燃煤污染型砷中毒病区氟砷联合中毒体免疫功影响
[摘] 目通燃煤型砷中毒氟砷联合中毒患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+CD8+CD4+CD8+ 值检测观察变化特点初步探讨氟砷联合毒性体免疫功影响方法采单克隆抗体APAAP桥联酶标法检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+CD8+细胞变异情况氟离子选择电极法测环境介质粮食尿中氟含量HGICPOES测环境介质粮食头发尿中砷含量结果 单纯砷中毒组高砷低氟组高砷高氟组患者外周血CD3+CD4+细胞CD4+ CD8+值均明显低正常组（P<005）CD8+T淋巴细胞没明显改变（P>005）砷中毒组高砷低氟组高砷高氟三组间两两较CD3+CD4+ CD8+ CD4+ CD8+均未见明显改变（P>005）三组间趋势性检验结果显示：体氟负荷增加CD3+CD4+ CD4+ CD8+值呈降线性趋势(P<005)结 燃煤砷污染T淋巴细胞免疫功明显抑制作T淋巴细胞细胞粘附分子减少T淋巴细胞免疫活性信号传递作减弱辅助性T淋巴细胞细胞毒性T淋巴细胞间衡失调三组间趋势性检验结果提示砷氟间协作存氟某种增强砷T淋巴细胞亚群损害作
[关键词] 氟砷联合 体 T淋巴细胞亚群
AbstractObjective Method Result Conclusion
Key wordsCombined fluoridearsenic poisoning humam Tlymphocyte
方性氟砷联合中毒长期摄入高氟高砷引起生物球化学性疾病体健康生存质量影响已引起广泛关注氟体必需微量元素机体摄入量引起氟中毒[1]早期表现疲乏力食欲振头晕头痛记忆力减退等症状着摄入量增加沉积牙齿骨骼形成氟斑牙氟骨症砷种常见环境毒物已知类致癌物
[2]机体摄入量引起砷中毒砷中毒病变特征皮肤表现皮肤色素沉着色素脱失掌跖角化严重者致皮肤癌肺癌心血病神病变种脏癌关国********西等存着环境中高氟高砷存病区[3]长期生活高砷高氟暴露环境中摄入量氟砷易导致氟砷联合中毒 [4]氟砷联合作引发产生疾病称氟砷中毒综合症已严重危害着类健康[5]众研究表明毒物作机体时机体免疫系统功变化常发生毒性症状前监测机体免疫功变化疾病早期发现早期诊断早期治疗提供科学年高氟高砷暴露机体免疫功影响越越受重视已成氟砷毒性研究领域新热点[6]研究通燃煤污染型砷中毒病区砷中毒氟砷联合中毒患者T淋巴细胞亚群测定观察变化特点初步探讨砷中毒病区氟砷联合毒性体免疫功影响
1 实验材料
1．1 仪器
Olypus显微镜全动生化分析仪聚乙烯瓶采血免疫浊法试剂盒(**复星长征医学科学限公司)离心机恒温水浴箱瓷坩埚马弗炉2000W电炉离子计精密酸度计：精度+01mv氟离子选择电极甘汞电极磁力搅拌器ganICPOES MPX型光谱仪（Varian）VGA77型氢发生器（Varian）
1．2 试剂
MilliQ Synthesis 超纯水（182ΩM） 淋巴细胞分离液肝素磷酸氢二钠磷酸二氢钠95％乙醇盐酸硝酸硝酸镁20ml具塞色硫酸尿素碘化钾氢氧化钠硼氢化钠草酸铵（均分析纯）氟化物标准溶液总离子强度调节缓液（TISAB）砷标准储备液：三氧化二砷（99995Sigma）配制1000mgmL砷标准储备液前稀释100倍001mgmL砷标准应液
2 研究象方法
21 调查点调查象：**省**县交乐村燃煤型砷中毒病区调查点调查象常住**省**县交乐乡居民根方性砷中毒诊断标准 (WST211—2001) 确诊砷中毒体检氟中毒氟斑牙氟骨症床表现（WST208—2001GB163961996）患者作研究象66收集尿液测定尿砷尿氟含量尿砷尿氟含量进行分组：砷中毒组（尿氟<15mgL）20高砷低氟组（尿砷>128ugL 15mgL<尿氟<27mgL）21高砷高氟组（尿砷>128ugL 尿氟>27mgL）21
位交乐村约15公里外非砷氟暴露村燃高砷煤史生活惯生活水相似年龄性配均衡健康体检合格居民组约4060调查象均排期感染史营养良史长期吸烟饮酒史免疫缺陷性疾病身免疫关疾病半年影响免疫功药物者
22 方法
221环境介质食物采集砷氟含量检测：
选点方机抽取10户农家采集土壤煤食物（米玉米辣椒）采HGICPOES(电感耦合等离子体发射光谱仪)测定砷含量采氟离子选择电极法测定氟含量
222尿砷尿氟发砷发氟检测：
