培养基适宜pH58pH值高时组培苗短枝生长缓慢叶片枯黄
34 炼苗移栽
炼苗保护苗木情况采取空气流通降温适控水等措施幼苗强行锻炼程定植够迅速适应土良环境条件缩短缓苗时间增强低温风等抵抗力提高苗木生存力组培苗生活组培室中非常脆弱移栽外界时候炼苗显格外关重
选生长旺盛根系发达组培苗提高绣球花炼苗成活率生根少生长矮绣球花移栽温室棚时候格外脆弱容易抵抗外界刺激失生理机
生根根系基发育培养瓶移室外遮阴蓬温室中进行强光闭瓶练苗520 d左右遮阴度宜5070培养容器盖子塞开然光进行开瓶练苗37 d正午强光南方光较强区注意采取措施阴蓬温室避免灼伤苗果开盖容器中培养超1周般会引起含蔗糖培养基污染问题开瓶炼苗分阶段进行首先松盖（塞）两天然部分开盖两天完全盖种方法相湿度十分低屋特处培养容器开口影响开盖速度开口瓶盖应开口瓶盖速度慢试苗移栽组织培养程重环节工作环节做会造成前功弃试苗琼脂培养基中移出时长镊子心取出彻底清洗干净根部（残留蔗糖营养会成潜致病微生物生长培养基洗净容易引起移栽苗烂根死亡）避免损坏根系直接移栽
0103高锰酸钾菌灵等杀菌剂溶液中清洗然清水清洗移入苗床盆钵水清洗菌灵溶液浸泡1030 min移栽栽淋足定根水炼苗塑料薄膜（玻璃）温室遮阴网室进行温室温棚时应注意设置通风口防止浇水高温引起萎蔫高湿引起烂苗生长基质应具适合pH值空隙良排水通气性般珍珠岩蛭石草炭土腐殖土例1：1：05砂子：草炭土腐殖土1：1基质前应高压灭菌少时烘烤消灭中微生物移出试植株极容易感染病生长环境卫生状况病害防治移栽否成功十分关键通常生长基质培养容器苗床进行消毒处理采新培养容器聚乙烯薄膜效果必时喷施稀杀菌剂移出试苗般炼苗前4周遮阴达5090采喷雾洒水保持定湿度（85左右）逐渐降低湿度增强光湿度降低幅度光增加量植物定总体应促老叶缓慢衰退时产生新叶果降低增加快会叶片褪绿灼伤缓苗期延长甚导致移栽苗死亡植株够忍受高光水利温度应低20℃达2530℃温度湿度高易滋生杂菌造成苗霉烂根茎处腐烂应温度加控制遮阴调节湿度（喷雾塑料薄膜覆盖）助控制温度炼苗时适施量微量元素采1412 MS培养基溶液移栽定期施肥保持苗木旺盛生长具体施肥方法（顶部喷施掺入基质）施肥量植物异[8182]
移栽般春季进行果北方早春冬季较冷时节需移栽苗床铺电线进行加温促进根系功恢复直新叶形成止较难移栽植物先沙床营养盘移栽移营养袋中培育壮苗直接移入营养袋中直长成定规格（定高度粗度新叶数）病害壮苗田中定植进行体外生根培养直接试外瓶外生根炼苗相结合根苗进行直接移栽种方法某植物行效节约成需环境条件生根试苗炼苗求相特需注意湿度光温度生根基质移植前时需生长素诱导生根处理
4 绣球花品种蓝尼康’胚抢救繁育技术研究
植物胚细胞结构具形成新体力胚特殊细胞合子胚活体细胞发生胚具根两级结构茎原基结构正常胚较结构够发育成完整植物花草红豆杉等木植物种巨潜胚具特殊结构正常亲合条件幼胚够发育成熟展现潜力情况早期应该判断发育否收抑制具价值基型确保够时进行胚抢救
41 材料方法
411 材料处理
种子授粉子房壁膨子房壁变黄采摘水洗脱壳成熟种子杂质菌水浸泡12h洗风干置0℃冰箱中备
挑选干燥饱满种子先放入75乙醇消毒30 s然菌水洗35次01升汞进行灭菌菌水洗57次滤纸吸干菌条件处理种子接种培养基中进行培养
412试验方法
种子培养培养条件选MS培养基添加NAAIBA6BA三种植物生长调节剂05 10 15 20 30 mgL五种梯度蔗糖30 gL琼脂6 gLpH值61光强度15002000Lx培养温度26℃种培养基接种5瓶瓶接10种子重复3次培养15 d30 d记录生长状况
42 结果分析
421 种子萌发试验
表41知着植物生长调节剂浓度增加绣球花蓝尼康’种子萌发时间萌发率逐渐增加IBA6BA浓度达10 mgL种子萌发天数逐渐变长NAA浓度达15 mgL时候种子萌发天数达短11 d着植物生长调节剂浓度增加绣球花种子萌发率逐渐变高三植物生长调节剂浓度均达15 mgL时候种子萌发率均达高点NAA达82IBA达
836BA达78三种植物生长调节剂相互较6BA植物生长调节剂绣球花种子萌发刺激相较薄弱综合考虑素适宜绣球花种子培养培养基应MS+NAA 15 mgL种子萌发天数11 d萌发率82调节植物生长调节剂绣球花种子萌发率达100更促进绣球花种子萌发需更时间进行探索
表41 植物生长调节剂浓度绣球花种子萌发影响
Table 41 The influence of different kinds of concentration for plant growth regulators on the seed germination of Hydrangea
植物生长调节剂
种子萌发天数（天）
种子萌发率（）
NAA植物生长调节剂浓度（mgL）
05
17±05cd
72±11g
10
14±17ef
76±11def
15
11±05g
82±23ab
20
15±11de
81±11abc
30
20±05b
70±11gh
6BA植物生长调节剂（mgL）
05
13±17fg
73±30fg
10
11±05g
77±11de
15
18±25bc
83±30a
20
18±05bc
82±30ab
30
20±05b
72±30g
IBA植物生长调节剂（mgL）
05
16±05cd
73±11fg
10
12±05fg
79±23bcd
15
18±05bc
78±11cd
20
20±15b
74±20efg
30
26±15a
68±20h
根表42表43出NAA6BAIBA绣球花种子萌发着极显著影响开始植物生长调节剂绣球花愈伤组织培养面绣球花生根影响出绣球花植物生长调节剂刺激表现格外显著
表42 绣球花种子萌发天数结果方差分析
Table42 The variance analysis on the result of seed germination’s time
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
种子萌发率
434400
4
108600
108600
极显著
6BA
种子萌发率
213600
4
53400
53400
极显著
IBA
种子萌发率
417600
4
104400
47455
极显著
表43绣球花种子萌发率结果方差分析
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
种子萌发天数
158400
4
39600
1800
极显著
6BA
种子萌发天数
198000
4
49500
22500
极显著
IBA
种子萌发天数
158400
4
39600
24750
极显著
Table43 The variance analysis on the result of seed germination rate
43 问题讨
胚抢救( Embryo rescue)指营养生理原造成难播种成苗发育早期阶段败育退化胚进行早期分离培养胚抢救果树早熟类型品种选育年核类果树品选育采取效手段成功方法1933年 Tukey 成功培养甜樱桃幼胚成胚培养里程碑 1987年 Ramming 利胚挽救技术已成功培育出早熟桃核葡萄现胚抢救技术领域应越越广泛胚抢救中培养基培养难掌握需量试验进行摸索条件李泽谭晓风[83]等葡萄桐’种胚试材做组培试验试验中选MS12MS14MSWPM培养基出12MS培养基油桐种胚生体系建立佳培养基研究选MS种培养基培养基种类单培养选择中足处培养基蓝尼康’胚抢救影响研究试验选3种植物生长调节剂5种梯度然法种子萌发率达100种组合培养基植物生长调节剂会绣球花蓝尼康’胚抢救培养基探索起促进作
5 全文结创新点研究展
51 全文结
1扦插试验结果表明NAA绣球花蓝尼康’生根长度生根数目甚绣球花成活率着影响适合蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm500 mgL3种植物生长调节剂适宜绣球花扦插植物生长调节剂NAA成活率93均生根数目79根均生根长度21 cm适宜绣球花扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根均生根长度23 cm
2绣球花蓝尼康’叶片佳消毒方法：水洗3060 min然超净工作台75％乙醇消毒菌水洗外植体45次01升汞灭菌14 min接着菌水洗57次滤纸吸干接种初代培养基中进行培养
3绣球花蓝尼康’组织培养试验中佳愈伤植物生长调节剂配MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL接种12 d愈伤组织长出诱导愈伤率达8916佳生根培养基：MS+IBA10 mgL生根率100均生根时间67d生根长度208 cm适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL定芽诱导率925外植体定芽均数量33
4胚抢救繁育技术中种子萌发培养基：MS+NAA15 mgL11d种子开始萌发种子萌发率达82
52 创新点
1．次试验首次研究绣球花品种蓝尼康’繁殖技术
2 研究首次研究绣球花品种蓝尼康’胚抢救试验获绣球花蓝尼康’组培苗
53 研究展
研究扦插组织培养胚抢救三方面进行发现选择合适消毒方式调节种类植物生长调节剂配蓝尼康’组织培养成功关键扦插方面已筛选出适合蓝尼康’扦插基质植物生长调剂浓度扦插方面已筛选出适合
蓝尼康’愈伤组织生根腋芽诱导较佳培养基配方胚抢救方面筛选出适合蓝尼康’种子萌发植物生长调节剂浓度完善绣球花繁育技术体系提供数
参考文献
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附录1：
MS培养基母液配制
The MS culture medium mother liquor preparation
母液名称
药品名称
原配方规定量（mgL）
扩倍数
配制母液称取量（g）
母液体积（ml）
配1升培养基吸取量（ml）
量
元
素
NH4NO3
1650
10
165
500
50
K NO3
1900
19
KH2PO4
170
17
CaCl2·2H2O
440
44
MgSO4·7H2O
370
37
微
量
MnSO4·H2O
223
200
446
500
25
元
素
ZnSO4·7H2O
86
172
H3BO3
62
124
KI
083
0166
Na2MO4·2H2O
025
005
CuSO4·5H2O
0025
0005
CoCl2·6H2O
0025
0005
铁盐（棕色）
Na2EDTA
373
100
373
250
25
FeSO4·7H2O
287
287
机营养
烟 酸（Vpp）
05
100
005
250
25
盐酸吡哆醇（VB6）
05
005
盐酸硫胺素（VB1）
01
001
甘氨酸
2
02
肌 醇
100
10
附录2：
B5母液配置表
Fig62 The B5 culture medium mother liquor preparation
化合物名称
分子式
分子量
标准量（mgL）
扩倍数
称取量（mg）
定容体积（ml）
升抽取量（ml）
量
硫酸铵
(NH4)2SO4
132
134
100
13400
2000
20
硝酸钾
KNO3
10111
2500
250000
七水硫酸镁
MgSO4·7H2O
24647
250
250000
四水磷酸二氢钠
NaH2PO4·4 H2O
192
150
15000
钙盐
二水氢化钙
GaCI2·H2O
14702
150
