血液中提取DNA方法原理
实验步骤
原理
1室温解冻血样约10分钟
解冻
2．取250ul血样加1ml T10E10翻动10分钟
破碎红细胞
3样品8000rpm6分钟离心
白细胞蛋白质沉淀
4弃清沉淀500ul T10E1洗8000rpm6分钟离心
离心会分层蛋白质白细胞白细胞
沉淀层
5弃清液加300ul USSTE裂解悬浮力震荡
破碎白细胞
6等体积饱酚抽提混约2分钟然10000rpm10分钟离心
饱酚1 效变性蛋白质2抑制DNAse降解作
缺点：溶解1015水溶解部分poly(A)RNA2完全抑制RNAse活性
7清液吸出（吸头尖端剪头段免吸取程中损伤DNA）等体积（吸出少加少）氯仿异戊醇（241）混匀2分钟直白色界面10000rpm10分钟离心
RNAse
氯仿作：客服酚缺点加速机相液相分层
异戊醇作：减少蛋白质变性操作程中产生气泡外助分相
8吸取清加入2倍体积冷水乙醇混匀12000rpm10分钟离心
冷水乙醇沉淀DNA佳方法
9弃清加500ul70乙醇浸洗2次12000rpm10分钟离心
降低DNA损失提高收获率
10弃清然放置30分钟
空气中干燥DNA(晾干DNA面乙醇)
11乙醇晾干加50ul T10E1 37℃溶解贮存4℃20℃
加快基组DNA溶解
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1室温解冻血样约10分钟
解冻
2．取250ul血样加1ml T10E10翻动10分钟
破碎红细胞
3样品8000rpm6分钟离心
白细胞蛋白质沉淀
4弃清沉淀500ul T10E1洗8000rpm6分钟离心
离心会分层蛋白质白细胞白细胞
沉淀层
5弃清液加300ul USSTE裂解悬浮力震荡
破碎白细胞
6等体积饱酚抽提混约2分钟然10000rpm10分钟离心
饱酚1 效变性蛋白质2抑制DNAse降解作
缺点：溶解1015水溶解部分poly(A)RNA2完全抑制RNAse活性
7清液吸出（吸头尖端剪头段免吸取程中损伤DNA）等体积（吸出少加少）氯仿异戊醇（241）混匀2分钟直白色界面10000rpm10分钟离心
RNAse
氯仿作：客服酚缺点加速机相液相分层
异戊醇作：减少蛋白质变性操作程中产生气泡外助分相
8吸取清加入2倍体积冷水乙醇混匀12000rpm10分钟离心
冷水乙醇沉淀DNA佳方法
9弃清加500ul70乙醇浸洗2次12000rpm10分钟离心
降低DNA损失提高收获率
10弃清然放置30分钟
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