知情意原留取受检者空腹晨尿密闭聚乙烯瓶中加酸（1HCl）防腐冷藏保存HGICP0ES(电感耦合等离子体发射光谱仪)测定尿砷含量采氟离子选择电极法测定尿氟含量（WST 89—1996）取枕部发际头皮3cm长头发处理（丙酮→乙醇→乙醚→非极性洗涤剂→离子水处理）干燥备HGICP0ES(
电感耦合等离子体发射光谱仪)测定尿砷发砷含量采氟离子选择电极法测定尿氟发氟含量（WST 89—1996）
223 血液采集免疫学指标检测：
知情意原菌抽取受检者清晨空腹肘静脉血1ml加入肝素抗凝T淋巴细胞亚群测定采集样品均存放20℃冰箱中保存备
单克隆抗体APAAP桥联酶标法测定外周血T细胞亚群CD3+CD4+CD8+细胞实验流程[7]取患者静脉血肝素抗凝加PBS+淋巴细胞分离液中离心吸出血浆分离液间单核细胞层PBS稀释离心取沉淀制成放粘片剂细胞涂片风干固定圈片份血涂4张片(CD3CD4CD8阴性1张)加鼠抗单克隆抗体湿盒室温作1 hPBS清洗加羊抗鼠IgG二抗室温作1hPBS清洗加APAAP复合物1 h加碱性磷酸酶底物显色液室温显色lhPBS洗苏木精复染液复染2 min水洗甘油明胶封片高倍镜计数200细胞阳性细胞分检出CD3+．CD4+CD8+ 细胞计算百分率CD4+／CD8+ 值
药盒APAAP试剂盒(购军事医学科学院)药品肝素(购SIGMA)磷酸氢二钠磷酸二氢钠丙酮戊二醛95％乙醇(均购**试剂公司)试剂APAAP桥联酶标技术求配制
3 质量控制
31 流行病学调查质量控制：调查前调查员进行培训掌握调查方法技巧统标准认识调查程中调查表漏项错项填写清等问题时纠正规定求采集检验标
32 实验室质量控制：种仪器妥善维护保养仪器前进行校准确保仪器处正常工作状态实验器皿实验求清洗位收集尿样聚乙烯瓶10HNO3浸泡洗净纯水烘干实验程中实验员严格实验操作规范进行实验标进行检测前校正品进行定标测试保证试剂药盒性实验试剂妥善存放定期清理查失效期
33 数信息质量控制：数录入统计软件前仔细进行核采双录入专数进行复核
4 数处理
Excel建立数库采SPSS115统计学软件数进行t检验方差分析检验水准α005
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[摘] 目通燃煤型砷中毒氟砷联合中毒患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+CD8+CD4+CD8+ 值检测观察变化特点初步探讨氟砷联合毒性体免疫功影响方法采单克隆抗体APAAP桥联酶标法检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+CD8+细胞变异情况氟离子选择电极法测环境介质粮食尿中氟含量HGICPOES测环境介质粮食头发尿中砷含量结果 单纯砷中毒组高砷低氟组高砷高氟组患者外周血CD3+CD4+细胞CD4+ CD8+值均明显低正常组（P<005）CD8+T淋巴细胞没明显改变（P>005）砷中毒组高砷低氟组高砷高氟三组间两两较CD3+CD4+ CD8+ CD4+ CD8+均未见明显改变（P>005）三组间趋势性检验结果显示：体氟负荷增加CD3+CD4+ CD4+ CD8+值呈降线性趋势(P<005)结 燃煤砷污染T淋巴细胞免疫功明显抑制作T淋巴细胞细胞粘附分子减少T淋巴细胞免疫活性信号传递作减弱辅助性T淋巴细胞细胞毒性T淋巴细胞间衡失调三组间趋势性检验结果提示砷氟间协作存氟某种增强砷T淋巴细胞亚群损害作
[关键词] 氟砷联合 体 T淋巴细胞亚群
AbstractObjective Method Result Conclusion
Key wordsCombined fluoridearsenic poisoning humam Tlymphocyte
方性氟砷联合中毒长期摄入高氟高砷引起生物球化学性疾病体健康生存质量影响已引起广泛关注氟体必需微量元素机体摄入量引起氟中毒[1]早期表现疲乏力食欲振头晕头痛记忆力减退等症状着摄入量增加沉积牙齿骨骼形成氟斑牙氟骨症砷种常见环境毒物已知类致癌物
[2]机体摄入量引起砷中毒砷中毒病变特征皮肤表现皮肤色素沉着色素脱失掌跖角化严重者致皮肤癌肺癌心血病神病变种脏癌关国********西等存着环境中高氟高砷存病区[3]长期生活高砷高氟暴露环境中摄入量氟砷易导致氟砷联合中毒 [4]氟砷联合作引发产生疾病称氟砷中毒综合症已严重危害着类健康[5]众研究表明毒物作机体时机体免疫系统功变化常发生毒性症状前监测机体免疫功变化疾病早期发现早期诊断早期治疗提供科学年高氟高砷暴露机体免疫功影响越越受重视已成氟砷毒性研究领域新热点[6]研究通燃煤污染型砷中毒病区砷中毒氟砷联合中毒患者T淋巴细胞亚群测定观察变化特点初步探讨砷中毒病区氟砷联合毒性体免疫功影响