100
1500
1000
10
铁盐
七水硫酸亚铁
FeSO4·7H2O
27802
278
100
2780
2000
20
乙二胺四乙酸二钠
Na2EDTA
37225
373
3730
微量
碘化钾
KI
16601
075
200
150
1000
5
硼酸
HBO3
6183
30
600
七水硫酸锌
ZnSO4·7H2O
28754
20
400
二水钼酸钠
NaMoO4·2H2O
24195
025
50
水硫酸锰
MnSO4·1H2O
16901
10
2000
五水硫酸铜
CuSO4·5H2O
24968
0025
5
六水氯化钴
CoCI·6H2O
23793
0025
5
机
盐酸硫胺素
C12H11CIN4HCI
33727
10
100
1000
500
5
盐酸吡咯醇
C8H11O3NHCI
20564
10
100
烟酸（VB3）
NC5HCOOH
12311
10
100
机醇
肌醇（环已六醇）
C6H12O6
18016
100
100
10000
500
5
附录3：试验相关图片
图13 扦插实验成果图
Fig 13 The cutting experiment result map
图47 愈伤组织时期成果图
Fig 47 The callus of each period the result map
图811 生根培养时期成果图
Fig 811 The take root culture results in different historical periods
图1214 胚抢救实验时期成果图
Fig 1214 The experimental results of various periods figure embryo rescu
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文题目：绣球花蓝尼康’快繁技术研究
学位级： 硕士
学科专业：森林培育
研究方：
文编号：
文提交日期：2017年4月
摘
绣球属(Hydrangea L)虎耳草科中具重观赏价值木属约85种分布亚洲东部东南部北美洲东南部中美洲南美洲西部国46种
10变种南部海南东北部黑龙江吉林西北部新疆等省区外全国均分布产秦岭南尤西南部东南部分布种类完善绣球花繁育技术体系国外引进优良品种绣球花蓝尼康’试材扦插组织培养胚抢救三方面绣球花品种进行试验试验结果进行分析讨 研究结果：
1扦插试验结果表明萘乙酸绣球花蓝尼康’生根长度生根数目甚绣球花成活率着影响适合蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm500 mgL3种植物生长调节剂适宜绣球花扦插植物生长调节剂NAA成活率93均生根数目79根均生根长度21 cm适宜绣球花扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根均生根长度23 cm
2绣球花蓝尼康’叶片佳消毒方法：水洗3060 min然超净工作台75％乙醇消毒菌水洗外植体45次01升汞灭菌14 min接着菌水洗57次滤纸吸干接种初代培养基中进行培养
3绣球花蓝尼康’组织培养试验中佳愈伤组织诱导培养基配方： MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL培养12 d愈伤组织长出诱导愈伤率达8916佳生根培养基：MS+IBA10 mgL生根率100均生根时间67 d生根长度20 cm适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL定芽诱导率925外植体定芽均数量33
4胚抢救繁育技术中种子萌发培养基配方：MS+NAA15 mgL11d种子开始萌发种子萌发率达825
关键词：绣球花扦插组织培养胚抢救ABSTRACT
Hydrangea L is a woody plant with an important ornamental value in the Saxifragaceae with totall 85 kinds of varieties distributing in the east to southeast of Asia southeast of North America to the central America and west of south America While in our country there are 46kinds of varieties with 10 variations which is distributed all around China except the southern hainan northeast of heilongjiang jilin northwestern of xinjiang and other provinces It is mainly produced in the south of Qinling Mountainsespecially from its southwest to the southeast with many kinds of varieties The paper analyze on the results of experimental on three levels as
cuttage and tissue culture and embryo rescue of Hydrangea macrophyllaon’ using a good variety of Hydrangea macrophyllaon’ which is imported abroad in order to perfect the propagation technique system of Hydrangea macrophyllaon’ Results as below
1 The experiment on cuttage shows it is the NAA acid that has a big impact on the root length root number and even the survival rate of Hydrangea macrophyllaon’ It is the pearlite that is fit for its cuttage matrix with sand 11survival rate as 85 average root number is 76 and the root length is 26 cm It is the NAA that is the best suitable to its cuttage among three kinds of plant growth regulator of 500mgL with survival rate 93 the average root number 79 average root length 21 cm while the NAA concentration is 600mgLsurvival rate is 93 the average root number is 83 average root length is 23 cm
2 The best method of disinfection for the leaves of Hydrangea macrophyllaon’ is to use the water to swatch it for 3060 min then put it into the 75 ethyl alcohol for sterilization and flush the explant 4 to 5 times using sterile water Then use mercury with the concentration of 01 to sterilize for 14min on the super clean benchAt last flush its leaves 4 to 5 times using sterile water dry it by filter paper and inoculate to the original medium for culture
3 In the experiment on the tissue culture of Hydrangea macrophyllaon’the best culture medium component by callus induction is MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL there is a growing callus after 12d with the callus induction rate up to 8916 The best rooting medium is MS+IBA10 mgL with rooting rate 100 average root time 67d root length 20cmwhile the best optimum culture medium of axillary bud induction for it is MS+6BA 10 mgL with the inductivity of adventitious bud 925and each of the average number of explant adventitious bud 33 pieces
4 The seed germination medium on the embryo rescue breeding technology is MS+NAA15 mgL seeds begin to sprout after 11d with the germination rate up to 825
Key words Hydrangea cuttage tissue culture embryo rescue
目 录
摘 I
ABSTRACT II
1 绪 1
11 绣球花形态特征生态性 1
111 形态特征 1
112 生态性 1
113绣球花观赏特性途 1
12 国外绣球花快繁技术研究现状 2
121国外研究 2
122国研究 2
13 国外组织培养技术研究 4
131国外研究 4
132 国研究 6
14 研究目意义 8
141研究目 8
142研究意义 8
2 绣球花品种蓝尼康’扦插繁育技术研究 10
21试验概况 10
22 材料方法 11
221 材料处理 11
222试验方法 11
23 结果分析 12
231扦插基质蓝尼康’扦插影响 12
232植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响 13
223 NAA浓度蓝尼康’扦插影响 14
24 讨 15
241 基质选择 15
242 植物生长调节剂选择 15
243 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响 16
3 绣球花品种蓝尼康’组培繁育技术研究 17
31 材料方法 17
311 材料 17
312 试验方法 17
32 结果分析 20
321 消毒方式外植体影响 20
322愈伤培养基优化 21
323植物生长调节剂绣球花生根影响 25
324植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响 27
331外植体消毒 28
332褐化现象 28
333玻璃化现象 29
334培养基选择 29
335植物生长调节剂选择 30
336培养基pH值 31
34 炼苗移栽 32
4 绣球花品种蓝尼康’胚抢救繁育技术研究 34
41材料方法 34
411材料处理 34
412试验方法 34
42结果分析 34
421种子萌发试验 34
43问题讨 36
5 全文结创新点研究展 37
51全文结 37
52创新点 37
53研究展 37
参考文献 39
附录1： 44
附录2： 45
附录3：试验相关图片 46
1 绪
绣球(Hydrangea macrophylla(Thunb) Ser)绣球科属中属全世界约85种分布东亚南北美洲国46种10变种南部海南东北部黑龙江吉林西北部新疆等省区外全国均分布产秦岭南尤西南部东南部分布种类[13]明清时代中国江南园林栽培1789年Joseph Banks绣球花引入英国名八仙花花朵艳丽姿态华美立成世界备受欢迎园艺观赏植物
11 绣球花形态特征生态性
111 形态特征
落叶灌木者乔木高3 m枝条开展冬芽裸露叶生卵形卵状椭圆形表面暗绿色背面星状短柔毛叶缘锯齿夏季开花花枝顶集成球状聚伞花序边缘具白色中性花花期67月花径1820 cm全部位孕花花初开带绿色转白色具清香形态绣球命名绣球花叶具短柄生叶片肥厚光滑椭圆形宽卵形先端锐尖长1025 cm宽510 cm边缘粗锯齿[46]
112 生态性
绣球花喜荫喜温暖气候适合绣球生长温度1828 ℃冬天温度低5 ℃花芽分化需57 ℃条件68周20 ℃温度促进开花花开维持16 ℃便延长观花期高温花朵褪色加快华北区盆栽温室冬绣球花喜欢生活湿润富含腐殖质排水良酸性土壤[78]
113绣球花观赏特性途
园林途：绣球花花型丰满绣球花色美长江流域著名观赏植物园林中配置稀疏树荫底者林荫道旁边片植阴坡阳光求高适宜栽植阳光较差面积庭院中[9]建筑物入口处植两株建筑物列植排丛植庭院角非常理想绣球花更适植花篱花境整花球剪瓶插室等点缀品花球悬挂床帐更加觉雅趣绣球花性强耐寒抗性强少感染病虫害仅作优良观赏植物作中高档盆花供应市场绣球花种植游路边缘建筑物入口丛植株草坪角散植常绿树前美观型庭院中仅植孤植盆栽绣球花常作室布置窗台绿化家庭养花材料
[10]
医疗途：美国研究员发现 源绣球属植物根系种药物 体免疫疾病治疗 例风湿性关节炎发性硬化症炎症性肠疾病1型糖尿病湿疹牛皮癣等中药处方中绣球根已数百年历史该项研究细胞分子医学计划波士顿童医院免疫疾病研究哈佛牙科学院研究员完成研究结果发表2009年6月5日出版Science杂志[11]绣球花4种制剂鼠疟明显抑制作总碱叶水煎膏床验证治疗疟疾病41例效率853[12]绣球花根叶花均治疗疟疾抗疟解热作果剂量引起呕吐功效副作颇似常山作稍弱通常单草果搭配肺热喉痛清热解毒效外煎汤洗研末涂挫治疗疥癣肾囊风等清热止痒功效
12 国外绣球花快繁技术研究现状
121国外研究
绣球原产日中国四川带1736年引种英国欧洲荷兰德国法国栽培较普遍花店红蓝紫等色绣球品种庭园建筑物前栽绣球少德国兰普·琼格弗拉（Rampp Jungpflanzen）公司世界著名生产绣球企业绣球新品种培育生产单位次荷兰门·范文公司色列亚格苗圃绣球生产企业国家没绣球花培养技术全面推广没适宜套绣球花快繁技术[1315]
122国研究
目前国绣球花快繁技术研究初步试验阶段没形成种适宜绣球花快繁技术年国广州海等欧洲日引进绣球花品种利快繁技术进行快速繁育没推广应
2007年3月国外优良绣球属3品种引入德州学院农学系花卉基试种成功[16]绣球花孕性进行2种方法快繁研究基质扦插进行繁殖研究基质生根长度生根数量影响研究采配珍珠岩灰炭蛭石等扦插基质筛选出佳扦插基质[1718] 二绣球花组织培养研究通6BANAA浓度样调配出培养基绣球花初代培养继代培养生根培养筛选出佳浓度培养基[1920]
邢合龙原会营马开等绣球花组织培养研究中认部位外植体初代培养效果中较合适外植体绣球花茎尖茎尖身污染程度低部位嫩叶片外界接触时间较长然叶片污染少叶片外植体中容易分化形成愈伤组织部位更快速形成定芽选茎尖位外植体[2122]外植体消毒重环节消毒时间短完全杀死病毒消毒时间长会杀死外植体消毒时间针外植体选较适宜时间继代培养中植物生长调节剂配侧芽形成效果植物生长调节剂少促进侧芽形成生长会抑制侧芽形成生长[23]
国山东德州学院农学系薛玉剑金桂芳苏荣存等[24]绣球花扦插繁殖中指出：例基质绣球花扦插影响珍珠岩蛭石泥炭三种材料配置绣球花扦插基质进行扦插研究没佳扦插基质
欧美日等国家植物学家园艺学家早广泛展开研究绣球花快繁技术深入研究利快繁技术量繁育绣球花栽培[25]止全球绣球花品种约85种中国占46种63％然中国品种繁没量作观赏花卉进行培养中国绣球花培养已远远落国家中国需加快绣球花新品种引进应推广仅丰富中国园林植物种类时够增加中国物种样性稳固生态系统等方面着巨作
目前中国绣球花研究基停留传统栽培品种快繁技术研究外新品种快速繁殖做研究次研究绣球花品种蓝尼康’曹基武老师美国乔治利亚学引进中国美国理气候条件存差异绣球品种蓝尼康’引入中国样更存活样快速繁殖中国应价值等问题研究中针述绣球花快速繁殖问题进行研究提高引入品种观赏价值筛选出适合南方城市应推广优良品种具重意义
13 国外组织培养技术研究
131国外研究
植物组织培养快繁技术指菌条件离体植物根茎叶花等外植体原生质体培养工配置培养基面予适培养条件生长成完整植株手段[26]培养物脱离植物母体玻璃瓶中进行培养做植物离体培养程：外植体脱分化愈伤组织愈伤组织脱分化生长点生长点生长发生根茎叶者胚状体然胚状体生长成完整植株情况分化愈伤组织阶段直接发生脱分化细胞[27]组织培养技术中植物获取营养生长环境条件十分良加速育种缩短繁殖程周期够缩短进行植物组织培养技术时候获种水性系例细胞组织器官植株材料统单体遗传性非常致果试验够避免许误差试验材料纯度非常高减少试验重复影响试验精度[28]植物组织培养(Plant tissue culture)20世纪初植物生理学基础发展起门新兴技术广义组织培养指菌条件利工培养基适宜条件植物器官组织细胞原生质体培养Gambogr根培养植物材料组织培养分5种类型愈伤组织培养悬浮细胞培养器官培养(胚花药子房根茎培养等)茎尖分生组织培养原生质体培养[29]
美国日研究推广糖培养微繁殖技术称光养微繁殖技术代表 [30]植物组织培养种全新概念植物非试快繁技术体系中快繁种环境控制技术生物技术机结合植物组织培养方法次创新现国外研究快繁技术简介：采环境控制手段CO2代传统组织培养方法中糖作植物体碳源通工控制提供适宜植株生长光温水气营养等条件促进植株光合作促进植物生长发育[31]适植物微繁殖利植物组织繁育植株程中目前3种生长方式利植物体光合作进行然生长(养)二植物体培养基中糖进行异养生长(异养)三植物体培养基中糖工光时进行异养生长养生长(混养)现植物组织培养微繁殖数第三种方式进行培养基中加入糖予定工光样培养条件植株长期培养基中糖进行异养混养生长导致叶片发育差气孔开闭功差叶片叶绿素含量降低终植株丧失光合作力者环境条件抑制光合力降低糖培养微繁殖技术重特征培养基中糖
CO2代糖成植物体碳源减少微生物污染促进植株养进行光合作促进植株快速生长发育便短时间获量遗传均匀致植株[32]单容器CO2浓度远远满足植株生长需求需输入CO2般言输入方式两种：然换气强制性换气然换气培养室空气通培养容器微缝隙透气孔进行培养容器外气体交换强制性换气指利机械力作进行培养容器外气体交换强制性换气条件生长植株般然换气条件生长[33]
通科研员研究表明糖培养微繁殖技术改革传统糖瓶子作碳源营养生存空间技术方法增加植物生长生化反应需物质流交换循环促进植株生长发育实现优质苗低成生产该技术较传统组织培养具明显优势：培养周期缩短种苗驯化期间成活率幅度升复杂驯化程简化组培生产工艺简单化流程缩短技术设备集成度提高降低操作技术难度劳动作业强度更易规模化生产推广应节省投资降低生产成传统微繁殖技术相种苗生产成均降低30[3435]述介绍快繁日应较国适应田生产需降低快繁成采常规快繁开发技术设备样适严格快繁[36]目前国外种快繁技术综合发展集育苗成广义快繁技术
植物组织培养历史植物细胞全性理提出证明广泛应历史年试验结果证明探究基植物体部位进行离体培养生完整植株[37]植物组培养试验奠定定基础时植物组织培养技术发展成现代生物技术关重组成部分：植物组织培养技术诞生发展建立植物细胞全性理提出1839年细胞学家ShcelidenShcwnan提出细胞学说中述果具备条件机体样细胞应独立生存发展1902年德国著名植物生理学家Haberlandt发表关植物细胞培养第篇文文章中提出植物细胞具全性(totiPoetnt)设想单细胞工培养通细胞分裂形成完整植株
具原植物全部遗传性[38]1904年Hanning首先成功培养萝卜辣根菜胚紧接着1922年KotteRobbins分培育出离体根尖茎尖培养[3940]Haberlandt1934年white培养基中培养番茄离体根尖期间32年时间里植物组织培养技术没什进展进行初步探索1934年荷兰植物学家Went通试验探究发现生长素吲哚乙酸IAA少学者相继发现萘乙酸24D吲哚丁酸IBA等工合成生长素类首先认识类生长调节物质生长素植物组织培养推动研究进展[41]年White番茄根建立第活跃生长性系根离体培养试验首次获真正成功1958年美国植物学家斯蒂瓦特等胡萝卜体细胞利液体悬浮培养法获完整植株[4243]组织培养技术提供发展台植物组织培养性繁殖部分出现越越受世界国林业工作高度重视性系林业特点Carson[44]做详细报道受世界国学者认[45]19581959年ReinerSetward分报道胡萝卜愈伤组织单细胞推出段时间项发明成已验证1902年Haberlandt提出细胞具全性设想提供量试验组织培养深入发展奠定基础[46]二十世纪60年代植物组织培养技术发展极迅猛方面前停探究试验建立理技术基础方面植物组织培养开始走规模应阶段通良种繁育常规育种遗传工程技术相结合植物遗传改良发展中发挥十分巨作方面已取非常客观济效益类生产生活提供效帮助1960年Cocking等真菌纤维素酶分离原生质体获成功激发原生质体培养热情[47]1962年Kanta完善试传粉受精技术克服发生花粉柱头间两性亲合现象
132 国研究
1945年国科学家崔澄美国科学家斯柯格进行试验利植物生长调节剂处理愈伤组织成功诱导出器官分化[4849]国植物组织培养创始罗士韦教授中国科学院海植物生理研究开展组织培养研究程度推进国植物组培技术研究组培技术全国发展极迅速全国许农林业科学院高校开展植物组培研究工作研究探讨植物组培环境时种农作物园艺植物济林等千种植物进行研究取巨成
[50]时间组培试验方面取巨进步郑文静等总结植物组织培养中遇常见问题解决方法吴毅明通化学纤维纸卷沙子蛭石等代般琼脂作培养基够提高根生活环境促进植物生根[51]刘思九利暴露培养法敞口培养器中添加特制粉沫状灭菌材料够覆盖培养基外植体减少污染率利特制装置补水够促组培苗够长势良炼苗中提高成活率加植株抗性[52]肖玉兰等研究糖箱式培养法够降低植组培生产成时够促进植物增长