1 实验材料
1．1 仪器
Olypus显微镜全动生化分析仪聚乙烯瓶采血免疫浊法试剂盒(**复星长征医学科学限公司)离心机恒温水浴箱瓷坩埚马弗炉2000W电炉离子计精密酸度计：精度+01mv氟离子选择电极甘汞电极磁力搅拌器ganICPOES MPX型光谱仪（Varian）VGA77型氢发生器（Varian）
1．2 试剂
MilliQ Synthesis 超纯水（182ΩM） 淋巴细胞分离液肝素磷酸氢二钠磷酸二氢钠95％乙醇盐酸硝酸硝酸镁20ml具塞色硫酸尿素碘化钾氢氧化钠硼氢化钠草酸铵（均分析纯）氟化物标准溶液总离子强度调节缓液（TISAB）砷标准储备液：三氧化二砷（99995Sigma）配制1000mgmL砷标准储备液前稀释100倍001mgmL砷标准应液
2 研究象方法
21 调查点调查象：**省**县交乐村燃煤型砷中毒病区调查点调查象常住**省**县交乐乡居民根方性砷中毒诊断标准 (WST211—2001) 确诊砷中毒体检氟中毒氟斑牙氟骨症床表现（WST208—2001GB163961996）患者作研究象66收集尿液测定尿砷尿氟含量尿砷尿氟含量进行分组：砷中毒组（尿氟<15mgL）20高砷低氟组（尿砷>128ugL 15mgL<尿氟<27mgL）21高砷高氟组（尿砷>128ugL 尿氟>27mgL）21
位交乐村约15公里外非砷氟暴露村燃高砷煤史生活惯生活水相似年龄性配均衡健康体检合格居民组约4060调查象均排期感染史营养良史长期吸烟饮酒史免疫缺陷性疾病身免疫关疾病半年影响免疫功药物者
22 方法
221环境介质食物采集砷氟含量检测：
选点方机抽取10户农家采集土壤煤食物（米玉米辣椒）采HGICPOES(电感耦合等离子体发射光谱仪)测定砷含量采氟离子选择电极法测定氟含量
222尿砷尿氟发砷发氟检测：
知情意原留取受检者空腹晨尿密闭聚乙烯瓶中加酸（1HCl）防腐冷藏保存HGICP0ES(电感耦合等离子体发射光谱仪)测定尿砷含量采氟离子选择电极法测定尿氟含量（WST 89—1996）取枕部发际头皮3cm长头发处理（丙酮→乙醇→乙醚→非极性洗涤剂→离子水处理）干燥备HGICP0ES(
电感耦合等离子体发射光谱仪)测定尿砷发砷含量采氟离子选择电极法测定尿氟发氟含量（WST 89—1996）
223 血液采集免疫学指标检测：
知情意原菌抽取受检者清晨空腹肘静脉血1ml加入肝素抗凝T淋巴细胞亚群测定采集样品均存放20℃冰箱中保存备
单克隆抗体APAAP桥联酶标法测定外周血T细胞亚群CD3+CD4+CD8+细胞实验流程[7]取患者静脉血肝素抗凝加PBS+淋巴细胞分离液中离心吸出血浆分离液间单核细胞层PBS稀释离心取沉淀制成放粘片剂细胞涂片风干固定圈片份血涂4张片(CD3CD4CD8阴性1张)加鼠抗单克隆抗体湿盒室温作1 hPBS清洗加羊抗鼠IgG二抗室温作1hPBS清洗加APAAP复合物1 h加碱性磷酸酶底物显色液室温显色lhPBS洗苏木精复染液复染2 min水洗甘油明胶封片高倍镜计数200细胞阳性细胞分检出CD3+．CD4+CD8+ 细胞计算百分率CD4+／CD8+ 值
药盒APAAP试剂盒(购军事医学科学院)药品肝素(购SIGMA)磷酸氢二钠磷酸二氢钠丙酮戊二醛95％乙醇(均购**试剂公司)试剂APAAP桥联酶标技术求配制
3 质量控制
31 流行病学调查质量控制：调查前调查员进行培训掌握调查方法技巧统标准认识调查程中调查表漏项错项填写清等问题时纠正规定求采集检验标
32 实验室质量控制：种仪器妥善维护保养仪器前进行校准确保仪器处正常工作状态实验器皿实验求清洗位收集尿样聚乙烯瓶10HNO3浸泡洗净纯水烘干实验程中实验员严格实验操作规范进行实验标进行检测前校正品进行定标测试保证试剂药盒性实验试剂妥善存放定期清理查失效期
33 数信息质量控制：数录入统计软件前仔细进行核采双录入专数进行复核
4 数处理
Excel建立数库采SPSS115统计学软件数进行t检验方差分析检验水准α005
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