着快繁殖技术茎尖培养脱毒技术成熟20世纪90年代国家建立批苗木繁殖基马铃薯草莓香蕉甘蔗桉树白杨鲜花现商业苗生产系统具良济效益社会效益形成兰花业香蕉业[53]例1986年1992年春季中国香蕉生产香蕉组织培养苗总面积达18万hm2中国香蕉组织培养苗总量高达约1亿占23马铃薯作重济作物病毒苗产量达60％病毒苗生产已越越知名企业百事乐公司中国农业科学院建立病毒马铃薯组织文化研讨会完全统计国约二千组织培养植物组织培养技术已建成成千万株植物[54]时着文化断扩较型国企业组织培养组织培养规模海南新会工厂热带植物组织培养研究中心新海南万亨种子公司杨凌农业高新技术开发区文化中心等设施技术断完善[55]目前新会组织文化中心生产线已达动化半公司引进国外新技术设备植物年生产力达数千万株满足市场需求
快速传播技术低投入高效率高质量生产科研已广泛应尤退耕林城市绿化园林花卉蔬菜茶叶桑树济植物需产生量幼苗果传统技术难满足生产需求[56]非试快速传播技术短期产生量高品质遗传特性稳定商品苗导致国家绿化济发展起着关重作特加入WTO农业挑战非常严峻果提高生产力水先进农业设备技术提高产品质量降低生产成终消市场竞争先进实农业新技术唯武器赢市场竞争植物非试快速繁殖技术国外生产成低动化程度高工厂动化新苗圃技术推广育苗技术发展场新革命会带巨济效益社会效益
14 研究目意义
141研究目
绣球花花型丰满绣球花色美长江流域著名观赏植物园林中配置稀疏树荫林荫道旁片植阴坡阳光求高适宜栽植阳光较差面积庭院中建筑物入口处植两株建筑物列植排丛植庭院角理想更适植花篱花境整花球剪瓶插室等点缀品花球悬挂床帐更觉雅趣绣球花性强耐寒抗性强少感染病虫害作优良观赏植物作中高档盆花供应市场次研究仅够完善绣球繁育技术体系丰富园林景观植物做出贡献
142研究意义
城市绿化景观提供更选择植物丰富景观效果二次研究绣球花品种蓝尼康’曹基武老师美国乔治利亚学引进中国美国理气候条件存差异蓝尼康’引入中国快速繁殖中国应价值等问题研究中针述绣球花繁殖问题进行研究提高引入品种观赏价值筛选出适合南方城市应推广优良品质具重意义
15 技术路线
研究技术路线：
绣球品种蓝尼康’快繁技术
浓度植物生长调节剂实验
愈伤培养基优化
消毒时间研究
生根培养基优化
腋芽诱导培养基优化
组织培养
浓度萘乙酸处理
植物生长调节剂种类
基质配
扦插繁殖
胚抢救
佳组培培养基配方
佳扦插基质激素配方
佳种子萌发配方
完善绣球品种蓝尼康’繁育技术体系
图11 文技术路线图
Fig 11 The technology roadmap
2 绣球花品种蓝尼康’扦插繁育技术研究
扦插育苗选植物枝叶根等营养器官部分作繁殖材料插入土壤泥炭蛭石等基质中促生根发芽生长完整植株育苗方法绣球花通嫩枝扦插实现规模化繁殖生长素类植物生长调节剂处理促进插条生根缩短生根时间提高成活率[5758] 生长素插条没参机物重新建成促插条段变成吸收养分中心起着促进物质交换调配插条养分作外生长素解基抑制提高mRNA合成促进种酶合成诱导根原始体发端试验表明生长素处理插条仅利根原始体诱导够促进定根生长[59]作效果具两重性作物筛选出合适处理浓度处理方法方保证应效果[60]薛玉剑等[61]研究基质配绣球扦插生根影响未植物生长调节剂种类浓度进行系统研究周余华等[62]研究类生长调节剂基质圆锥绣球扦插育苗影响然关绣球花扦插技术问题正科研员断探索中解决品种间基型差异品种植物培养条件差异[63]关绣球花蓝尼康’扦插繁殖育苗未见报道
21材料方法
211实验概况
扦插点：扦插试验湖南长沙中南林业科技学温室完成
试验概况：长沙市位湖南省东部偏北湘江游长浏盆西缘域范围东111°53′～114°15′北纬27°51′～28°41′长沙属亚热带季风性湿润气候气候特征：气候温降水充沛雨热期四季分明长沙市区年均气温172℃白天高温度32℃夜间低温度15℃均温度245℃均年降水般1300 mm空气相湿度80
温室概况：温室温度范围2328℃光室外光2040目前应温室气候环境调控设备机械式遮阳保温拉幕机械式开窗通风设备风机通风设备湿帘降温装置喷雾降温设备明灯补光灯等等设备组合施构成作强度气候环境调节系统例机械式开窗通风设备温室建筑物窗口窗口配置组成然通风系统湿帘降温装置风机温室建筑物中布局组成作强度湿帘降温系统值注意设备采仅某参数调控部分贡献设备采仅种参数调控贡献会影响参数调控湿帘降温装置需风机配合完成功实现机械式遮阳保温拉幕设备时影响光温度调控设备采目温室气候环境进行调节保证气候环境达期准确精确程度
212 材料处理
植物材料蓝尼康’中南林业科技学曹基武教授美国引进移栽中南林业科技学苗圃绣球花扦插枝条均选植物外围生长健壮发育良病虫害1年生枝条采穗时应采粗细量均匀致枝条首先新单面刀枝剪新品种绣球花支柱选取年萌发新枝插穗长8 cm左右然绣球花茎段方切口剪斜方切口剪掉基部部分叶片批新枝20枝先竹签扦插基质表面插洞然迅速插入插穗手插穗周边压实扦插完毕喷壶喷水压紧基质苗床方盖透光率50遮阳网天喷壶喷水1次
213 基质配试验方法
试验设置6种扦插基质表21示6种基质分消毒河沙混合覆盖10 m×30 m苗床浇水透彻进行扦插
2222植物生长调节剂种类试验方法
浓度均500 mgL植物生长调节剂IAAIBANAA溶液浸泡插穗基部5 min然进行统扦插
214 萘乙酸（NAA）浓度处理试验
分601601802003004006009001000 mgLNAA溶液浸泡插穗基部5 min然统扦插
处理均20穗条进行试验3次重复扦插试验均2016年4月30日开始进行年5月30日统计绣球花成活率生根情况
表21 扦插试验基质配方
Table 21 The matrix component for cuttage experiment
试验号
基质配方
1
珍珠岩
2
蛭石
3
沙子
4
珍珠岩：蛭石1：1
5
蛭石：沙子1：1
6
珍珠岩：沙子1：1
22 结果分析
221扦插基质蓝尼康’扦插影响
根表22知：成活率方面组合4组合56次组合13组合2差组合4＞组合56＞组合13＞组合2均生根数目方面组合4组合6优组合组合5次组合13组合2差组合46＞组合5＞组合13组合2生根长度方面组合6组合45次组合13组合2差组合6＞组合45组合13＞组合2表22 基质绣球花扦插影响
Table22 The influences of different kinds of matrix on cuttage of Hydrangea
试验号
成活率（）
均生根数(条)
生根长度（cm）
1
73 3±29c
57 ± 030c
14 ±015cd
2
650±50d
50 ±025d
13 ±015d
3
783 ±29c
56 ±026c
17 ±014c
4
900 ±00a
77 ±030a
23 ±026b
5
833 ±29ab
70 ±020b
22 ±010b
6
850 ±87ab
76±020a
26 ±015a
表中数均值列中字母表示数差异显著(P<005)
根试验出结果进行方差分析见表23：基质绣球花成活率生根长度影响推出选合适基质扦插影响重
表23 基质绣球花扦插影响方差分析
Table23 The variance analysis on the influence of different kinds of matrix to the cuttage of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
基质
成活率
1212500
5
242500
11640
极显著
均生根数目
19868
5
3980
59200
极显著
生根长度
3818
5
0764
26435
极显著
根实验结果分析知：混合基质单种基质更加利蓝尼康’扦插成活率方面组合4组合6间没明显差异均生根数生根长度方面组合6优组合4推出实验中适宜蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm
222植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响
根表24知：成活率方面NAA＞IBA＞IAA均生根数目方面NAA＞IBA＞IAA生根长度方面NAA ＞IAAIBA根实验结果分析知：然植物生长调节剂绣球花扦插影响适宜绣球花扦插生长调节剂NAA500 mgLNAA植物生长调节剂绣球花成活率93均生根数目79根生根长度21 cm
表24 植物生长调节剂绣球花扦插影响
Table24 The influence of different kinds of plant growth regulator on the cuttage of Hydrangea
植物生长调节剂
成活率（）
均生根数（根）
生根长度（cm）
IAA
763±29c
70±047a
16±011b
IBA
860±29b
75±041a
15±011b
NAA
933±29a
79±046a
21±025a
根试验出结果进行方差分析见表25：植物生长调节剂蓝尼康
’成活率极显著绣球花扦插生根长度影响显著蓝尼康’生根长度没影响
表25 植物生长调节剂绣球花扦插方差分析
Table25 The variance analysis on different kinds of plant growth regulator to the cuttage of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
植物生长调节剂
成活率
422222
2
211111
25333
极显著
生根数目
1197
2
0599
2982
显著
生根长度
0596
2
0298
9926
显著
223 NAA浓度蓝尼康’扦插影响
浓度NAA处理蓝尼康’影响情况表26示知：NAA浓度达600 mgL时绣球花生根数达高成活率93均生根方面NAA浓度达600 mgL时均生根数目83根生根长度方面NAA浓度达900 mgL时候生根长度达高25 cm
试验结果分析出：成活率均生根数方面600 mgLNAA明显优浓度NAA生根长度方面然NAA浓度达900 mgL时生根长度达值根表26知900 mgL600 mgLNAA生根长度明显差异出结适宜蓝尼康’扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根生根长度23 cm
表26 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响
Table26 The influence of different concentration of NAA plant growth regulator on the cuttage of Hydrangea
NAA植物生长调节剂浓度mgL
成活率（）
均生根数（根）
生根长度（cm）
60
733±29f
51±083d
14±020e
160
803±50de
55±026d
15±010e
180
830±29cd
57±045cd
17±011de
200
863±29bc
57±046cd
17±011cd
300
883±29abc
64±025c
18±011bc
400
910±29ab
75±050ab
20±015b
600
930±29a
83±050a
23±058a
900
880±29abc
763±045ab
25±020a
1000
753±50ef
73±040b
21±015b
根试验出结果进行方差分析见表27：NAA植物生长调节剂浓度绣球花蓝尼康’生根数成活率生根长度着极影响
表27 浓度萘乙酸处理绣球花扦插生根影响方差分析
Table27 The influence of using different concentration of NAA on the cuttage rooting of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA植物生长调节剂浓度
成活率
1200
8
150000
12462
极显著
均生根数
31833
8
3979
16946
极显著
生根长度
3073
8
0384
18522
极显著
23 讨
231 基质选择
金桂芳等利采珍珠岩泥炭蛭石三种基质配7种扦插基质出结利珍珠岩蛭石泥炭做绣球扦插基质时基质中添加泥炭泥炭中含胡敏酸机营养插穗生根着非常显著促进作 1：1 ：1 复配例显著促进根生长试验出结出种情况绣球花成活率法达100基质绣球花扦插影响仅仅三种基质较增加基质类利三种混合基质绣球花扦插影响进步研究
232 植物生长调节剂选择
生长调节剂蓝尼康’影响实验中选500 mgL浓度试验结果具偶然性试验中选常见3种植物生长调节剂较需量试验验证NAA蓝尼康’扦插佳植物生长调节剂植物生长调节剂蓝尼康’扦插影响需进步研究
233 NAA植物生长调节剂浓度绣球花扦插影响
周新华朱宜春桂尚[64]等研究花黄精组培生根时出结NAA相植物生长调节剂言更促进植物生根魏猷刚周达彪[65]等研究出适宜NAA浓度处理缩短绣球花生根时间提高插穗成活率周洲李永丽[66]等通试验表明NAA浓度欧美杨生根生芽具定影响研究出样结果NAA植物生长调节剂浓度绣球花影响显著NAA绣球花生根长根长度生根数目甚绣球花成活率着影响NAA浓度达定程度时候提高绣球花成活率生长状态植物生长调节剂浓度高会抑制绣球花生长
3 绣球花品种蓝尼康’组培繁育技术研究
植物组织培养技术植物细胞组织器官等菌条件进行培养长出株幼苗培育出幼苗进行切割次培养繁育处量幼苗植物组织快繁技术常规繁殖技术快速受周围良环境影响够时提供量优质苗植物组织培养技术作种基试验技术基础研究手段广泛应农业林业工业等种行业中现代生物技术重组成部分年显示出巨应潜力21世纪初林业生物工程提倡性系林业发展程度取决林木组织培养水植物组织培养技术快速发展林业生物工程研究出现勃勃生机年利林业生物工程选育优质高产抗新品种林木细胞融合原生质体培养单倍体培养体细胞器官培养微生物转化等方面研究均突破
31 材料方法
311 材料
试验材料中南林业科技学苗圃采集绣球品种蓝尼康’叶片带芽茎段
312 试验方法
3121 消毒方式
外植体消毒：外植体水洗60 min中取出放入超净工作台先放入75乙醇消毒30 s然菌水洗35次01升汞进行灭菌菌水洗57次滤纸吸干叶片切成1cm×1cm正方形接种培养基放培养室中培养
3122 愈伤培养基优化
愈伤组织培养培养基选择MS12MSB5三种基培养基MS培养基中添加浓度6BANAA24DIAA培养基类型植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度3方面进行优化愈伤组织培养植物生长调节剂配见表31培养基中加入蔗糖
30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度22℃种培养基接种20瓶瓶接2外植体重复3次培养15 d30 d记录生长状况
表31 愈伤组织培养植物生长调节剂配
Table31 The matching of plant growth regulator on the callus culture
试验号
基培养基
6BA
(mgL)
IBA
(mgL)
NAA
(mgL)
24D
(mgL)
试验号
基培养基
IBA
(mgL)
NAA
(mgL)
1
MS
05
00
00
00
37
12MS
00
00
2
MS
10
00
00
00
38
12MS
05
05
3
MS
15
00
00
00
39
12MS
05
10
4
MS
20
00
00
00
40
12MS
05
15
5
MS
30
00
00
00
41
12MS
05
20
6
MS
00
05
00
00
42
12MS
10
05
7
MS
00
10
00
00
43
12MS
10
10
8
MS
00
15
00
00
44
12MS
10
15
9
MS
00
20
00
00
45
12MS
10
20
10
MS
00
30
00
00
46
12MS
15
05
11
MS
00
00
05
00
47
12MS
15
10
12
MS
00
00
10
00
48
12MS
15
15
13
MS
00
00
15
00
49
12MS
15
20
14
MS
00
00
20
00
50
12MS
20
05
15
MS
00
00
30
00
51
12MS
20
10
16
MS
00
00
00
05
52
12MS
20
15
17
MS
00
00
00
10
53
12MS
20
20
18
MS
00
00
00
15
54
B5
00
00
19
MS
00
00
00
20
55
B5
05
05
20
MS
00
00
00
30
56
B5
05
10
21
MS
00
05
05
00
57
B5
05
15
22
MS
00
05
10
00
58
B5
05
20
23
MS
00
05
15
00
59
B5
10
05
24
MS
00
05
20
00
60
B5
10
10
25
MS
00
10
05
00
61
B5
10
15
26
MS
00
10
10
00
62
B5
10
20
27
MS
00
10
15
00
63
B5
15
05
28
MS
00
10
20
00
64
B5
15
10
29
MS
00
15
05
00
65
B5
15
15
30
MS
00
15
10
00
66
B5
15
20
31
MS
00
15
15
00
67
B5
20
05
32
MS
00
15
20
00
68
B5
20
10
33
MS
00
20
05
00
69
B5
20
15
34
MS
00
20
10
00
70
B5
20
20
35
MS
00
20
15
00
36
MS
00
20
20
00
3123 生根培养基优化研究
外植体选带芽茎段2 cm左右培养基选MS添加NAAIBAIAA三种植物生长调节剂浓度梯度05 10 1520 30 mgL五梯度总12种培养基植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度2方面进行优化生根诱导植物生长调节剂配见表32培养基中加入30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度22 ℃种培养基接种20瓶瓶1外植体重复3次15 d30 d观察记录生根长度生根数目
表32 生根诱导植物生长调节剂配
Table 32 The matching of plant growth regulator on rooting induction
试验号
基培养基
IAA(mgL)
IBA(mgL)
NAA(mgL)
71
MS
05
00
00
72
MS
10
00
00
73
MS
15
00
00
74
MS
20
00
00
75
MS
00
05
00
76
MS
00
10
00
77
MS
00
15
00
78
MS
00
20
00
79
MS
00
00
05
80
MS
00
00
10
81
MS
00
00
15
82
MS
00
00
20
3124腋芽诱导培养基优化研究
腋芽诱导培养培养基选择MS基培养基MS培养基中添加浓度6BANAA24D植物生长调节剂种类植物生长调节剂浓度2方面进行优化腋芽诱导植物生长调节剂配见表33培养基中加入蔗糖30 gL琼脂6 gLpH值60光强度15002000Lx培养温度26℃种培养基接种20瓶瓶接2外植体重复3次培养15 d记录生长状况
表33 腋芽诱导植物生长调节剂配
Table33 The matching of plant growth regulator on axillary bud induction
试验号
基培养基
6BA(mgL)
NAA(mgL)
24D(mgL)
83
MS
05
00
00
84
MS
10
00
00
85
MS
15
00
00
86
MS
20
00
00
87
MS
00
05
00
88
MS
00
10
00
89
MS
00
15
00
90
MS
00
20
00
91
MS
00
00
05
92
MS
00
00
10
93
MS
00
00
15
94
MS
00
00
20
32 结果分析
321 消毒方式外植体影响
表34知着升汞消毒时间加长染菌数越越升汞消毒时间达12 min时候开始出现褐化现象着消毒时间加长褐化现象更加明显染菌数减少升汞灭菌时间达20 min时染菌数0褐化数17成活率15
根试验结果统统计出结：着升汞消毒时间加长外植体灭菌越加彻底升汞灭菌时间达12 min时候会出现褐化植物开始造成损伤升汞灭菌时间继续加长染菌数明显减少褐化数明显增根灭菌成活率显示升汞灭菌14 min时蓝尼康’存活率高7512 min时候成活率55绣球品种蓝尼康’佳升汞灭菌时间14 min
表34 升汞时间处理外植体消毒程度影响
Table34 The influence of mercury bichloride in different dealing time on the extent of explants disinfection
升汞消毒时间（min)
接种数(）
染菌数（）
褐化数（）
存活数（）
成活率（）
6
20
20
0
0
0
8
20
20
0
0
0
10
20
15
0
5
25
12
20
8
1
11
55
14
20
3
2
15
75
16
20
2
6
12
60
18
20
1
12
7
35
20
20
0
17
3
15
根表35分析知升汞处理时间绣球花蓝尼康’成活率存活数褐化数极显著
表35 升汞时间处理外植体消毒程度方差分析
Table35 The variance analysis on mercury bichloride in different dealing time to the extent of explants disinfection
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
升汞处理时间
成活率
16640625
7
2377232
3169643
极显著
存活数
665625
7
95089
126786
极显著
褐化数
880500
7
125786
335429
极显著
322 单种植物生长调节剂绣球花愈伤组织诱导
表36中出着6BA浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间19 d愈伤率达8416浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢发黄甚愈伤死亡着IBA植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越浓度达15 mgL时候愈伤启动时间18 d愈伤率达7583浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢愈伤率逐渐增加愈伤逐渐发黄 着NAA植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间11 d愈伤率达8916浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长减缓愈伤变黄甚死亡着24D植物生长调节剂浓度升高愈伤组织生长速度快速长势越植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间18 d愈伤率达8666浓度超15 mgL时候叶片愈伤生长缓慢发黄甚愈伤死亡
表39中出6BA绣球花影响显著IBANAA24D植物生长调节剂绣球花影响极显著说明绣球花蓝尼康’植物生长调节剂格外敏感时单植物生长调节剂刺激NAA植物生长调节剂相植物生长调节剂绣球花愈伤培养更利NAA植物生长调节剂浓度达15 mgL时候愈伤启动时间11 d愈伤率达8916达顶峰果单植物生长调节剂刺激选择NAA15 mgL植物生长调节剂会加绣球花蓝尼康’愈伤组织培养
表36 浓度植物生长调节剂MS培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table 36 The different concentrations of hormones in the effect of MS medium on Hydrangea callus culture
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
1
22±11
6666±38d
19
26±10
8583±520cd
2
21±10
7666±381d
20
27±26
7833±144g
3
19±11
8416±381de
21
18±30
8250±250d
4
24±20
7416±144d
22
16±21
8666±629bc
5
28±20
6583±629d
23
15±20
9333±144ab
6
24±20
7416±381de
24
16±30
9083±144ab
7
20±15
7500±433de
25
18±20
8250±250de
8
18±30
7583±629de
26
12±15
9416±144a
9
21±21
8666±381bcd
27
15±35
9166±144ab
10
26±45
6666±520e
28
18±05
8416±144d
11
17±25
8583±381cd
29
20±15
8000±250de
12
13±05
8583±520cd
30
16±05
9166±144ab
13
11±15
8916±381ab
31
18±25
9333±144ab
14
11±15
7833±520d
32
22±30
8833±381ab
15
25±30
7583±144de
33
24±25
8083±144de
16
25±20
7666±381de
34
26±20
7416±520de
17
19±20
8250±250de
35
26±25
6833±381e
18
18±15
8666±381bcd
36
28±3
6416±144e
323 基培养基绣球花愈伤组织诱导
表3638中知MS12MSB5培养基法蓝尼康’绣球花叶片较快长出愈伤组织MSB512MS培养基培养基绣球花蓝尼康’愈伤组织培养影响显著时知3种培养基培育出愈伤组织普遍愈伤率偏低启动时间较长愈伤组织长势缓慢出结：更换MS培养基愈伤组织培养未较影响时单植物生长调节剂刺激愈伤组织生长速度缓慢长势堪忧研究植物生长调节剂愈伤组织影响变格外重
表37 浓度植物生长调节剂12MS培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table37 The influence of different concentrations of plant growth regulator in 12 MS medium on callus culture of Hydrangea
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
37
24±20
7166±288e
45
24±20
7583±520de
38
22±05
8083±144cd
46
22±15
8083±144cd
39
21±10
8250±250bc
47
23±15
8416±144bc
40
23±15
725±250e
48
24±20
8166±144cd
41
20±15
8333±288bc
49
24±15
7583±381de
42
17±17
8416±381bc
50
25±11
7583±381de
43
16±15
8833±520ab
51
25±05
6750±661e
44
14±20
9083±144a
52
28±05
6583±144e
53
29±11
6083±144e
表38 浓度植物生长调节剂B5培养基绣球花愈伤组织培养影响
Table 38 The influence of different concentrations of plant growth regulator in B5 medium on callus culture of Hydrangea
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
试验号
启动时间（天）
愈伤组织诱导率（）
54
17±11
7833±288bc
62
19±26
8316±160b
55
16±11
8166±144bc
63
22±15
8333±288b
56
15±05
8416±381b
64
23±15
8250±250bc
57
19±20
8416±381b
65
25±10
7666±288cde
58
20±11
8166±288bcd
66
26±11
7583±381de
59
21±15
7583±520de
67
23±25
8083±144bcd
60
22±15
7666±629cde
68
25±05
7333±144e
61
15±05
9083±144a
69
26±11
6666±288e
70
29±11
6416±144e
表39 浓度单植物生长调节剂处理绣球花愈伤组织培养影响方差分析
Table39 The variance analysis on different concentration of single plant growth regulator to the influence on callus culture of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
6BA植物生长调节剂浓度
启动时间
69600
4
17400
4350
显著
愈伤组织诱导率
829784
4
207446
74088
极显著
IBA植物生长调节剂浓度
启动时间
1344
4
33600
8400
极显著
愈伤组织诱导率
950727
4
237682
69906
极显著
NAA植物生长调节剂浓度
启动时间
33960
4
84900
53063
极显著
愈伤组织诱导率
513624
4
128406
71257
极显著
24D植物生长调节剂浓度
启动时间
2136
4
53400
19071
极显著
愈伤组织诱导率
243784
4
60946
17540
极显著
324 种植物生长调节剂绣球花愈伤组织诱导
表310中出种植物生长调节剂绣球花愈伤组织培养影响显著表36中出植物生长调节剂时刺激绣球花蓝尼康’愈伤组织单植物生长调节剂刺激更明显佳愈伤植物生长调节剂配MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL愈伤启动时间接种12 d诱导愈伤率达9416根方差分析知IBANAA植物生长调节剂绣球花愈伤组织刺激极显著
愈伤组织培养程中果种植物生长调节剂进行培养优先选IBA10 mgLNAA10 mgL混合搭配IBANAA搭配般单植物生长调节剂刺激愈伤组织效果强绣球花蓝尼康’选什样植物生长调节剂搭配难愈伤率达100愈伤启动时间较缓慢植物生长调节剂浓度高容易导致愈伤组织死亡
表310 浓度植物生长调节剂处理绣球花愈伤组织培养影响方差分析
Table310 The variance analysis on different concentrations of plant growth regulator to the influence on callus culture of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
IBANAA植物生长调节剂浓度
启动时间
1041000
15
69400
52050
极显著
愈伤率
3719069
15
247938
92212
极显著
325 植物生长调节剂绣球花生根影响
表311知三种植物生长调节剂中效果佳IBA次NAA
IAA着植物生长调节剂浓度增加IBANAA均出现程度愈伤化植株生根影响着植物生长调节剂浓度增加时促进植株生根速度生根长度IAA刺激蓝尼康’生根率然偏高生根率难达100IBA达10 mgL时生根率100均生根时间67 d生根长度20 cmNAA达10 mgL15 mgL时候生根率达100NAA15 mgL时候带芽茎段出现愈伤情况愈伤组织容易影响带芽茎段生根NAA浓度10 mgL时候均生根时间7 d均生根长度19cm根表311中IBANAA较出IBA10 mgL绣球花生根更加利出结绣球花生根培养基选MS+IBA10 mgL均生根时间67 d生根长度20 cm
表311 植物生长调节剂绣球花生根影响
Table311 The influence of different plant growth regulators on the rooting of Hydrangea
试验号
生根率（)
生根时间(d)
生根长度(cm)
生长状态
71
8166±144e
12±11b
05±011e
正常
72
8666±144d
11±10bcd
14±015d
正常
73
8333±144e
7±11ef
16±010d
正常
74
7250±250e
15±15a
06±010e
正常
75
9416±144b
8±05de
19±015bc
正常
76
100±000a
67±05e
20±010ab
正常
77
9833±144a
8±15de
22±021a
轻微愈伤
78
90833±144c
9±15cd
12±030e
重度愈伤
79
8750±250d
9±11cd
17±011cd
正常
80
100±000a
7±15e
19±005bc
正常
81
100±000a
8±20e
20±021ab
轻微愈伤
82
9250±250bc
11±15bc
16±005de
轻微愈伤
表312中知通方差分析知NAAIBAIAA绣球花生根着极影响IBA生根时间显著影响植物生长调节剂生根率生根长度生根时间着极显著影响说明绣球花生根容易受植物生长调节剂影响
表312 植物生长调节剂绣球花生根影响方差分析
Table312 The variance analysis on the different plant growth regulators to the influence on rooting of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
生根率
302250
3
100750
40300
极显著
生根长度
1033
3
0344
133777
极显著
生根时间
60356
3
20119
15188
极显著
IBA
生根率
188250
3
62750
41833
极显著
生根长度
0270
3
090
17837
极显著
生根时间
22380
3
7460
7460
显著
IAA
生根率
30825
3
102750
82200
极显著
生根长度
0247
3
0091
914000
极显著
生根时间
23422
3
7807
7807
极显著
326 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响
表313中出：三种植物生长调节剂相互较6BA优NAANAA优24D6BA＞NAA＞24D6BA植物生长调节剂作绣球花蓝尼康’出芽率出芽数逐渐升6BA浓度达10 mgL时候达顶端出芽率925均出芽数33然着浓度升高出芽率出芽数降适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL出芽率925均出芽数33
表313 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响
Table313 The influence of different plant growth regulators on the axillary bud induction of Hydrangea
试验号
腋芽诱导率（）
均出芽数（）
83
8166±144b
22±01c
84
9250±250a
33±02a
85
8416±144b
31±01a
86
7083±144c
17±01d
87
7916±44b
21±02cd
88
8166±288b
26±01b
89
8000±250b
25±01b
90
6416±520d
15±01e
91
7166±288c
13±01d
92
7083±520c
19±02de
93
6166±288d
16±01e
94
5583±520e
09±01e
根表314出植物生长调节剂绣球花腋芽诱导出芽率出芽总数均出芽数着非常影响
表314 植物生长调节剂绣球花腋芽诱导影响方差分析
Table314 The variance analysis on the different plant growth regulators to the influence on axillary bud induction of Hydrangea
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
6BA
腋芽诱导率
824200
3
274750
157500
极显著
均出芽数
5302
3
1767
70700
极显著
NAA
腋芽诱导率
380250
3
126750
126750
极显著
均出芽数
2220
3
0740
74000
极显著
24D
腋芽率
626250
3
208750
208750
极显著
均出芽数
0982
3
32750
32750
极显著
33 讨
331 外植体消毒
外植体消毒植物组织培养重环节获菌具生长活性外植体组织培养取成功重素[67]组培试验否成功素：否效杜绝染菌杜绝染菌分三方面：外植体灭菌培养基灭菌菌操作现培养基消毒菌操作条件已非常成熟外植体消毒组培试验否成功素掌握外植体消毒时间消毒方式等需试验出结高浓度乙醇会细菌表面形成层保护膜阻止乙醇进入细菌体难细菌彻底杀死果乙醇浓度低然进入细菌细菌体蛋白质凝固样细菌彻底杀死众试验表明75乙醇消毒效果试验乙醇浓度75升汞属重金属蛋白质变性中条重金属升汞蛋白质变性起消毒作升汞种毒物质仅体危害残留物会环境影响汞化合物通呼吸道消化道皮肤吸收心汞中毒会头痛头晕乏力失眠梦口腔炎发热等全身症状更甚者急性腐蚀性胃肠炎严重者昏迷休克甚发生坏死性肾病致急性肾功衰竭选择升汞灭菌属奈选根采摘外植体时间部位消毒时间实验中绣球花蓝尼康’佳消毒方法：水洗3060min01升汞灭菌14min菌水洗外植体
45次接着放入75乙醇消毒30 S菌水洗57次滤纸吸干试验绣球花品种绣球花种类消毒时间需继续进行摸索作组培第步绣球花消毒灭菌探索条件需进步摸索希找更方便更适宜更环保灭菌方法
332 褐化现象
褐化污染玻璃化称植物组织培养三难题控制褐化控制污染玻璃化更加困难常常认褐化否效控制植物组织培养否成功关键植物组织培养中说褐化指外植体诱导初分化者分化程中身组织表面想培养基释放褐色物质培养基逐渐变成褐色外植体进步变褐死亡现象[68]影响外植体褐化两素：外植体身原包括外植体生长状态生理特性等第二外植体培养处环境中包括培养基成分培养条件等外植体部位取材时间外植体受伤程度等等影响植物体否褐化褐化程度组培程中外植体褐化种素作结果效控制褐化外植体选择培养环境关重外植体组织受伤害程度会直接影响外植体褐化发生外植体越切面雨体积率越伤害褐化程度会越切取外植体时候需量减少伤口面积时伤口处量剪切品种整组培程中外植体出现褐化植物种逆境适应性反应适宜培养条件外植体处正常生长状态够效抑制褐化
然已效控制绣球花组培程中褐化现象法完全阻止褐化褐化浪费量原材时间精力等握取材部位取材时间外植体受伤程度培养基配置培养条件关重
333 玻璃化现象
玻璃化指组织培养程中植物嫩茎叶片会呈现半透明状水浸状现象称度水化玻璃苗分化力降低难增殖生根苗种生理失调症目前已报道出现玻璃化苗植物已高达70种着玻璃化产生机理研究深入某植物玻璃化已效控制措施：(1)选择容易玻璃化基型部位做外植体(2)采取改善氧气供应状况通气条件控制温度
适低温处理降低容器相湿度(3)适提高蔗糖含量降低培养基中水分时减少细胞分裂素生长素等方法均减少玻璃苗发生然组织培养中出现问题发生机理控制进行定研究尚未找普遍适行效解决办法成提高组织培养繁殖率增加培养程稳定性障碍问题研究需继续深入找更解决办法 控制措施治标走治植物组织技术发挥更作[69]
334 培养基选择
培养基（Medium）供微生物植物动物组织生长维持工配制养料般包括碳水化合物含氮物质机盐（包括微量元素）维生素水等培养基含抗菌素色素培养基土栽培营养液发展某种意义说模拟土壤初培养基简单马铃薯浸出液土豆汁着植物生理学生物化学研究深入培养基越越复杂成分越越支持物(：琼脂明胶)发现应培养基培养基中时固体培养基诞生固体培养基组织培养基中常种培养基类型工合成培养基通常包括量元素微量元素铁盐机复合物糖支持物植物植物生长调节剂量元素微量元素通常机盐代铁盐通常螯合铁形式出现机复物通常包括氨基酸代谢载体维生素等糖采蔗糖者葡萄糖支持物般采高分子交联糖链(聚半乳糖硫酸酯)类物质量配少年发展中已基形成干模板例试验室中常MSB5Nicher培养基原料分两类：应肉汤马铃薯汁等天然成分配制称天然培养基应化学药品配成标明成分称合成培养基综合培养基化学试剂中培养基合成培养基液体培养基易长期保现均改制成粉末培养基配制原料求贮存保方面稍般培养基受热吸潮易细菌污染分解变质般培养基需防潮避光阴凉处保存需严格灭菌培养基（组织培养基）果需较长时间贮存必须存放26℃冰箱[70]愈伤组织基础培养基种常见：MS12MSB5等根培养植物培养基样陆碧云[71]陈笑蕾[72]等12MS培养基蔡新玲[73]姚晓[74]等B5作培养基
培养基着处试验愈伤组织培养中选3中培养基分：MS12MSB5愈伤组织培养培养基种然试验选三种培养基培养愈伤组织效果太区绣球花愈伤组织培养培养基需进步探索挖掘出更适合培养绣球花愈伤组织培养基生根诱导腋芽诱导培养基中选基础
MS培养培养基未尝试种培养基绣球花影响深入研究
335 植物生长调节剂选择
生长调节子植物植物生长调节剂植物组织培养中发挥生物学效力强培养素工调控组织培养关重存植物组织培养工作者意植物植物生长调节剂组织培养中具动摇核心位[75]植物植物生长调节剂包括五类：生长素类细胞分裂素类赤霉素乙烯类生长抑制素类植物组织培养中常生长素细胞分裂素生长素细胞分裂素作组织培养中十分重谓植物生长调节剂杠杆：生长素生物学效应高细胞分裂素时诱导植物组织脱分化根原基形成细胞分裂素效应高生长素时诱导植物组织分化芽原基形成生长素包括种1奈乙酸吲哚乙酸24D等生物学效应着微妙总体效应致细胞分类素包括6苄基腺嘌呤6糠氨基嘌呤玉米素等植物植物生长调节剂培养基中量通常00110 mgL间变化细胞分裂素浓度非生根培养中生长素值指出植物植物生长调节剂量考虑组织源植物生长调节剂含量生理学周期效应换言植物生长调节剂生物学效应组织源植物生长调节剂工添加外源植物生长调节剂效应总准确握源植物生长调节剂外源植物生长调节剂协作效操作植物生长调节剂杠杆合理利植物植物生长调节剂做植物组织培养[76]
试验愈伤组织中选常见4种植物生长调节剂生根培养中选三种植物生长调节剂种子萌发中选三种植物生长调节剂植物生长调节剂种类单纯种植物生长调节剂太狭隘更况种植物生长调节剂刺激试验中培养愈伤组织始终法愈伤率达100生根培养中生根率已达100生根培养芽诱导培养中选3种植物生长调节剂4种梯度果选植物生长调节剂种类梯度分更细点够进步完善绣球花蓝尼康’组培体系芽诱导培养中芽诱导率高达92未达100然绣球花蓝尼康’组培体系已初步建成需选更植物生长调节剂种类尝试组合体系进步完善绣球花组培需未停探索
336 培养基pH值
培养基pH值通直接影响培养基酸碱度培养物培养基中营养成分吸收调控组织培养程中发生种生化反应影响植物组织培养效果[77]廉家盛[78]等研究发现蓝莓美登组织培养程中适宜pH范围5458培养基pH值增殖分化显著影响张玉红[79]等研究影响黄檗快速繁殖培养条件时发现pH值影响增殖壮苗张延红[80]等通较温度培养基pH值黄芪组培苗叶片生长影响结果发现：较低温度黄芪叶片生长速度快呈绿色培养基适宜pH58pH值高时组培苗短枝生长缓慢叶片枯黄
34 炼苗移栽
炼苗保护苗木情况采取空气流通降温适控水等措施幼苗强行锻炼程定植够迅速适应土良环境条件缩短缓苗时间增强低温风等抵抗力提高苗木生存力组培苗生活组培室中非常脆弱移栽外界时候炼苗显格外关重
选生长旺盛根系发达组培苗提高绣球花炼苗成活率生根少生长矮绣球花移栽温室棚时候格外脆弱容易抵抗外界刺激失生理机
生根根系基发育培养瓶移室外遮阴蓬温室中进行强光闭瓶练苗520 d左右遮阴度宜5070培养容器盖子塞开然光进行开瓶练苗37 d正午强光南方光较强区注意采取措施阴蓬温室避免灼伤苗果开盖容器中培养超1周般会引起含蔗糖培养基污染问题开瓶炼苗分阶段进行首先松盖（塞）两天然部分开盖两天完全盖种方法相湿度十分低屋特处培养容器开口影响开盖速度开口瓶盖应开口瓶盖速度慢试苗移栽组织培养程重环节工作环节做会造成前功弃试苗琼脂培养基中移出时长镊子心取出彻底清洗干净根部（残留蔗糖营养会成潜致病微生物生长培养基洗净容易引起移栽苗烂根死亡）避免损坏根系直接移栽
0103高锰酸钾菌灵等杀菌剂溶液中清洗然清水清洗移入苗床盆钵水清洗菌灵溶液浸泡1030 min移栽栽淋足定根水炼苗塑料薄膜（玻璃）温室遮阴网室进行温室温棚时应注意设置通风口防止浇水高温引起萎蔫高湿引起烂苗生长基质应具适合pH值空隙良排水通气性般珍珠岩蛭石草炭土腐殖土例1：1：05砂子：草炭土腐殖土1：1基质前应高压灭菌少时烘烤消灭中微生物移出试植株极容易感染病生长环境卫生状况病害防治移栽否成功十分关键通常生长基质培养容器苗床进行消毒处理采新培养容器聚乙烯薄膜效果必时喷施稀杀菌剂移出试苗般炼苗前4周遮阴达5090采喷雾洒水保持定湿度（85左右）逐渐降低湿度增强光湿度降低幅度光增加量植物定总体应促老叶缓慢衰退时产生新叶果降低增加快会叶片褪绿灼伤缓苗期延长甚导致移栽苗死亡植株够忍受高光水利温度应低20℃达2530℃温度湿度高易滋生杂菌造成苗霉烂根茎处腐烂应温度加控制遮阴调节湿度（喷雾塑料薄膜覆盖）助控制温度炼苗时适施量微量元素采1412 MS培养基溶液移栽定期施肥保持苗木旺盛生长具体施肥方法（顶部喷施掺入基质）施肥量植物异[8182]
移栽般春季进行果北方早春冬季较冷时节需移栽苗床铺电线进行加温促进根系功恢复直新叶形成止较难移栽植物先沙床营养盘移栽移营养袋中培育壮苗直接移入营养袋中直长成定规格（定高度粗度新叶数）病害壮苗田中定植进行体外生根培养直接试外瓶外生根炼苗相结合根苗进行直接移栽种方法某植物行效节约成需环境条件生根试苗炼苗求相特需注意湿度光温度生根基质移植前时需生长素诱导生根处理
4 绣球花品种蓝尼康’胚抢救繁育技术研究
植物胚细胞结构具形成新体力胚特殊细胞合子胚活体细胞发生胚具根两级结构茎原基结构正常胚较结构够发育成完整植物花草红豆杉等木植物种巨潜胚具特殊结构正常亲合条件幼胚够发育成熟展现潜力情况早期应该判断发育否收抑制具价值基型确保够时进行胚抢救
41 材料方法
411 材料处理
种子授粉子房壁膨子房壁变黄采摘水洗脱壳成熟种子杂质菌水浸泡12h洗风干置0℃冰箱中备
挑选干燥饱满种子先放入75乙醇消毒30 s然菌水洗35次01升汞进行灭菌菌水洗57次滤纸吸干菌条件处理种子接种培养基中进行培养
412试验方法
种子培养培养条件选MS培养基添加NAAIBA6BA三种植物生长调节剂05 10 15 20 30 mgL五种梯度蔗糖30 gL琼脂6 gLpH值61光强度15002000Lx培养温度26℃种培养基接种5瓶瓶接10种子重复3次培养15 d30 d记录生长状况
42 结果分析
421 种子萌发试验
表41知着植物生长调节剂浓度增加绣球花蓝尼康’种子萌发时间萌发率逐渐增加IBA6BA浓度达10 mgL种子萌发天数逐渐变长NAA浓度达15 mgL时候种子萌发天数达短11 d着植物生长调节剂浓度增加绣球花种子萌发率逐渐变高三植物生长调节剂浓度均达15 mgL时候种子萌发率均达高点NAA达82IBA达
836BA达78三种植物生长调节剂相互较6BA植物生长调节剂绣球花种子萌发刺激相较薄弱综合考虑素适宜绣球花种子培养培养基应MS+NAA 15 mgL种子萌发天数11 d萌发率82调节植物生长调节剂绣球花种子萌发率达100更促进绣球花种子萌发需更时间进行探索
表41 植物生长调节剂浓度绣球花种子萌发影响
Table 41 The influence of different kinds of concentration for plant growth regulators on the seed germination of Hydrangea
植物生长调节剂
种子萌发天数（天）
种子萌发率（）
NAA植物生长调节剂浓度（mgL）
05
17±05cd
72±11g
10
14±17ef
76±11def
15
11±05g
82±23ab
20
15±11de
81±11abc
30
20±05b
70±11gh
6BA植物生长调节剂（mgL）
05
13±17fg
73±30fg
10
11±05g
77±11de
15
18±25bc
83±30a
20
18±05bc
82±30ab
30
20±05b
72±30g
IBA植物生长调节剂（mgL）
05
16±05cd
73±11fg
10
12±05fg
79±23bcd
15
18±05bc
78±11cd
20
20±15b
74±20efg
30
26±15a
68±20h
根表42表43出NAA6BAIBA绣球花种子萌发着极显著影响开始植物生长调节剂绣球花愈伤组织培养面绣球花生根影响出绣球花植物生长调节剂刺激表现格外显著
表42 绣球花种子萌发天数结果方差分析
Table42 The variance analysis on the result of seed germination’s time
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
种子萌发率
434400
4
108600
108600
极显著
6BA
种子萌发率
213600
4
53400
53400
极显著
IBA
种子萌发率
417600
4
104400
47455
极显著
表43绣球花种子萌发率结果方差分析
差异源
指标
Ⅲ型方
df
均方
F
显著性
NAA
种子萌发天数
158400
4
39600
1800
极显著
6BA
种子萌发天数
198000
4
49500
22500
极显著
IBA
种子萌发天数
158400
4
39600
24750
极显著
Table43 The variance analysis on the result of seed germination rate
43 问题讨
胚抢救( Embryo rescue)指营养生理原造成难播种成苗发育早期阶段败育退化胚进行早期分离培养胚抢救果树早熟类型品种选育年核类果树品选育采取效手段成功方法1933年 Tukey 成功培养甜樱桃幼胚成胚培养里程碑 1987年 Ramming 利胚挽救技术已成功培育出早熟桃核葡萄现胚抢救技术领域应越越广泛胚抢救中培养基培养难掌握需量试验进行摸索条件李泽谭晓风[83]等葡萄桐’种胚试材做组培试验试验中选MS12MS14MSWPM培养基出12MS培养基油桐种胚生体系建立佳培养基研究选MS种培养基培养基种类单培养选择中足处培养基蓝尼康’胚抢救影响研究试验选3种植物生长调节剂5种梯度然法种子萌发率达100种组合培养基植物生长调节剂会绣球花蓝尼康’胚抢救培养基探索起促进作
5 全文结创新点研究展
51 全文结
1扦插试验结果表明NAA绣球花蓝尼康’生根长度生根数目甚绣球花成活率着影响适合蓝尼康’扦插基质珍珠岩：沙子1：1成活率85均生根数目76条生根长度26 cm500 mgL3种植物生长调节剂适宜绣球花扦插植物生长调节剂NAA成活率93均生根数目79根均生根长度21 cm适宜绣球花扦插NAA浓度600 mgL成活率93均生根数目83根均生根长度23 cm
2绣球花蓝尼康’叶片佳消毒方法：水洗3060 min然超净工作台75％乙醇消毒菌水洗外植体45次01升汞灭菌14 min接着菌水洗57次滤纸吸干接种初代培养基中进行培养
3绣球花蓝尼康’组织培养试验中佳愈伤植物生长调节剂配MS+IBA10 mgL+NAA10 mgL接种12 d愈伤组织长出诱导愈伤率达8916佳生根培养基：MS+IBA10 mgL生根率100均生根时间67d生根长度208 cm适宜绣球花蓝尼康’腋芽诱导培养基：MS+6BA 10 mgL定芽诱导率925外植体定芽均数量33
4胚抢救繁育技术中种子萌发培养基：MS+NAA15 mgL11d种子开始萌发种子萌发率达82
52 创新点
1．次试验首次研究绣球花品种蓝尼康’繁殖技术
2 研究首次研究绣球花品种蓝尼康’胚抢救试验获绣球花蓝尼康’组培苗
53 研究展
研究扦插组织培养胚抢救三方面进行发现选择合适消毒方式调节种类植物生长调节剂配蓝尼康’组织培养成功关键扦插方面已筛选出适合蓝尼康’扦插基质植物生长调剂浓度扦插方面已筛选出适合
蓝尼康’愈伤组织生根腋芽诱导较佳培养基配方胚抢救方面筛选出适合蓝尼康’种子萌发植物生长调节剂浓度完善绣球花繁育技术体系提供数
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附录1：
MS培养基母液配制
The MS culture medium mother liquor preparation
母液名称
药品名称
原配方规定量（mgL）
扩倍数
配制母液称取量（g）
母液体积（ml）
配1升培养基吸取量（ml）
量
元
素
NH4NO3
1650
10
165
500
50
K NO3
1900
19
KH2PO4
170
17
CaCl2·2H2O
440
44
MgSO4·7H2O
370
37
微
量
MnSO4·H2O
223
200
446
500
25
元
素
ZnSO4·7H2O
86
172
H3BO3
62
124
KI
083
0166
Na2MO4·2H2O
025
005
CuSO4·5H2O
0025
0005
CoCl2·6H2O
0025
0005
铁盐（棕色）
Na2EDTA
373
100
373
250
25
FeSO4·7H2O
287
287
机营养
烟 酸（Vpp）
05
100
005
250
25
盐酸吡哆醇（VB6）
05
005
盐酸硫胺素（VB1）
01
001
甘氨酸
2
02
肌 醇
100
10
附录2：
B5母液配置表
Fig62 The B5 culture medium mother liquor preparation
化合物名称
分子式
分子量
标准量（mgL）
扩倍数
称取量（mg）
定容体积（ml）
升抽取量（ml）
量
硫酸铵
(NH4)2SO4
132
134
100
13400
2000
20
硝酸钾
KNO3
10111
2500
250000
七水硫酸镁
MgSO4·7H2O
24647
250
250000
四水磷酸二氢钠
NaH2PO4·4 H2O
192
150
15000
钙盐
二水氢化钙
GaCI2·H2O
14702
150
100
1500
1000
10
铁盐
七水硫酸亚铁
FeSO4·7H2O
27802
278
100
2780
2000
20
乙二胺四乙酸二钠
Na2EDTA
37225
373
3730
微量
碘化钾
KI
16601
075
200
150
1000
5
硼酸
HBO3
6183
30
600
七水硫酸锌
ZnSO4·7H2O
28754
20
400
二水钼酸钠
NaMoO4·2H2O
24195
025
50
水硫酸锰
MnSO4·1H2O
16901
10
2000
五水硫酸铜
CuSO4·5H2O
24968
0025
5
六水氯化钴
CoCI·6H2O
23793
0025
5
机
盐酸硫胺素
C12H11CIN4HCI
33727
10
100
1000
500
5
盐酸吡咯醇
C8H11O3NHCI
20564
10
100
烟酸（VB3）
NC5HCOOH
12311
10
100
机醇
肌醇（环已六醇）
C6H12O6
18016
100
100
10000
500
5
附录3：试验相关图片
图13 扦插实验成果图
Fig 13 The cutting experiment result map
图47 愈伤组织时期成果图
Fig 47 The callus of each period the result map
图811 生根培养时期成果图
Fig 811 The take root culture results in different historical periods
图1214 胚抢救实验时期成果图
Fig 1214 The experimental results of various periods figure embryo rescu
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